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流感裂解灭活疫苗纯化工艺的开发

杜丽娟  
【摘要】:流感病毒具有高度的传染性,并能引起急性呼吸道传染疾病,它的流行特点是在短期内突然爆发,迅速蔓延,造成不同程度的流行,其中包括世界大流行、局部流行暴发及散发。它的发病率极高,并伴有很高的死亡率。目前尚无特效药,接种流感疫苗被认为是预防流感发生与传播的最佳方法。 本文首先将H_1N_1、H_3N_2、B三种不同型别的流感病毒(Influenza virus)分别接种于普通鸡胚,经培养后,收获其病毒原液,然后进行超滤浓缩、纯化、裂解、二次纯化及灭活等步骤,最后将三种型别的病毒液合并,制成疫苗,确定了一套较完整的流感裂解灭活疫苗工艺。同时对该工艺中的两种纯化方法—蔗糖密度梯度离心与Sepharose4FF层析进行了摸索、比较,最后从产业化角度考虑,确定了较佳的生产工艺。 对两种不同纯化方法得到的病毒原液进行质量分析,结果表明:用两种方法纯化后的病毒液质量都达到WHO规定的要求。两者均可作为流感疫苗(Influenza Vaccine)的纯化方法。但在卵清蛋白及杂蛋白去除方面,Sepharose 4FF层析法要稍好于蔗糖密度梯度离心。层析法的卵清蛋白去除率可达到99.3%以上,蔗糖密度梯度离心法可达到97.5%上。杂蛋白去除率:Sepharose 4FF层析法的为89.2%以上;蔗糖密度梯度离心法的为87.5%以上。而在回收率方面蔗糖密度梯度离心法为40.7%以上,Sepharose 4FF层析为37.5%以上。由此可见蔗糖密度梯度离心法要高于Sepharose 4FF层析法。在细菌内毒素去除方面,两种方法均达到WHO规定标准,且无大的差别。 鉴于产品开发要求,试验研究确定选用蔗糖密度梯度离心方法作为流感疫苗的纯化手段。并对用该法纯化的流感病毒液进行了后序工作的研究,对研制的疫苗成品进行了相关检测,其结果均符合WHO标准要求。


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