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《内蒙古农业大学》 2009年
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绵羊受精素β去整合素结构域的表达及其特异性抗体的制备

丽娜  
【摘要】: 精卵结合机制的研究,一方面是动物受精生理的一个重要理论问题,另一方面在免疫避孕及免疫不孕等实际应用中也具有重要意义。受精素β作为少数几种在精卵质膜结合与融合中发挥重要作用的精子膜表面蛋白之一,是多种哺乳动物精子膜均具有的重要蛋白。它属于ADAMs家族,具有ADAMs家族的完整结构域。在受精素β的多个保守性结构域中,去整合素区域作为卵细胞上整合素的配体是其发挥重要生理功能的最主要的功能区。 本研究将绵羊受精素β作为外源性抗原,通过基因重组技术将编码受精素β去整合素结构域的cDNA序列插入表达载体高拷贝质粒PGEX-4T-1中,构建重组质粒PGEX-4T-sf279并转化大肠杆菌BL21(DH3)中,成功地构建了能够稳定表达绵羊受精素β去整合素结构域蛋白的重组大肠杆菌疫苗株。本研究的主要结果和结论如下: 1、根据绵羊受精素βcDNA全序列设计其去整合素结构域上下游引物,利用PCR方法扩增编码该区域的cDNA片段,将其插入原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组质粒PGEX-4T-sf279; 2、将含绵羊受精素β去整合素结构域cDNA序列的重组质粒PGEX-4T-sf279转化入大肠杆菌BL21(DH3)中,用IPTG诱导成功表达了大量融合蛋白,然后利用GST亲和树脂层析纯化,制备了纯度很高的蛋白抗原。 3、免疫6-8周龄昆明小鼠,制备了小鼠抗羊多克隆抗血清。经Western Blot分析显示,多克隆抗血清可与纯化的绵羊重组蛋白发生特异性反应,说明重组蛋白具有抗原活性。. 4、本研究为进一步进行绵羊受精素β蛋白在精卵结合和融合过程中的功能研究奠定了基础。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S826

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【参考文献】
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