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《内蒙古农业大学》 2010年
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实时多重荧光PCR快速鉴别布鲁菌方法的建立

刘志国  
【摘要】: 应用实时多重荧光PCR技术建立快速鉴别布鲁菌的方法。以布鲁菌特异性基因BCSP31,ALKB/IS711和BMEII1162/IS711的部分保守片段作为靶基因,分别设计探针引物以及建立多重荧光PCR扩增体系。应用实时多重荧光PCR技术检测布鲁菌结果显示,布鲁菌属、牛种布鲁菌和羊种布鲁菌有荧光信号,而其他生物型布鲁菌株及与其同源性较高的致病菌均未见荧光信号;将其扩增产物作为靶基因克隆到PUCm18-T载体,制备标准品及标准曲线。扩增梯度稀释的标准品以确定此方法的灵敏性。应用布鲁菌的其他生物型菌株和同源性较近的致病菌8株(汉赛巴尔通体1株、霍乱弧菌1株、土拉弗朗西斯菌1株、大肠杆菌O:157 1株、大肠杆菌O:161株、小肠结肠耶尔森菌O:9 1株、沙门氏菌N群血清型菌1株、嗜麦芽假单胞菌1株)验证试验的特异性,对97株布鲁菌提取DNA进行检测,从而达到快速鉴别布鲁菌的目的。该试验的单重,多重检测灵敏性均为7.68、7.58、7.54×102copy/μl或13~24fg/μl;而该引物的常规PCR检测灵敏性为7.68、7.58、7.54×104copy/μl或130~240pg/μl。试验能够特异的鉴别布鲁菌、牛种布鲁菌和羊种布鲁菌,同时具有敏感性高、快速易操作等优点,可用于布鲁菌的快速鉴别诊断、疾病监测以及疫情病原调查。
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S855.1

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