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《内蒙古农业大学》 2008年
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牛磺胆酸对小鼠免疫细胞功能的调节作用研究

王彩云  
【摘要】: 本文旨在通过观察TCA对小鼠巨噬细胞和T、B淋巴细胞的影响,探讨TCA对机体免疫细胞功能的调节作用及其作用机理。其主要内容包括: 为了阐明TCA对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响,本研究分别采用鸡红细胞半体内法和体外培养的腹腔巨噬细胞吞噬中性红法测定了TCA对体内、外小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响,结果证明,高、低剂量的TCA均能极显著的提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率(P0.01) ,显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的鸡红细胞吞噬指数,0.015、0.3、1.5和15μg/mL的TCA均能显著提高体外培养小鼠腹腔巨噬细胞对中性红的吞噬率(P0.05) ,表明TCA具有提高巨噬细胞吞噬功能的作用。采用ELISA法测定了TCA对小鼠巨噬细胞分泌白介素-1β的影响,试验结果表明,高、低剂量的TCA均能极显著提高正常和免疫抑制小鼠血清中的含量(P0.01),1.5和15μg/mL的TCA可显著提高体外培养小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β的分泌量(P0.01),0.015和1.5μg/mL的TCA可极显著提高LPS活化的小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β的分泌量(P0.01),0.3和15μg/mL的TCA可显著提高LPS活化的小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β的分泌量(P0.05),表明TCA具有促进腹腔巨噬细胞的分泌IL-1β的功能。采用ELISA法,检测了TCA对正常和免疫抑制模型小鼠血清中TNF-α含量的影响,结果证明,TCA能够极显著的提高正常小鼠和免疫抑制小鼠血清中TNF-α的含量(P0.01),表明TCA具有刺激巨噬细胞分泌TNF-α功能。采用MTT法检测了TCA对正常的腹腔巨噬细胞和适量LPS和CsA刺激的腹腔巨噬细胞增殖反应的影响,试验结果表明,0.15、0.3、3和15μg/mL的TCA可极显著提高小鼠腹腔巨噬细胞增殖活性(P0.01),且其作用峰期在用药后的12h;0.3μg/mL的TCA可显著增强LPS刺激的腹腔巨噬细胞的增殖反应(P0.05) ,0.015、0.3、1.5和15μg/mL的TCA对CsA抑制的腹腔巨噬细胞的增殖反应有显著的恢复作用(P0.05),表明TCA具有刺激巨噬细胞增殖分化的作用。为了阐明TCA对B、T淋巴细胞功能的调节作用及其作用机理,本研究采用MTT法检测了TCA对正常和适量LPS、ConA及CsA刺激的体外培养的小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响,试验结果表明,随TCA浓度的逐渐增大,小鼠脾淋巴细胞的增殖活性逐渐增强,且其作用峰期在加药后24h,15μg/mL的TCA可显著提高体外培养的小鼠脾淋巴细胞的增殖活性(P0.05),可极显著提高LPS刺激活化的小鼠脾淋巴细胞的增殖活性(P0.01),可极显著提高CsA抑制的脾淋巴细胞的增殖活性(P0.01),表明TCA具有增强小鼠脾淋巴细胞的增殖活性的功能。采用流式细胞术双抗标记法检测TCA对正常和免疫抑制模型小鼠外周血和脾脏中T、B淋巴细胞及其亚群的影响,试验结果表明,高、低剂量的TCA均可极显著地提高小鼠外周血CD3+细胞、CD4+细胞、细胞百分率及CD4+/CD8+的比值(P0.01),低剂量的TCA可极显著地提高外周血和脾脏CD19+细胞百分率(P0.01),高剂量TCA能够极显著恢复被CsA抑制的小鼠外周血和脾脏CD3+细胞百分率(P0.01),而低剂量的TCA则极显著地恢复被CsA抑制的小鼠外周血和脾脏CD19+细胞百分率(P0.01),高、低剂量的TCA都能极显著地提高被CsA抑制的小鼠外周血CD4+和CD8+细胞百分率及CD4+/CD8+的比值(P0.01)高、低剂量的TCA均能极显著提高小鼠脾脏CD3+细胞的百分率(P0.01), 表明TCA作用于机体后可引起辅助性T细胞和诱导性T细胞的增多,抑制性T细胞减少,从而增强机体的细胞免疫应答反应,增加B淋巴细胞的百分率,从而增强机体的体液免疫应答反应。采用ELISA法测定了健康小鼠和免疫抑制小鼠血清中以及体外培养小鼠脾淋巴细胞上清液中IgG的含量,试验结果表明,TCA可显著提高健康小鼠血清中IgG的含量(P0.05),显著提高体外培养小鼠脾淋巴细胞IgG的分泌量(P0.05),显著恢复被CsA抑制的小鼠脾淋巴细胞的IgG分泌量(P0.05),显著增强被LPS刺激的脾淋巴细胞IgG分泌量(P0.05),表明TCA具有刺激B淋巴细胞分泌IgG作用;采用实时荧光定量RT-PCR方法检测了正常和免疫抑制模型小鼠脾脏IL-2基因的相对表达量以及体外培养的正常和适量LPS和ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞IL-2基因的相对表达量,并采用ELISA方法检测了TCA对正常和适量LPS、ConA及CsA刺激的脾淋巴细胞分泌IL-2的影响,试验结果表明,低剂量TCA可极显著的提高免疫抑制小鼠脾脏IL-2 mRNA的表达(P0.01),但对小鼠体外培养的脾淋巴细胞IL-2基因的表达却表现为极显著降低作用(p0.01),不同浓度TCA均有促进体外培养的脾淋巴细胞分泌IL-2蛋白的作用,并呈现剂量依赖关系,而且TCA可显著提高LPS、ConA活化的脾淋巴细胞IL-2分泌量(P0.05),显著提高被CsA抑制的脾淋巴细胞IL-2分泌量(P0.05)。 结论:TCA对机体非特异性免疫功能的调节作用,是通过增强巨噬细胞的吞噬功能和增殖反应以及提高巨噬细胞的分泌功能,或使受到抑制的巨噬细胞分泌IL-1β和TNF-α的功能得到恢复而实现的;TCA对小鼠机体特异性免疫功能的调节作用,与其提高或恢复小鼠外周血和脾脏T、B淋巴细胞的增殖或分泌功能有密切关系。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S853.7

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