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《大连理工大学》 2007年
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实时荧光PCR法检测饲料中反刍动物源性成分

尹兵  
【摘要】: 含有反刍动物源性成分的饲料是疯牛病、羊痒病的主要传播途径,采用实时荧光聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)对反刍动物源性成分的检测方法已有很多研究,但使用SYBR GreenⅠ荧光染料检测模式的研究尚未见报道。本文旨在建立一种使用SYBR GreenⅠ荧光染料检测模式和通用引物,且能快速、简便、特异且成本低廉的检测出饲料中反刍动物源性成分的方法,保证进口动物源性饲料的安全,防止疯牛病进入我国。 本文通过对牛、山羊、绵羊和鹿四种动物的线粒体细胞色素b DNA序列的比较,确定了四种反刍动物的共有保守序列,根据此序列设计一段通用特异性扩增引物。在优化的反应体系和反应条件下,采用SYBR GreenⅠ荧光染料检测模式,使用通用引物和SYBR Premix Ex Taq~(TM)商品试剂盒对四种动物的模板DNA进行实时荧光PCR扩增反应,对饲料中的反刍动物源性成分进行定性分析,并考察了通过解链温度T_m值的差异对检出的反刍动物种类进行区分的可能性。同时还对此方法的特异性、重复性、最低检出限及是否存在引物竞争进行了实验。 实时荧光PCR扩增反应结束后可见,四种反刍动物均有扩增,Tm值均有差异。在特异性实验中,除四种反刍动物产生扩增外,其他常见的可能用于动物源性饲料的动物如鱼、鸡、猪、狗、兔、马均没有产生扩增。在重复性实验中,四种反刍动物的解链曲线Tm值重复性很好,牛、山羊、绵羊和鹿的Tm值分别落在区间82.40±0.026℃、79.95±0.056℃、81.13±0.063℃和79.50±0.063℃之间,相邻两者之间没有交叉。检出限实验得出此方法的最低检出限可达0.001%。引物竞争实验中,两种或两种以上反刍动物的含量相当时,所有动物均可以检测出,但由于鹿和山羊的Tm值相近,两者之间的解链曲线有重叠现象,难以判断,混合样品中含量占优势的成分在扩增中占优势。 本文设计了一段通用特异性扩增引物,可同时对四种反刍动物成分进行特异性扩增。建立了一种采用SYBR GreenⅠ荧光染料检测模式,分析解链曲线,根据Tm值判断扩增产物的种类,用于检测饲料中反刍动物源性成分的方法。此方法特异性强,重复性好,灵敏度高,快速简便。此方法可以应用于检测进口动物源性饲料中是否含有反刍动物源性成分,也可以推广至对反刍动物产品的检测,必将有效防止疯牛病进入我国,保证国家安全和人民健康,保护食品和饲料工业的发展。
【学位授予单位】:大连理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S816

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【引证文献】
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1 李欢霞;邢秀梅;杨福合;赵东;刘华淼;邵元臣;;鹿产品检测的研究进展[J];中国畜牧兽医;2012年05期
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1 陈睿赜;张英杰;刘月琴;;mtDNA分析在羊进化多样性及种属鉴别中的应用[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会2012年全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 曹丽荣,王小明,方盛国;从细胞色素b基因全序列差异分析岩羊和矮岩羊的系统进化关系[J];动物学报;2003年02期
2 周材权,周开亚,胡锦矗;从线粒体细胞色素b基因探讨矮岩羊物种地位的有效性[J];动物学报;2003年05期
3 亏开兴,李文贵,朱芳贤,文际坤;应用线粒体DNA鉴定动物源性饲料成分研究进展[J];黄牛杂志;2002年06期
4 王丽媛;叶建荣;李兴民;刘毅;戴瑞彤;;PCR技术检测食品与饲料中动物源成分[J];保鲜与加工;2006年04期
5 刘向华,王义权,刘忠权,周开亚;从Cyt b基因序列探讨鹿亚科动物的系统发生关系[J];动物学研究;2003年01期
6 李林;刘青涛;邹艳丽;王志亮;;饲料中动物源性成分的检测技术研究进展[J];饲料工业;2006年13期
7 闻新棉,陈英剑,胡成进,李云龙,刘泽军;实时荧光定量检测中引物二聚体的优化[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2005年07期
8 韩俊英,曾瑞萍;荧光定量PCR技术及其应用[J];国外医学.遗传学分册;2000年03期
9 李林;刘清涛;王志亮;;聚焦疯牛病与饲料安全[J];今日畜牧兽医;2006年05期
10 楚耀辉;刘君健;聂新;;对骨粉、肉骨粉加工生产的研究[J];饲料广角;2006年16期
【共引文献】
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1 ;Intraspecific Relationship of Sheep Based on Mitochondrial Cytochrome b Gene[J];Animal Husbandry and Feed Science;2010年Z1期
2 宋洁;张小芳;刁雪淘;金梅;;线粒体DNA12SrRNA、16SrRNA研究进展[J];安徽农学通报;2008年09期
3 黄勤华;刘若余;吴芸;王兴群;;贵州黑山羊mtDNA Cytb基因遗传多样性分析[J];安徽农业科学;2008年26期
4 秦新民;钱芳;曾振华;;红斑大壁虎与黑斑大壁虎细胞色素b基因序列差异与分化[J];安徽农业科学;2009年14期
5 王春强;马巍;马宁;;辽宁绒山羊Cytb基因的克隆和序列测定[J];安徽农业科学;2009年19期
6 刘晓玲;袁青;王敏强;;不同保存条件对中国蛤蜊总DNA提取及线粒体16S rRNA基因扩增的影响[J];安徽农业科学;2010年03期
7 耿立英;张传生;尹春光;曹顶国;杜立新;刘铮铸;付志新;;细胞色素b基因标记绵羊种内亲缘关系的初步研究[J];安徽农业科学;2010年33期
8 王利利;彭建军;于冬梅;胡诗佳;高赛飞;傅美兰;刘曦庆;;Cyt b和12S rRNA基因进化速度对构建系统进化树的影响[J];安徽农业科学;2011年09期
9 涂剑锋;邢秀梅;徐佳萍;杨颖;杨福合;;中国鹿亚科动物mtDNA控制区序列差异及其遗传分化[J];安徽农业科学;2012年02期
10 崔小艳;王胜炯;杨舒黎;毛华明;冷静;李文玲;;大额牛起源与分化研究概述[J];安徽农业科学;2012年09期
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1 王秋艳;赵昕;徐杨;郑秋月;;肉及肉制品中牛源性成分PCR-DHPLC检测新技术的建立[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
2 汪登强;方耀林;邹桂伟;;长江中游4种黄颡鱼的遗传结构及差异[A];生物技术对水产业的促进作用——2005水产科技论坛论文集[C];2005年
3 殷玲;吉挺;陈晶;陈国宏;;线粒体DNA在蜜蜂遗传育种中的应用[A];中国养蜂学会蜜蜂育种专业委员会第四次学术研讨会论文集[C];2007年
4 李志惠;张红漫;刘建强;刘朋冲;赵杰;李毅;崔丹;冯秀莉;;荧光定量PCR测定支气管肺泡灌洗液中TbDNA诊断肺结核的临床价值[A];2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会汇编[C];2010年
5 吕程序;韩鲁佳;杨增玲;;显微近红外在饲料中动物源性成分检测上的应用[A];纪念中国农业工程学会成立30周年暨中国农业工程学会2009年学术年会(CSAE 2009)论文集[C];2009年
6 王昕;陈宏;马月辉;;绵羊Cytb基因的序列多态性及系统进化研究[A];第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2006年
7 曹志玲;;浅析饲料中牛、羊源性成分的检测技术[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
8 王秋艳;赵昕;徐杨;郑秋月;徐君怡;;食品及动物饲料中牛源性成分PCR-DHPLC检测新技术的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
9 王金玲;张莹;王芳;初小辉;李俊环;贾金生;庞杰;;饲料中鸡源性成分PCR-DHPLC检测技术的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
10 王金玲;张莹;王芳;李俊环;贾金生;;饲料中鱼源性成分实时荧光PCR检测方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
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1 李惠华;龙眼体胚发生过程中激素代谢和信号转导相关基因的克隆与表达[D];福建农林大学;2010年
2 张少然;T辅助细胞亚群联合检测对系统性红斑狼疮病情评估价值的研究[D];山西医科大学;2011年
3 常华;鸭瘟病毒gE基因功能初步研究[D];四川农业大学;2011年
4 严志祥;紫稻细胞质雄性不育系水稻线粒体呼吸链初步研究[D];武汉大学;2009年
5 孙艳华;荧光二氧化硅纳米粒子的制备及生物检测的应用[D];天津大学;2010年
6 殷涛;外燥伤肺的分子机制研究[D];湖北中医药大学;2011年
7 白素英;豹猫(Felis bengalensis)的遗传多样性及系统发育研究[D];东北林业大学;2001年
8 刘彦群;柞蚕种质资源的分子系统学研究[D];西南农业大学;2003年
9 苟万里;rDNA序列在几种浮游植物的分类和中肋骨条藻定量检测中的应用[D];中国海洋大学;2003年
10 曹洋;线粒体DNA体突变在原发性乳腺癌中的研究重庆地区汉族人群线粒体DNA控制区遗传多态性研究[D];重庆医科大学;2003年
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1 董辉;鸡新城疫HI抗体水平及带毒状况调查[D];山东农业大学;2010年
2 李安;猪瘟病毒强毒株与疫苗C株鉴别方法的建立及疫苗病毒定量检测的研究[D];山东农业大学;2010年
3 王健;文蛤线粒体基因组序列测定及进化分析[D];辽宁师范大学;2010年
4 王冰;刀鲚的形态学和遗传学研究[D];安徽农业大学;2010年
5 石丰运;应用基因芯片技术鉴别检测动物源性成分[D];甘肃农业大学;2010年
6 何建文;牦牛肉产品的分子追溯研究[D];甘肃农业大学;2010年
7 凤阁;泽鳄(Crocodylus palustris)和菲律宾鳄(Crocodylus mindorensis)线粒体基因组全序列及鳄目的系统发生关系研究[D];安徽师范大学;2010年
8 朱国坡;RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测CSISV在SPF雏鸡体内分布[D];河南科技学院;2010年
9 何振;湖北石首麋鹿生境选择及种群动态[D];中南林业科技大学;2007年
10 匡叶叶;麋鹿AFLP分子标记系统的建立及其遗传多样性评估[D];浙江大学;2011年
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1 吴信子;王思宏;吴丽花;宫爱雪;迟美丽;;不同鹿茸片红外数据的聚类分析[J];安徽农业科学;2010年35期
2 张学维;马长华;白根本;;塔里木马鹿特异性PCR及PCR-RFLP鉴定[J];中华中医药杂志;2011年03期
3 袁巍,徐艳春,金煜,李万水,白素英,张伟;3种鹿类动物物种特异性引物的设计及其有效性[J];中国法医学杂志;2003年03期
4 黄勤华;刘若余;;利用mtDNA细胞色素b分析贵州山羊的系统发育[J];中国畜牧兽医;2010年05期
5 宋兴超;杨福合;邢秀梅;刘汇涛;岳志刚;;甘肃马鹿MyoG基因5′UTR单核苷酸多态性检测及其序列变异分析[J];中国畜牧兽医;2010年09期
6 刘国强;浅谈鹿茸的真伪鉴别[J];贵阳中医学院学报;2003年01期
7 李洁;;实时荧光定量PCR技术及实例分析[J];中国现代教育装备;2009年01期
8 车秀君,包德春,文丽丽,刘淑范,韩桂芬;紫外光谱法对俄罗斯产鹿茸与国产鹿茸质量比较[J];基层中药杂志;2000年02期
9 毛建江;张玉杰;徐经伟;;傅立叶近红外光谱法用于鹿茸的定性分析[J];理化检验(化学分册);2007年01期
10 刘丽;曲静;包辉;康廷国;;六种鹿茸茸毛的显微特征比较鉴别[J];辽宁中医杂志;2008年06期
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1 张红平;采用mtDNA序列研究中国家养山羊的遗传多样性与起源分化[D];四川农业大学;2003年
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1 安丽萍;东亚部分马群体线粒体Cytb基因序列及分子系统学研究[D];甘肃农业大学;2006年
【二级引证文献】
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1 于淼;杨福合;邢秀梅;;中国鹿科动物染色体研究进展[J];中国畜牧兽医;2012年10期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王宗仁,杜若甫;鹿科动物的染色体组型及其进化[J];动物学报;1983年03期
2 李明,王小明,盛和林,玉手英利,增田隆一,永田纯子,大泰司纪之;四种鹿属动物的线粒体DNA差异和系统进化关系研究[J];动物学报;1999年01期
3 王义权,周开亚,徐珞珊,杨光,徐国钧;几种游蛇的Cyt b基因片段序列分析及其演化关系(英文)[J];动物学报;1999年03期
4 周继亮,张亚平,黄美华,陈永久,陈小青,姚耿东;蝮亚科蛇线粒体细胞色素b基因序列分析及其系统发育[J];动物学报;2001年04期
5 曹祥荣,束峰珏,张锡然,毕春明,李朝军,胡均,方笺阳;毛冠鹿与3种麂属动物的线粒体细胞色素b的系统进化分析[J];动物学报;2002年01期
6 曹丽荣,王小明,方盛国;从细胞色素b基因全序列差异分析岩羊和矮岩羊的系统进化关系[J];动物学报;2003年02期
7 饶刚,李明,牛屹东,王静,魏辅文,方盛国;陈旧皮张中DNA提取的新方法[J];动物学杂志;2001年04期
8 戴凤田,苏锦祥;鲿科八种鱼类同工酶和骨骼特征分析及系统演化的探讨(鲇形目:鲿科)[J];动物分类学报;1998年04期
9 姚永刚,张亚平;线粒体DNA和人类进化[J];动物学研究;2000年05期
10 张尚宏;动物与植物线粒体基因组结构的差异──两种进化途径[J];动物学研究;1995年02期
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1 小李;波兰出台动物及动物源性食品进口新法令[J];畜牧兽医科技信息;2004年04期
2 ;《动物源性饲料产品安全卫生管理办法》释义[J];饲料广角;2004年19期
3 于炎湖;动物源性饲料产品的安全卫生及其监督管理的有关问题[J];饲料工业;2005年04期
4 崔京华;动物源性饲料产品安全卫生管理办法10月1日起施行[J];江西饲料;2004年05期
5 赵艺,陈志莹;动物源性食品质量安全的现状与对策[J];辽宁畜牧兽医;2004年02期
6 ;关于贯彻实施《动物源性饲料产品安全卫生管理办法》的通知[J];中国饲料;2004年17期
7 马小珍,陈学群,周围;浅谈饲料与动物源性食品安全[J];饲料研究;2004年11期
8 李丽萍;《动物源性饲料产品安全卫生管理办法》浅析[J];现代畜牧兽医;2004年11期
9 ;动物源性饲料产品安全卫生管理办法[J];中国动物检疫;2004年12期
10 张超范,赵丽丹,白侠,孙百明;利用微生态制剂生产动物源性绿色食品[J];畜牧兽医科技信息;2004年08期
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1 康亚男;苏建东;刘健;;动物源性制剂在兽医临床上的应用前景[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会(第三届中国兽药大会学术论坛)论文集[C];2010年
2 唐长彬;;浅议我区饲料生产经营管理中存在的问题及改进措施[A];第四届重庆饲料工业暨养殖行业发展战略研讨会论文集[C];2008年
3 夏咸柱;;我国人兽共患病的现状[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(上册)[C];2009年
4 焦新安;;动物源性食品病原菌防控:过去、现在与未来[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(上册)[C];2009年
5 成国祥;;动物源性蛋白饲料原料开发利用新技术[A];2010年饲料蛋白源应用新技术研讨会暨蛋白源大会论文集[C];2010年
6 董淑红;;动物福利对动物源性食品安全的影响及改善措施[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
7 冯国金;;保障动物源性的食品安全 健全动物疫病的防控体系[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
8 马亦林;;若干动物源性传染病的研究近况[A];传染病诊治高峰论坛暨2007年浙江省感染病学、肝病学学术年会论文汇编[C];2007年
9 巩薇;付瑞;王吉;卫礼;肖镜;贺争鸣;;动物源性生物制品病毒灭活验证研究[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
10 曾东平;曾振灵;蒋红霞;陈杖榴;林礼广;张春森;;耐氟喹诺酮类药物动物源性链球菌parC、gyrA基因突变研究[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第九次学术讨论会论文与摘要集[C];2006年
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1 中国农业科学院 刁其玉 姜成钢;扼制饲料安全隐患的重要源头[N];中国畜牧兽医报;2006年
2 浙江大学 陈安国 教授;血浆蛋白粉品质亟待“整肃”[N];中国畜牧兽医报;2007年
3 河南省饲料工业办公室 张雄;对动物源性饲料安全监管亟待精细化[N];中国畜牧兽医报;2006年
4 农业部全国饲料工作办公室提供;动物源性饲料质量控制点[N];中国畜牧报;2005年
5 本报记者姜蓉;欧盟动物源性海产品“封关”解冻 中国企业难变利损大局[N];中国经营报;2002年
6 农业部全国饲料工作办公室 王晓红;全国饲料办集监管精英大练兵[N];中国畜牧报;2004年
7 辽宁省饲料工作办公室 郝洪璋;精细化管理是饲料安全的保障[N];中国畜牧兽医报;2006年
8 山西省饲料工业办公室 张艳梅;山西动物源性饲料监管行动见“真功”[N];中国畜牧兽医报;2005年
9 江西省兽药饲料监察所 饶辉;杜绝安全隐患须从加工流程抓起[N];中国畜牧兽医报;2007年
10 杨曙明 马莹;动物源性饲料质量关乎国家、产业安全[N];中国畜牧报;2005年
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1 柳巨雄;动物源性大肠杆菌O157对β-内酰胺类和氨基糖苷类药物耐药相关机制的研究[D];吉林大学;2005年
2 陈蕾;非动物源性新型载体的研制及其对磺胺类药残检测特性的影响[D];华南理工大学;2011年
3 马红霞;动物源性大肠杆菌多重耐药与AcrAB外输泵表达水平关系的研究[D];中国人民解放军军需大学;2002年
4 衣洪岩;大肠杆菌O157:H7分子检测方法及部分耐药基因标识研究[D];吉林大学;2005年
5 刘佩红;电子标识在奶牛现代化饲养管理及动物防疫中的应用[D];南京农业大学;2005年
6 许慧芳;人胚胎干细胞的优化培养以及向神经干细胞的分化研究[D];华中科技大学;2009年
7 王长松;人源化氨基端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)基因工程抗体的构建及其生物学活性研究[D];第三军医大学;2005年
8 谢菊芳;猪肉安全生产全程可追溯系统的研究[D];中国农业大学;2005年
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1 王振全;基因芯片方法检测六种动物源性人兽共患病病原[D];吉林大学;2012年
2 吕二盼;动物源性食品中各种动物源性肉及肉制品鉴别检验的研究[D];河北农业大学;2012年
3 林海丹;动物源性食品中兽药残留的分析研究[D];暨南大学;2003年
4 郑新;微卫星标记技术鉴别动物源性成份的应用研究[D];南京农业大学;2009年
5 李乾学;动物源性金黄色葡萄球菌耐药性分析与氟喹诺酮类耐药菌株的基因突变研究[D];中国人民解放军军需大学;2002年
6 张晶;动物源性大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药及其相关机制的研究[D];吉林农业大学;2006年
7 伞治豪;动物源性大肠杆菌主要耐药基因的克隆及其同源性研究[D];吉林农业大学;2007年
8 孙庆歌;六种动物源性人兽共患病病毒基因芯片检测方法的研究[D];中国农业科学院;2009年
9 李舒妍;动物福利对我国动物源性产品出口贸易的影响[D];上海交通大学;2010年
10 牛英娟;液相色谱-质谱联用测定动物源性食品中氯霉素残留[D];北京化工大学;2003年
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