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《内蒙古农业大学》 2010年
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猪星状病毒的分离鉴定和荧光定量PCR检测方法的建立

商晓桂  
【摘要】: 星状病毒(Astrovirus)属于人兽共患病病原,能感染人和猪、犬等多种动物,广泛分布于世界各地。本研究旨在调查上海地区某些养猪场星状病毒的感染情况,并建立一种快速、简便、高灵敏度的猪星状病毒荧光定量PCR检测方法,为更好地预防猪星状病毒感染和传播提供依据。 通过对上海郊区某猪场疑似猪星状病毒感染猪的粪样进行病毒分离和纯化,获得一株能在PK-15细胞上增长繁殖,并使该细胞产生破碎、脱落等细胞病变的病毒,电镜观察结果显示,该病毒呈典型的星状结构,直径为28~30nm;初步证明所分离到的病毒为星状病毒。动物回归试验被攻毒猪都出现了星状病毒感染的临床症状;取感染猪肠内容物,经RT-PCR检测到猪星状病毒目的条带,结果表明,该猪场患病猪为星状病毒感染。 通过RT-PCR方法扩增猪星状病毒ORF2基因片段,将其作为标准模板建立标准曲线和熔解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性的验证试验。结果显示,所建立的猪星状病毒荧光定量PCR检测方法灵敏度可达10个拷贝,是普通PCR检测方法的100倍,特异性和重复性较好,可用于猪星状病毒的检测,为猪星状病毒感染的调查及诊断提供了重要的技术支持。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S852.65

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 兰家暖;郭旋;刘磊;张民秀;卢冰霞;廖承球;黄福标;黄伟坚;;猪星状病毒的分离鉴定及其致病性研究[J];中国畜牧兽医;2012年07期
2 兰家暖;刘磊;郭旋;张民秀;卢冰霞;黄福标;覃熊慧;张宁;黄伟坚;;广西猪星状病毒分子流行病学调查[J];中国预防兽医学报;2012年08期
3 兰家暖;刘磊;郭旋;刘欢;卢冰霞;张民秀;廖承球;黄伟坚;;猪星状病毒ORF2基因的克隆及序列分析[J];中国兽医杂志;2012年12期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 方肇寅,章菁,赵章华,马莉,李永华,杨辉,S.Monroe,R.Glass;我国河南与北京腹泻患儿中的星状病毒感染[J];病毒学报;2000年02期
2 王守忠;仔猪感染性腹泻的致病因素及其诊断思路[J];当代畜禽养殖业;2002年07期
3 陆承平;介绍新的动物病毒分类[J];动物检疫;1993年02期
4 刘春艳,申昆玲,王树欣,照日格图;北京儿童医院住院的腹泻患儿星状病毒感染分析[J];中华儿科杂志;2002年07期
5 郭志儒;动物病毒分类新动态[J];中国兽医学报;2003年03期
6 于维军;星状病毒研究进展[J];中国兽医杂志;1992年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 何国芳;星状病毒感染的研究现状[J];安徽医药;2004年04期
2 ;The complete genomic sequence analysis of genotype 4 human astrovirus HASTVgz01 strain in Guangzhou[J];Journal of Microbiology and Immunology;2006年03期
3 方忠意,崔保安;脊椎动物病毒分类的新近变化[J];动物医学进展;2005年06期
4 刘二龙;唐婕;;脊椎动物病毒分类现状[J];动物医学进展;2006年11期
5 耿岚岚;龚四堂;何婉儿;;2003~2006年广州地区婴幼儿水样腹泻的病原学分析[J];广东医学;2008年08期
6 邹国锋;;蒙脱石散联合利巴韦林治疗小儿急性病毒性腹泻临床观察[J];白求恩军医学院学报;2013年01期
7 盛伟松;于宝生;蒋敏;甘卫华;张爱青;;婴幼儿腹泻的病毒学检测分析[J];南京医科大学学报(自然科学版);2008年03期
8 闫梅;西宁地区婴幼儿病毒性腹泻的病原分析[J];青海医药杂志;2005年09期
9 张银辉;罗小芳;王琼;朱新建;黄烈;邱羽;杨来智;陆学东;;深圳地区413例急性腹泻婴幼儿星状病毒感染分析[J];中国热带医学;2011年07期
10 吴立梦;翁康生;陆晔;陈敏;吴凡;王文静;;人星状病毒1型衣壳蛋白原核表达、纯化及多克隆抗体制备的研究[J];生物医学工程与临床;2012年03期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 单同领;病毒宏基因组学分析儿童和猪肠道病毒群落及23株病毒的初步研究[D];上海交通大学;2011年
2 司兴奎;猪圆环病毒2型感染对猪免疫功能影响的细胞与分子机制[D];中国农业大学;2005年
3 乔军;犬冠状病毒基因疫苗与重组腺病毒的构建、表达及免疫原性研究[D];吉林大学;2005年
4 龚智翔;上海地区儿童病毒性腹泻分子流行病学研究[D];第二军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴立梦;人星状病毒1型衣壳蛋白的序列分析、克隆表达及多克隆抗体制备[D];东华大学;2011年
2 罗璇;婴幼儿病毒性腹泻的流行病学研究[D];兰州大学;2011年
3 姜盛;吉林、兰州地区婴幼儿星状病毒腹泻分子流行病学研究[D];安徽理工大学;2011年
4 朱爱玲;犬星状病毒(Canineastrovirus,CaAstv)半巢式RT-PCR检测方法的建立及基因序列分析[D];上海交通大学;2012年
5 高凤山;大熊猫犬冠状病毒的分离鉴定及S基因部分序列的测定和分析[D];吉林农业大学;2003年
6 关振宏;大熊猫犬冠状病毒S基因的扩增、克隆和序列分析[D];吉林农业大学;2004年
7 马光刚;犬科动物中犬冠状病毒的检测、分离及其S、M基因分析[D];南京农业大学;2005年
8 逄博;大熊猫犬冠状病毒动物感染试验及其荧光检测方法的建立[D];吉林农业大学;2005年
9 叶新华;兰州地区小儿病毒性腹泻的临床流行病学研究[D];兰州大学;2006年
10 杨学梅;兰州地区2005-2006年婴幼儿病毒性腹泻病原学研究[D];兰州大学;2007年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 刘春艳,申昆玲;星状病毒分子生物学研究进展[J];中华实验和临床病毒学杂志;2003年01期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 窦永喜,王云;猪繁殖和呼吸系统综合征病毒的分子生物学研究进展[J];动物医学进展;2001年04期
2 顾其根;猪繁殖呼吸障碍综合症的诊治[J];浙江畜牧兽医;2001年04期
3 朵红;猪生殖和呼吸系统综合症[J];青海畜牧兽医杂志;2000年01期
4 郭万柱,冯炳芳,汪铭书,蒋文灿;狂犬病Flury HEP株的复制及其某些生物学性质的观察[J];四川农业大学学报;1994年02期
5 朱其太;病毒分类的新动态[J];中国动物检疫;1999年04期
6 钱忠明,周继宏,朱国强,严维巍,庄国宏,周明荣;鹅副粘病毒病流行病学和血清学研究[J];中国家禽;1999年10期
7 包世俊,扈荣良;猪的副黏病毒病简介[J];中国兽医科技;2002年10期
8 谷宁林;病毒分类的新进展[J];中国兽医科技;1996年02期
9 刘华雷,王永坤,严维巍,朱国强,周继宏,李玉峰;鹅副粘病毒F蛋白基因的克隆和序列分析[J];中国预防兽医学报;2000年06期
10 蔡宝祥;猪繁殖与呼吸综合征研究进展[J];中国兽医学报;1995年04期
【相似文献】
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1 阎玉河,许威光,陈辉,马增全,朱元晓,蔡仕英;旋毛虫肌幼虫ES抗原的基因克隆及高效表达[J];生物工程学报;1994年01期
2 卢一凡,邓继先,肖成祖,马清钧;一种快速鉴定转基因鼠的方法[J];生命科学研究;1998年04期
3 许蕾,徐磊,李学礼,吕立夏,谈洁,王尧;PCR介导化学合成广谱细胞生长因子基因半分子[J];上海铁道大学学报;1999年01期
4 蒋正军,龚振华,尹燕博,王树双,蔡丽娟,郭福生,陆明哲,孙承英,宣华;应用PCR检测非洲猪瘟病毒的研究[J];中国预防兽医学报;2000年S1期
5 张晚鸣,马立新;土曲霉CCTCCAF93044植酸酶基因的克隆及序列分析[J];湖北大学学报(自然科学版);2001年02期
6 刘忠权,周材权,王义权,周开亚;分子遗传标记技术在中药材鉴定中的应用[J];世界科学技术-中药现代化;2001年05期
7 彭颖,熊汉华,黄庆华,熊薇,许迪,叶嗣颖;幽门螺杆菌全长基因cagA扩增及限制性酶切片段多态性研究[J];中国微生态学杂志;2001年03期
8 张巍,沈倍奋,黎燕,郭宁,冯健男;用一种新型的PCR方法快速制备人TNF-α缺失突变体[J];中国生物化学与分子生物学报;2002年05期
9 张为民,张安世;PCR技术简介及其应用[J];河南教育学院学报(自然科学版);2002年03期
10 张巍,沈倍奋;一种快速简便的定点突变方法[J];免疫学杂志;2003年S1期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈红;谢丽;胡文静;禹立霞;钱晓萍;刘宝瑞;;荧光定量PCR方法检测MDM2 T309G位点多态性[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年
2 何俊;柳小春;蒋隽;贺长青;黄生强;马海明;;小肠组织中ATP2B1基因的荧光定量PCR分析[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
3 吴驰;张红梅;詹能勇;邓永聪;单万水;余卫业;;荧光定量PCR技术在肺结核诊断中的临床应用研究[A];2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会汇编[C];2010年
4 裴兵;夏寿扬;吴辉;;荧光定量PCR检测HCV RNA的测量不确定度评定[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
5 孔艳;吴小红;杨立宏;安祺;董关木;俞永新;;逆转录酶活性检测荧光定量PCR方法[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
6 张红漫;李志惠;吴树才;刘朋冲;赵杰;李毅;崔丹;冯秀莉;;荧光定量PCR测定在结核性胸膜炎的诊断价值[A];中华医学会结核病学分会2011年学术会议论文汇编[C];2011年
7 曹杰;仝彩玲;周勇志;张厚双;周金林;;荧光定量PCR检测硬蜱体内莱姆病螺旋体的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
8 张凤英;石彦红;马凌波;;荧光定量PCR方法快速检测环状异帽藻的研究[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
9 王志梅;贾广乐;张映;;牛结核病TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
10 贾广乐;梅琳;王慧煜;林祥梅;韩雪清;;牛结核TaqMan荧光定量PCR方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 通文;Bio—Rad公司推出快速定量PCR反应液[N];中国医药报;2008年
2 通言;ABI实时定量PCR仪获准与rRT—PCR Flu Panel联用[N];中国医药报;2008年
3 湘雅医院儿科 祁伯祥;治疗腹泻 重在补液[N];大众卫生报;2002年
4 王淑军;五种病毒有无 一次检测便知[N];人民日报;2007年
5 本报记者 李颖;多元产品的创新之道[N];科技日报;2011年
6 郭伟立;实时、个体、高效[N];中国医药报;2011年
7 范宏国 邹青;一个校办企业的腾飞历程[N];人民日报海外版;2010年
8 记者 周斌伟 通讯员 何琳;苏州今年利用DNA技术破案656起[N];人民公安报;2010年
9 陈前进;市疾控中心建立手足口病实验室检测平台[N];闽西日报;2008年
10 花群义 曾少灵;深圳局非洲猪瘟病毒快速检测技术获专利[N];中国国门时报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张在平;荧光定量PCR检测禽白血病病毒与RNA干扰抑制J亚群禽白血病病毒复制的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
2 渠柏艳;基于血液样品和微流控芯片技术的细胞分离、PCR扩增及DNA测序方法研究[D];东北大学;2009年
3 张丽;实时定量PCR检测儿童急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因[D];北京协和医学院;2011年
4 李泽松;缺失型α-地中海贫血基因诊断芯片及在分子流行病学研究中的应用[D];重庆大学;2008年
5 陈智勇;胰腺癌相关基因mucin4的初步研究[D];第二军医大学;2005年
6 王彦君;细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4基因微卫星多态性与炎症性肠病相关性研究[D];吉林大学;2008年
7 肖性龙;多重荧光PCR与液相芯片高通量病原体检测体系的建立与应用[D];华南理工大学;2010年
8 马孟根;猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR和基因芯片检测技术研究[D];四川大学;2005年
9 夏乾峰;二聚体突变引物定量PCR技术的研发及其临床应用[D];重庆医科大学;2011年
10 龚智翔;上海地区儿童病毒性腹泻分子流行病学研究[D];第二军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 商晓桂;猪星状病毒的分离鉴定和荧光定量PCR检测方法的建立[D];内蒙古农业大学;2010年
2 饶春梅;荧光定量PCR检测社区获得性肺炎患者痰标本中肺炎链球菌的研究[D];大连医科大学;2010年
3 金戈;博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达和p24片段荧光定量PCR试剂盒的研制开发[D];重庆医科大学;2011年
4 王勇;荧光定量PCR检测社区获得性肺炎患者咽拭和痰标本肺炎支原体的研究[D];大连医科大学;2010年
5 胡伟昭;副溶血弧菌:分子分型与主要耐药基因双重PCR检测[D];浙江大学;2010年
6 刘大伟;猪瘟兔化弱毒疫苗株荧光定量RT—PCR检测方法的建立及初步应用[D];安徽农业大学;2010年
7 唐九歌;三联放大技术与荧光定量PCR在血液筛查乙型肝炎病毒中的比较[D];新疆医科大学;2010年
8 魏琼;沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌多重荧光定量PCR快速检测方法的研究[D];吉林农业大学;2011年
9 陈继军;TaqMan实时定量PCR检测轮状病毒G4型VP7基因方法的建立[D];兰州大学;2010年
10 郭庆;葡萄根瘤蚜的荧光定量PCR检测及间种植物防控研究[D];中国农业科学院;2011年
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