收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

草酸盐高效降解菌的筛选及其酶学性质研究

金朝霞  
【摘要】: 草酸盐降解菌及其降解酶的研究具有很多潜在的应用价值。一方面可用于致病真菌Sclerotinia sclerotiorum所引起的重要经济作物菌核病的防治,及抗病性转基因植物的生产:另一方面,草酸盐降解酶被用于诊断和治疗与草酸盐相关的疾病,如肾结石,以及环境的生物治理。本论文分离筛选出具有较强草酸盐降解能力的新菌,并对该菌降解酶的酶学性质及降解机理进行了研究。 在酸性介质中草酸能够催化重铬酸钾对次甲基蓝的氧化脱色反应,这种催化效率与草酸浓度呈正相关,据此建立了次甲基蓝-重铬酸钾体系测定草酸的方法。实验证明,在660 nm处不加草酸与加草酸的次甲基蓝-重铬酸钾体系反应后的吸光度差值△A在0~80μg/mL范围内与草酸浓度呈线性关系,线性方程为:△A=0.0984ρ_(草酸)-0.0044,相关系数为0.9986。反应的最适条件为3.752×10~(-5)mol/L次甲基蓝、0.12mol/L H_2SO_4和2×10~(-3)mol/L K_2Cr_2O_7。 以草酸盐为唯一碳源和能源,从土壤中分离筛选获得一株能够降解草酸及其盐类的细菌,命名为OXJ-11。该菌在形态培养基形成的菌落为乳白色,圆形;革兰氏阴性染色为阴性杆菌;经电镜观察,为端生双鞭毛。接触酶阳性:不还原硝酸盐。能够在温度25℃-35℃范围内和pH6.0-10.0范围内好氧生长。根据其形态特征、生理生化特征及16SrRNA序列同源性分型,OXJ-11为Pandoraea属的一株新菌。这种菌能够合成草酸盐降解酶。OXJ-11产酶的最适发酵培养基配方为:0.5%草酸钠,0.3%酵母浸粉,0.05%MgSO_4·7H_2O,最适温度为30℃,pH为6.0-7.0。 Pandoraea sp.OXJ-11的草酸盐降解酶为底物草酸盐诱导酶。以次甲基蓝-重铬酸钾氧化还原法测定反应体系草酸盐的减少量,建立了草酸盐降解酶的酶促反应体系。该酶为胞壁酶,超声破碎的条件为:输出功率200w-300w,超声破碎0.5s、间歇5s,破碎总时间7min。草酸盐降解酶的最适初始底物浓度为0.7mg/mL;最适反应温度为30℃;30℃下保温酶活力较稳定;酶反应的最适pH范围较宽为5.5-8.0;粗酶液在pH7.0-8.0范围内保温比较稳定;不同浓度的Fe~(2+)和Cr~(3+)对酶均有抑制作用;SDS对酶有很强的抑制作用;10mmol/L的Mg~(2+)对酶有一定的激活作用;NaCl对酶活力有较大的影响,0.15mol/L NaCl可使酶活力下降约50%,浓度达到0.3mol/L时酶活力完全丧失。 草酸盐降解酶的酶解产物之一为二氧化碳,当反应体系中含有阳离子时,二氧化碳会与阳离子反应生成碳酸盐。而过氧化氢不是酶反应产物。甲酸盐为酶解反应的另一产物,但由于OXJ-11菌中含有甲酸盐脱氢酶,因此,甲酸盐被进一步降解生成二氧化碳。OXJ-11菌的草酸盐降解酶所催化的反应,必须在有氧条件下才能进行。草酸和琥珀酸为草酸盐降解酶的可替换底物。ATP和ADP对草酸钠降解酶活性均有不同程度的抑制作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 殷文静;张春林;张书祥;;产弹性蛋白酶菌种的筛选及发酵条件优化研究[J];生物学杂志;2007年06期
2 韩冬;徐煌;牟旭鹏;孔宁;颜炜群;关铭;;HER2/neu ECD毕赤酵母工程菌大规模发酵工艺研究[J];吉林农业大学学报;2008年02期
3 楼纯菊,白沂涛,焦瑞身,张欣乔,林兰英,沈克强;酵母小菌落突变株酒精发酵的研究——Ⅱ.sb724菌株发酵条件及产量稳定[J];微生物学通报;1984年03期
4 于晓丹,张彩霞,吕淑霞,陈捷;哈茨木霉T-23产几丁质酶发酵条件的研究[J];生物技术;2005年03期
5 张锋;金杰;安莹;解成骏;;纳豆激酶高活性菌株的筛选及其液体发酵条件的优化[J];食品研究与开发;2006年04期
6 王光远;宋爱荣;陈冠军;;产菊粉酶酵母菌株的筛选及菌种鉴定[J];微生物学杂志;2006年04期
7 卫军;王建民;宋德贵;;环孢菌素A产生菌诱变育种及发酵条件研究[J];河南师范大学学报(自然科学版);2006年04期
8 万水霞;胡丰林;丁婷;樊美珍;郭煕盛;;不同发酵条件对细脚拟青霉(RCEF0969)抗白色念珠菌活性的影响[J];生物学杂志;2007年05期
9 周军;;产脂肪酶菌株的筛选及脂肪酶发酵条件的研究[J];河北农业科学;2008年02期
10 韩冬;徐煌;张新民;姜爽;张婷;关铭;颜炜群;;rhHSP110毕赤酵母工程菌的大规模发酵及产物纯化[J];吉林大学学报(医学版);2008年03期
11 付建红;唐辉桂;姚斌;石玉瑚;欧阳平凯;;一株产低温碱性磷脂酶A_1耐冷细菌的筛选及发酵条件的初步研究[J];工业微生物;2008年05期
12 杨亚珍;;纤维素酶产生菌发酵条件研究[J];科技资讯;2008年34期
13 于潇淳;韩宝芹;刘万顺;庞敏;;产甲壳素酶菌株HD001的发酵条件研究及酶的分离纯化[J];海洋通报;2009年03期
14 杨厚;;控制和未控制发酵条件下Act.aureofaciens发育形态功能的研究[J];国外医学.药学分册;1978年03期
15 钱旭初,黄月琴,陈彬华,张旭帆,丁东新,张克艰;两岐双岐杆菌菌株制剂的研究Ⅰ.两岐双岐杆菌的发酵条件[J];微生物学通报;1990年02期
16 周电辉,刘海森,罗实,张世忠,邵威平;'ZDH'模型在微生物果胶酶发酵条件优选中的应用[J];甘肃科学学报;1993年01期
17 王丽敏,李军,胡小松;苹果原料中酵母菌的分离鉴定[J];中国农业大学学报;2004年04期
18 常峰,朱何东,梁波,罗俊成,胡承,王忠彦;类细菌素高产菌YCF10的诱变选育及发酵条件的研究[J];酿酒科技;2005年07期
19 吴奇凡,史劲松,许正宏,陶文沂;耐冷菌Bacillus cereus SYP-A3-2低温蛋白酶的发酵条件[J];微生物学通报;2005年05期
20 卢其湘;赵树进;;外源基因在毕赤酵母中表达的优化[J];氨基酸和生物资源;2005年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王园;陆文清;;发酵条件对固态发酵豆粕品质的影响[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
2 梁健良;杜云平;周庆丰;余国莲;李小军;毕英佐;;凝结芽孢菌的分离与发酵条件的优化[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
3 陈林林;辛嘉英;张颖鑫;张帅;;粗状假丝酵母产脂肪酶发酵条件的优化[A];2009食品科技(北京)论坛会议指南[C];2009年
4 刘梅;徐同;;木霉的营养生长及发酵条件[A];中国植病学会西南联合学术年会论文集[C];2000年
5 刘晶波;乐军;严子禾;韩志君;韩敏;;评估博奥生物有限公司晶芯分支杆菌菌种鉴定试剂盒效能[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
6 曾晓华;陆勇军;;氨基酸高产酵母的选育与发酵条件的优化[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
7 马光庭;黄玉柳;;丝状真菌絮凝剂的研究[A];广西微生物学会2003年学术年会论文集[C];2003年
8 焦会民;王宗华;刘波;;香蕉内生菌群落结构多态性及其枯萎病生防菌筛选[A];第四届中国植物细菌病害学术研讨会论文集[C];2008年
9 张念海;易安妮;丛莉;吴希阳;;地衣芽孢杆菌1103的产酶、抑菌特性及其发酵条件的优化[A];“食品加工与安全”学术研讨会暨2010年广东省食品学会年会论文集[C];2010年
10 明飞平;李从发;刘四新;刘振杰;;新型环氧化物水解酶产生菌的筛选与发酵条件研究[A];廿一世纪微生物学发展前沿与应用新技术研讨会论文摘要集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 金朝霞;草酸盐高效降解菌的筛选及其酶学性质研究[D];大连理工大学;2008年
2 黄惠琴;海洋放线菌抗MRSA菌株的筛选及菌株AM105活性物质的研究[D];华南热带农业大学;2005年
3 高芬;抗真菌农用抗生素KA08的研究[D];沈阳农业大学;2008年
4 曹冬梅;产β-环糊精葡萄糖基转移酶高温菌株HY15发酵条件的优化及酶动力学研究[D];吉林农业大学;2011年
5 梁建琴;应用膜反向斑点杂交技术快速鉴定分枝杆菌菌种和耐药结核分枝杆菌基因型[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2005年
6 连喜军;红曲色素光稳定性的研究[D];天津科技大学;2005年
7 宋慧;小刺猴头菌[Hericium caput-medusae (Bull.:Fr.)Pers.]化学成分研究及菌种鉴定[D];吉林农业大学;2003年
8 孙迅;粗毛栓菌的木质纤维素降解酶及其基因克隆[D];四川大学;2005年
9 赵巧云;天花粉蛋白基因工程菌株发酵条件及产物抗病毒实验研究[D];西北大学;2006年
10 余勃;枯草芽孢杆菌发酵豆粕生产大豆活性多肽的研究[D];南京农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 彭辉;麻黄有效成分产生菌的筛选及其生产条件的优化[D];西北大学;2005年
2 赵强;渐危药用植物秦艽产活性成分内生真菌的初步研究[D];西北大学;2007年
3 孙宇宏;稀缺药用植物小蔓长春花产活性成分内生真菌的研究[D];西北大学;2009年
4 李今煜;苏云金芽孢杆菌WB_7菌株发酵条件的研究[D];福建农林大学;2004年
5 石金舟;产细菌素乳酸菌的筛选鉴定和细菌素发酵条件的研究[D];安徽农业大学;2005年
6 柴萍萍;枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WY45产β-甘露聚糖酶的纯化与性质研究[D];中国农业大学;2005年
7 张金波;阿魏侧耳深层发酵条件及其胞外多糖理化性质的研究[D];华中农业大学;2005年
8 王永敏;发酵蛹虫草胞外多糖的分离提取及对巨噬细胞的激活作用研究[D];山东师范大学;2006年
9 徐春华;高产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶菌株的发酵工艺研究[D];辽宁师范大学;2006年
10 赵金;胶质芽胞杆菌絮凝剂的絮凝作用与絮凝机理研究[D];贵州大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 郑成已;伯赛优化人ω干扰素基因工程菌发酵条件[N];中国医药报;2006年
2 高玉平;灵芝种质资源的收集与评价技术[N];科技日报;2006年
3 香红星;走进微生物世界让这个“小精灵”为你增效[N];中国畜牧兽医报;2007年
4 本报记者 胡全胜 本报通讯员 王鹏飞;两次援疆情更浓[N];伊犁日报(汉);2010年
5 河南科技学院 崔艳红;聚焦饲用酶制剂生产中存在的安全隐患[N];中国畜牧兽医报;2006年
6 本报记者 李晓宏;看结核病要去专科医院[N];健康时报;2004年
7 ;畜禽粪便处理后方可作肥料[N];吉林农村报;2007年
8 通讯员 李杰;治疗耐多药结核病有高招[N];科技日报;2006年
9 杨美玲;农村户用沼气实用技术讲座(一)[N];山西科技报;2006年
10 周丹雅;“海正科技日”再掀技术创新高潮[N];科技日报;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978