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《大连理工大学》 2007年
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玻璃化法低温保存脐血造血干细胞的研究

刘铭彦  
【摘要】: 脐血中含有丰富的造血干细胞,是继骨髓和外周血之后新近发现的造血干细胞的又一来源。为了更有效地利用脐血造血干细胞,脐血造血干细胞的低温保存便成为一个重要的课题。目前,脐血造血干细胞的低温保存主要采用的是慢速冻存方法,但是这种方法的冻存效果以及冻存技术还有需要提高和完善的地方;玻璃化法作为一种新型的、简便的低温保存方法可以有效地克服慢速冻存的缺点,但是玻璃化法需要高浓度的保护剂才能实现,这会给细胞带来很大的渗透损伤和毒性损伤。本文对联合玻璃化保护剂的特性,联合玻璃化保护剂的导入、洗脱程序以及脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程等方面的问题进行了较为系统的研究。 首先对联合玻璃化保护剂的特性进行了研究。联合玻璃化保护剂的组成为:25%DMSO、17%甲酰胺、10%1,2-丙二醇和6%聚乙二醇(w/v)。通过稀释的方法测定了不同浓度的联合玻璃化保护剂的渗透压值。通过冷台观察发现当降温速率低于30℃/min时,保护剂不能实现玻璃化。提高复温速率能够有效地减少反玻璃化过程中冰晶的数量,抑制冰晶的生长。同时经实验确定,采用一步导入方法进行保护剂导入时会对造血干细胞造成严重的渗透损伤和毒性损伤。 其次对脐血造血干细胞联合玻璃化保护剂的导入洗脱过程进行了优化。通过采用分五步、不同平衡时间的方法对导入洗脱过程进行优化,同时考察在洗脱过程中添加不同浓度的海藻糖对洗脱效果的影响。实验结果表明:五步导入每步之间平衡90s和五步洗脱每步之间平衡60s得到了最佳的造血干细胞活率。在洗脱过程中添加0.5M海藻糖能够有效地提高造血干细胞活率。 最后对脐血造血干细胞玻璃化低温保存过程进行了研究。考察了降、复温速率对玻璃化后造血干细胞活率的影响。同时对造血干细胞的玻璃化低温保存和慢速冻存进行了比较分析。实验结果表明:提高降、复温速率都能有效地提高玻璃化后的造血干细胞活率。玻璃化后的造血干细胞活率高于慢速冻存后的造血干细胞活率。
【学位授予单位】:大连理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R318.52

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【参考文献】
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【共引文献】
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