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《内蒙古农业大学》 2007年
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转基因冰草植株检测、抗性鉴定及原材料筛选研究

王桂花  
【摘要】: 本研究以获得的转基因冰草植株为材料,通过对转基因冰草植株的分子检测、抗性测定,获得转基因冰草植株并确定外源基因在冰草植株中的整合及表达,为转基因冰草植株的后期研究提供理论依据;确定转基因植株的抗旱、耐盐性,筛选抗性强的转基因冰草植株,尽可能短时间内培育出适合我国西部地区抗旱、耐盐的转基因冰草新品种。同时,通过9种冰草对干旱胁迫和盐胁迫的反应,筛选出评价冰草抗逆性的鉴定指标;并通过冰草抗旱、耐盐性评价,选出抗旱、耐盐性强的冰草品种,为改良我国西部地区沙化、盐渍化现象和进一步进行冰草的遗传转化提供基础材料。 本研究的初步结果如下: 1.PCR和Southern杂交确定bar、CBF4基因和p5CS基因已整合到冰草基因组中,在转CBF4-bar冰草植株检测中,获得了29株转bar基因冰草株系,转化频率为7.67%;31株转CBF4基因冰草植株,转化频率为8.20%;其中共转化植株为5株,共转化频率为1.32%。在转p5CS-bar基因冰草植株中,获得了26株转bar基因冰草植株,49株转p5CS基因冰草植株,其中共转化植株为15株,共转化频率为15.78%。转CBF4部分冰草植株的整合数为2-5;转bar冰草植株的整合数为1-3;转p5CS冰草植株的整合数为1-2。Northern杂交检测表明,部分转基因冰草植株中的外源基因在转录水平表达。 2.在干旱胁迫下,转CBF4基因冰草植株较未转基因植株的叶片相对含水量下降较慢;质膜透性、丙二醛含量增加较少;叶绿素含量较高;脯氨酸和可溶性蛋白含量增加较大;SOD、POD、CAT活性较高。转CBF4基因冰草植株抗旱性大于非转基因冰草植株,CBF4基因在转基因冰草植株体内表达。 3.在干旱胁迫和盐胁迫下,转p5CS基因冰草植株较未转基因植株的叶片相对含水量下降较慢;质膜透性、丙二醛含量增加较少;叶绿素含量较高;脯氨酸和可溶性蛋白含量增加较大;SOD、POD、CAT活性较高。转p5CS基因冰草植株抗旱性、耐盐性明显增加,p5CS基因在转基因冰草植株体内表达。 4.不同冰草对干旱胁迫和盐胁迫的反应程度不同,其抗旱、耐盐能力的大小是多种代谢的综合表现,单一的指标不能客观地反映其真实抗性。客观评价冰草抗旱、耐盐性应采用多种指标进行综合分析。 5.干旱胁迫下,冰草种子萌发和幼苗抗旱性强弱表现不同,综合评价9种冰草抗旱性强弱顺序为:249738,MN81282,1007790,268114。适合作为抗旱转基因冰草材料的是:249,MN和738三种冰草。 6.冰草种子和幼苗在盐胁迫下表现的耐盐性强弱不同,综合评价9种冰草耐盐性强弱顺序为:828121007114,738MN249790268。适合作为耐盐转基因冰草材料的是:82,812和1007三种冰草。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S543.9

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