收藏本站
《内蒙古农业大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

成年绒山羊皮肤干细胞的分离、纯化、鉴定与诱导

刘迎春  
【摘要】: 本研究旨在建立绒山羊皮肤干细胞的分离、纯化培养体系,并对其特性和分化潜能进行进一步探讨,以便为今后利用皮肤干细胞进行绒山羊毛囊的定向调控提供科学的理论依据。 选择健康成年绒山羊背部皮样,经中性蛋白酶4℃消化过夜,分离表皮和毛囊,用胰酶消化后解离细胞,再用IV型胶原粘附法对消化细胞进行筛选分离,经IV型胶原粘附10min的绒山羊皮肤干细胞直径较小,核质比较大,培养过程中能够形成鸟巢状、岛状和铺路石状等不同形状的细胞克隆,而且在传代的过程中,大多数细胞始终维持在G1/G0期,各代克隆形成率也比较高,部分细胞表达K15、K19、p63、CD34和β1-integrin,这些结果表明IV型胶原粘附筛选的细胞中包含有干细胞。 在此基础上,进一步选择生长状态良好的IV型胶原粘附后的第二代皮肤细胞作为克隆纯化的对象细胞,利用96孔板有限稀释法获得了形态较为原始,直径约为10μm的单细胞,经传代培养,该细胞能够形成典型的全克隆;而且,随传代次数增加,大多数细胞仍处于G1/G0期,保持着干细胞的慢周期性,有较高的克隆形成率,始终具有较大的增殖潜能和克隆遗传力;各代细胞冷冻复苏率与24小时贴壁率差异不显著(p0.05);大多数细胞的K15、K19、p63、CD34和β1-integrin等表面标志鉴定结果均呈阳性,分化标志K10和Involucrin检测结果呈阴性。在体外诱导实验中,这些纯化的干细胞能够被诱导生成神经元、神经胶质细胞、心肌细胞和成骨细胞,具有跨胚层分化潜能。以上结果充分证明了纯化的细胞就是绒山羊皮肤干细胞。 此外,通过β_1-integrin和CD34的FISH初步定位了绒山羊皮肤干细胞。其中,β_1-integrin主要表达于绒山羊皮肤毛囊的外根鞘和毛乳头尖部,而CD34则主要表达于毛囊的外根鞘、毛乳头尖部和皮肤的基底层。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S827

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 郑琰;内蒙古绒山羊皮肤干细胞定位的初步研究[D];内蒙古农业大学;2009年
【参考文献】
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 尹俊;内蒙古绒山羊毛囊发育、生长周期及相关基因的研究[D];内蒙古大学;2004年
2 杨学义;表皮干细胞建系及重建角膜缘干细胞缺损眼表研究[D];西北农林科技大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 李莉;5-氮杂胞苷在骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞中诱导机制的研究和自体骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死患者的临床观察[D];郑州大学;2005年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王训;韩永升;韩咏竹;胡纪源;李凯;喻绪恩;杨任民;杨斌;;成肌细胞移植治疗DMD模型-mdx鼠骨骼肌Dystrophin表达的实验研究[J];安徽医学;2009年02期
2 方林森,余又新;表皮干细胞研究进展[J];蚌埠医学院学报;2005年02期
3 程伟雄;吴北林;;非小细胞肺癌外周血内皮细胞关系初步探讨[J];当代医学;2010年14期
4 林雪梅;田雪莲;杨慧;宋姝丹;王莎莉;王亚平;;青蒿琥酯对K562细胞和脐血CD34~+造血干/祖细胞的选择性作用[J];第三军医大学学报;2007年20期
5 汪自庆;王国栋;刘云鹏;吴艳萍;;生命学科“大学物理”教学中的几点想法[J];大学物理;2010年09期
6 姚恒美,陈浩明,黄璐,沈琦,贾韦国,薛京伦;小鼠造血干细胞的分离、培养及重组慢病毒载体介导的离体hFⅨ基因表达[J];复旦学报(自然科学版);2005年04期
7 魏莉娜;朱永红;;腺垂体中的干细胞[J];解剖学研究;2005年04期
8 韩宝三;王兆海;彭承宏;李宏为;;肝干细胞来源研究进展[J];肝胆外科杂志;2006年06期
9 裴涌;洪晶;张昊;郭嘉术;;成人结膜干细胞定位特征的免疫组织化学研究[J];国际眼科杂志;2010年05期
10 赵志力;付小兵;孙同柱;杨银辉;陈伟;孙晓庆;盛志勇;;不同发育阶段人皮肤表皮干细胞增殖分化特征及其与创面修复结局关系的研究[J];感染.炎症.修复;2002年02期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 石娇;吴高峰;于维军;;骨髓基质干细胞的培养与鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
2 肖党生;俞玲娣;余国友;杨云梅;;干细胞与中医五行相生[A];浙江省中西医结合学会第二届老年病专业委员会第一次年会学术论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑景辉;心血瘀阻证心肌微环境变化及对骨髓间充质干细胞移植的影响[D];湖南中医药大学;2010年
2 谭琦;加味丹参饮诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究[D];湖南中医药大学;2011年
3 刘德胜;创新型中小企业基因及作用机理研究[D];山东大学;2011年
4 仲卫红;土鳖虫含药血清对激素诱导骨髓间充质干细胞成脂和成骨分化差异蛋白组学的影响[D];福建中医药大学;2011年
5 王干;应用组织工程学方法修复脊髓损伤基本问题的研究[D];清华大学;2010年
6 徐百耀;机械拉伸诱导人骨髓间充质干细胞向肌腱细胞定向分化及其力信号转导的实验研究[D];重庆大学;2011年
7 杨杰;诱导人乳腺脂肪来源干细胞向乳腺上皮样细胞分化的实验研究[D];华中科技大学;2012年
8 丁桂聪;人口腔粘膜上皮细胞生物学特性及组织工程粘膜的初步研究[D];第四军医大学;2001年
9 侯玲玲;间充质干细胞向神经细胞分化的研究[D];西北农林科技大学;2002年
10 程大胜;表皮细胞培养中维持干细胞特性相关技术的研究[D];第二军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡莎莎;急性心肌梗死后冠状动脉内移植骨髓间充质干细胞与单个核细胞对心脏结构及功能影响[D];南京医科大学;2010年
2 李程鹏;Mammosphere低表达蛋白GIPC1干扰对MCF-7乳腺癌细胞蛋白表达的影响[D];浙江理工大学;2010年
3 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
4 徐威;龙血生肌膏对大鼠失神经支配创面愈合过程中表皮干细胞分化影响的实验研究[D];浙江中医药大学;2010年
5 李士华;单味中药对兔骨髓基质细胞增殖影响的实验研究[D];山东中医药大学;2008年
6 陈文超;大鼠脑组织匀浆对其BMSCs向神经元样细胞分化的影响[D];山西医科大学;2011年
7 张福丽;间充质干细胞治疗肺动脉高压研究进展(附肺动脉高压发病机制进展)[D];山西医科大学;2011年
8 李洪蕾;神经干细胞低温保存的传质渗透特性研究[D];大连理工大学;2011年
9 吴珲;神经干细胞玻璃化冻存及其生物学特性的研究[D];大连理工大学;2011年
10 刘志鹏;大鼠胎盘来源间充质干细胞的生物学特性[D];暨南大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 龚志锦,陶文照,詹鎔洲,郑唯强;显示AgNOR的改良染色效应在实验动物肿瘤中的应用[J];动物学杂志;1995年02期
2 郁枫;影响羊毛生长的遗传和环境因素[J];草食家畜;1993年01期
3 杨学义,曹斌云,窦忠英,雷安民;成年山羊皮肤干细胞的分离与克隆[J];草食家畜;2001年S2期
4 吕中法,刘荣卿,伍津津;毛乳头细胞与毛囊生长周期[J];重庆医学;2000年02期
5 晏炬;;抗BrdU单克隆抗体技术[J];国外医学(分子生物学分册);1993年02期
6 郑琰;席海燕;周欢敏;;5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷标记内蒙古绒山羊皮肤组织的免疫组织化学检测[J];中国畜牧兽医;2009年04期
7 席海燕;郑琰;周欢敏;;内蒙古绒山羊皮肤干细胞定位的初步研究[J];湖北农业科学;2009年02期
8 仇文颖,许增禄;毛囊干细胞的研究进展[J];基础医学与临床;2002年04期
9 李新明;非放射性标记物BrdU研究进展[J];口腔材料器械杂志;1998年01期
10 邓汝东;;免疫组化染色的体会[J];临床和实验医学杂志;2008年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 尹俊;内蒙古绒山羊毛囊发育、生长周期及相关基因的研究[D];内蒙古大学;2004年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李金泉,尹俊;绒山羊育种研究现状及展望[J];草食家畜;2001年01期
2 贾志海,安民;山羊绒生长机理研究进展[J];草食家畜;1996年01期
3 李金泉,尹俊,周欢敏;绒山羊绒毛生长调控机理研究进展[J];中国草食动物;2001年03期
4 郑中朝;藏羚羊绒纤维特性的研究[J];中国草食动物;2001年04期
5 王树迎,张金花;羊皮肤组织结构上的种间差异[J];中国草食动物;2001年05期
6 闫国和,粟永萍,艾国平,林远,程天民,可金星,黄文琪;人羊膜负载猪角朊细胞重建表皮的形态学研究[J];第三军医大学学报;2002年08期
7 韩军涛,陈璧;胎鼠表皮干细胞的分离培养及毛囊再生[J];第四军医大学学报;2003年01期
8 段红艳;骨髓细胞移植对心肌梗死后心功能影响的研究进展[J];实用诊断与治疗杂志;2003年04期
9 付小兵 ,盛志勇 ,王正国;进一步重视从发育和比较生物学来研究创伤后的组织修复与再生[J];解放军医学杂志;2002年05期
10 程大胜 ,夏照帆,唐洪泰,田建广,王皓;一种表皮干细胞检测方法的建立[J];解放军医学杂志;2003年06期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 宋晓平;小鼠胚胎干细胞定向诱导分化成骨细胞研究[D];西北农林科技大学;2003年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 关红梅,王转子;常用DNA的分离与纯化技术简介[J];中兽医医药杂志;1998年04期
2 马洪利;韩宏岩;裴超俊;许维岸;;宽体金线蛭抗凝物质的提取与纯化[J];安徽农业科学;2011年23期
3 王永芬;张晓静;李华玮;吴学军;王德亮;;复方中药免疫球蛋白制剂的研制与应用[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2010年10期
4 刘迎春;周欢敏;高峰;;成年绒山羊皮肤干细胞的分离与鉴定的初步研究[J];自然科学进展;2007年02期
5 韩立敏;;分子蒸馏在天然产物研究中的应用[J];安徽农业科学;2009年17期
6 席海燕;郑琰;周欢敏;;内蒙古绒山羊皮肤干细胞定位的初步研究[J];湖北农业科学;2009年02期
7 张智俊,谭晓风,陈永忠;油茶总RNA及mRNA的分离与纯化[J];中南林学院学报;2003年02期
8 史明艳;杨学义;赵清梅;韩雅婷;窦忠英;;组织块法分离山羊皮肤干细胞研究[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2006年06期
9 黄静;杨宇峰;卞慧芳;郁正艳;徐进;吴自荣;;聚乙二醇修饰蛋白的快速分离与纯化[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2009年04期
10 席海燕;郑琰;周欢敏;;BrdU标记内蒙古绒山羊皮肤干细胞的初步研究[J];黑龙江畜牧兽医;2009年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周建大;陈道瑾;罗成群;;成年皮肤干细胞原位培植研究的哲学思考[A];第七届全国烧伤创疡学术会议论文汇编[C];2002年
2 杨学义;曹斌云;窦忠英;雷安民;;成年山羊皮肤干细胞的分离与克隆[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
3 王美艳;陈明杰;;草菇低温诱导蛋白的分离与纯化[A];全国第6届食用菌学术研讨会论文集[C];2001年
4 傅小兵;孙晓庆;孙同柱;董永洪;顾小曼;陈伟;盛志勇;;表皮细胞生长因子通过诱导皮肤干细胞分化和加速受创上皮再生[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
5 王朝华;刘云惠;董金皋;;玉米大斑病菌致病毒素特异性毒性组分的分离与纯化[A];中国植物病理学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2002年
6 屠幼英;童启庆;赵芹;渡边修治;Fleishmann.P;;茉莉花芳樟醇β-D吡哺葡萄糖苷酶的分离与纯化[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
7 朱汉明;夏腊菊;柯三才;;七叶皂甙纳分离与纯化方法学的研究[A];湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第七届第十四次学术年会论文摘要集[C];2003年
8 周晓芳;徐国兴;;干细胞应用于治疗视网膜疾病的研究进展[A];第十届全国中西医结合眼科学术会议暨第五届海峡眼科学术交流会论文汇编[C];2011年
9 李桢;高明远;;一步法制备生物相容性磁性纳米微粒及其在生物医学领域的应用[A];中国化学会第十届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2004年
10 吴大鹏;贺大林;南勋义;;小鼠精原干细胞异向分化的初步实验研究[A];21世纪男科学——中华医学会第五次全国男科学学术会议论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 邰举;韩从伤口组织提取皮肤干细胞获成功[N];科技日报;2009年
2 记者 白毅;我学者揭示皮肤干细胞衰老新机制[N];中国医药报;2011年
3 刘霞;科学家在毛囊中发现“皮肤干细胞之母”[N];科技日报;2010年
4 记者 朱敏丽;“人工皮肤”在药城实现产业化[N];泰州日报;2010年
5 ;加科学家研究用皮肤干细胞代替胚胎干细胞[N];中国高新技术产业导报;2001年
6 王小龙;美用皮肤干细胞培育出视网膜细胞[N];科技日报;2009年
7 记者 邓雪灵;预备一张光滑的脸[N];信息时报;2003年
8 三元顾问;天科股份 超跌低价 反弹先锋[N];证券时报;2004年
9 罗明典;组织仿生学的应用研究[N];科技日报;2002年
10 张明江;人类皮肤原位再生成现实[N];工人日报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 刘迎春;成年绒山羊皮肤干细胞的分离、纯化、鉴定与诱导[D];内蒙古农业大学;2007年
2 廖海;两种决明子Cassia tora,Cassia obtusifolia蛋白酶抑制剂的纯化、性质与功能研究[D];四川大学;2007年
3 刘红;益智的抗氧化作用及成分研究[D];华南理工大学;2006年
4 王长振;海带硫酸多糖蛋白复合物的分离纯化及其生物活性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王菁;UVB对体外培养皮肤干细胞某些标记分子表达的影响研究[D];福建医科大学;2010年
2 杨学义;成年山羊皮肤干细胞分离与克隆[D];西北农林科技大学;2001年
3 崔香菊;家蚕皮肤胰蛋白酶抑制剂和血管紧张素转化酶抑制剂的初步分离纯化及性质研究[D];南京农业大学;2007年
4 雷霆华;绵羊皮肤类干细胞的分离、培养和鉴定[D];中国农业大学;2005年
5 康庄;菠菜种子胰蛋白酶抑制剂分离纯化与性质研究[D];四川大学;2005年
6 范美霞;粗毛栓菌木聚糖酶的分离纯化及性质研究[D];四川师范大学;2009年
7 赵勇;海洋细菌YSC-1及其高铁还原酶的研究[D];山东大学;2005年
8 刘大勇;山羊皮肤干细胞及绿色荧光蛋白基因转染研究[D];西北农林科技大学;2006年
9 许永平;电刺激和延迟冷却对牛背最长肌中Calpains影响的研究[D];山东农业大学;2007年
10 郑琰;内蒙古绒山羊皮肤干细胞定位的初步研究[D];内蒙古农业大学;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026