收藏本站
《大连理工大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

甘油生物歧化过程酶催化和基因调控的非线性数学模拟与分析

孙亚琴  
【摘要】: 受石油价格不断攀升的影响,生物基化学品的生产逐渐引起人们的重视。甘油生物转化生产1,3-丙二醇因为原料的可再生性和1,3-丙二醇(1,3-PD)的潜在用途而日益受到关注。本论文针对克雷伯氏杆菌转化甘油为1,3-丙二醇过程,建立了酶催化和基因调控非线性动力学方程,对甘油生物转化及其基因调控过程进行了模拟分析,主要研究内容如下: 首先,建立了甘油生物歧化过程酶催化动力学方程,包括甘油代谢过程中关键酶——甘油脱水酶(GDHt)、1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR)、甘油脱氢酶(GDH)、丙酮酸激酶(PK)、丙酮酸甲酸裂解酶(PFL)和丙酮酸脱氢酶(PDH)的酶催化动力学,3-羟基丙醛(3-HPA)对GDHt、PDOR和GDH的抑制动力学,甘油和产物的跨膜转运动力学。酶催化动力学能够很好地描述甘油连续发酵过程中底物的消耗和产物如1,3-PD,乙酸、乙醇、琥珀酸和甲酸的形成,对间歇培养过程适应期和对数生长期的描述也很合理;该动力学系统能够预测连续培养条件下胞内物质的浓度,如胞内残余甘油、3-HPA、1,3-PD、琥珀酸、甲酸和乙酸,且能预测连续发酵过程中出现的多稳态现象。分析结果表明,连续发酵培养条件下,二羟基丙酮、磷酸二羟基丙酮、磷酸烯醇式丙酮酸、乙酰CoA在胞内没有积累,全部进入下一级代谢;另外,过多的3-HPA积累和残余底物甘油对1,3-PD的生成是不利的;3-HPA的积累对PDOR的抑制作用要强于对GDHt和GDH的抑制作用,即底物过量导致3-HPA积累时,PDOR是甘油代谢过程的限速酶。 其次,对色氨酸操纵子基因调控动力学进行了深入研究,为甘油生物歧化过程的基因调控动力学研究奠定了基础。重点考察了色氨酸操纵子中多基因间的相互作用以及胞内色氨酸向胞外的转运机制,建立了一个包括阻遏蛋白基因和色氨酸关键酶基因之间相互作用以及色氨酸由胞内向胞外转运的色氨酸操纵子基因调控系统。鲁棒性分析表明,该系统具有很强的鲁棒性,求取的参数值和动力学描述合理。考察了比生长速率对色氨酸生物合成和系统稳定性的影响,对色氨酸合成过程的动态行为进行了理论预测和分析。采用间接优化方法对色氨酸的生产进行了优化分析,细胞生长速率为0.00624 h-1时色氨酸的产量提高了4.8倍。 再次,建立了甘油生物歧化过程基因调控动力学方程,重点研究了甘油代谢还原途径的中间产物3-羟基丙醛对dha调节子基因表达的阻遏作用,对GDHt和PDOR的反馈抑制作用。建立了包括调控蛋白(dhaR)、GDHt和PDOR及其相关基因表达调控,以及酶催化代谢产物之间的复杂网络。鲁棒性分析表明,该动力学系统具有很强的鲁棒性,求取的参数值和动力学描述合理。和酶催化动力学系统一样,多稳态现象在基因调控动力学中同样存在。对发酵过程进行模拟的结果表明,3-HPA的积累导致甘油代谢还原途径中酶的基因表达受阻,表达量减少;3-羟基丙醛参与了dha调节子的基因表达与调控,是dha调节子上的负调控因子。在dha调节子中存在两种负反馈调控机制:阻遏作用和酶抑制。两种并存机制能更为合理地阐释实验结果。 最后,对微生物转化法生产1,3-丙二醇、2,3-丁二醇和氢气进行了化学计量分析。综合考虑了质量、能量和还原当量的平衡,通过“原子经济性”理论分析,实现底物向产物的最大转化。结果表明:共底物发酵有利于提高目标产物的收率,并且还原当量的合理分配对目标产物的收率有非常重要的影响。在葡萄糖和甘油共底物厌氧生产1,3-丙二醇过程中,甘油既不进入氧化途径也不用来生成生物量,该部分能量由葡萄糖代谢提供,甘油可以完全转化为1,3-丙二醇,此时底物中葡萄糖相对于甘油的比率为0.32mol.mol-1。葡萄糖和甘油共底物厌氧联产1,3-丙二醇和2,3-丁二醇时,葡萄糖代谢提供细胞生长所需能量和1,3-丙二醇生成所需的还原当量;当葡萄糖与甘油的比率为1.13mol.mol-1时,甘油可以完全转化为1,3-丙二醇,而2,3-丁二醇相对于葡萄糖的收率为0.88mol.mol-1,此时基本的假定条件是高浓度葡萄糖对甘油代谢酶没有抑制作用。葡萄糖和木糖共底物微氧发酵生产2,3-丁二醇和氢气时,理论上可获得2,3-丁二醇和氢气相对于底物葡萄糖和木糖的最大质量收率分别为0.5g.g-1和0.008g.g-1,此时呼吸商为14。葡萄糖厌氧发酵生产氢气时,最大收率为2.86 mol.mol-1;微氧发酵呼吸商为2.26时,氢气最大收率可达6.68 mol.mol-1。 上述研究工作对深入理解克雷伯氏杆菌的甘油代谢途径、菌种的基因工程改造、甘油代谢过程基因表达的全局调控、甘油生物转化为1,3-丙二醇过程的在线控制和代谢控制分析具有重要的参考价值和指导作用。
【学位授予单位】:大连理工大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:O242.1

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢涛;方慧英;诸葛健;;玉米浆在产甘油假丝酵母甘油发酵中的作用机理[J];微生物学通报;2006年04期
2 李杰;林明德;罗先群;;耐高渗压酵母的甘油发酵研究:ⅡGW-11菌株的发酵条件试验[J];广西科学院学报;1992年01期
3 张经坤,倪音海,夏元复,祁守仁;无氧气氛下Fe(OH)_2歧化产物的穆斯堡尔研究[J];科学通报;1983年02期
4 李凤梅,刘长江,郑艳,王希尧;产1,3-丙二醇菌株丁酸梭菌的诱变育种[J];生物技术;2005年01期
5 周文瑜,王宝根,王宏,章学钦;原材料对甘油发酵影响的研究[J];工业微生物;1997年04期
6 张建安,王悦云,谢东明,孙燕,刘德华;玉米浆对玉米粉和木薯淀粉发酵甘油的影响及二者的比较[J];微生物学杂志;2002年02期
7 谢东明,刘德华,张岩,朱丙田,刘永强,刘天中;发酵法生产甘油中的变温技术[J];微生物学杂志;2001年01期
8 钱欣平,孟琴,阳永荣;营养和环境因素对甘油发酵生产鼠李糖的影响[J];食品与发酵工业;2001年10期
9 谢东明,刘德华,刘天中;在气升式可逆环流反应器中运用振荡气升操作进行甘油发酵(英文)[J];应用与环境生物学报;2001年01期
10 朱航;;产甘油假丝酵母中α-磷酸甘油酯酶的表达特征[J];科技信息;2009年29期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 仝成利;孙爱芝;韩景智;肖耀福;;两种HDDR工艺过程相变机制的探讨[A];第五届中国功能材料及其应用学术会议论文集Ⅰ[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙亚琴;甘油生物歧化过程酶催化和基因调控的非线性数学模拟与分析[D];大连理工大学;2010年
2 姜珊;最优控制在发酵过程和冰蓄冷工程中的应用[D];大连理工大学;2012年
3 叶金文;HDDR法制备Sm_2(Fe,M)_(17)N_x中的结构演变及其对磁性能影响[D];四川大学;2007年
4 张青瑞;甘油生物转化为1,3-丙二醇过程的代谢通量分析与动态模拟[D];大连理工大学;2008年
5 董晓宇;大气压冷等离子体对Klebsiella pneumoniae灭菌机制和诱变研究[D];大连理工大学;2010年
6 叶剑雄;一类微生物发酵的多种非线性动力系统建模与优化[D];大连理工大学;2011年
7 高井贵;一类微生物发酵的非线性混杂动力系统辨识及控制[D];大连理工大学;2012年
8 马正;利用不同底物生产1,3-丙二醇及基因工程菌的构建[D];江南大学;2010年
9 薛学东;Klebsiella pneumoniae厌氧发酵甘油生产1,3-丙二醇的过程研究[D];华东理工大学;2011年
10 马立娟;生物法生产1,3-二羟基丙酮产品研究[D];天津大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 焦策;溶氧对Candida glycerinogenes产甘油发酵的调控机理研究[D];江南大学;2012年
2 王新颖;非线性多阶段酶催化动力系统的鲁棒性分析及参数辨识[D];大连理工大学;2013年
3 李爽;等离子体诱变生产1,3-丙二醇菌种的研究[D];辽宁师范大学;2007年
4 黄亚魁;Nd_(14)Fe_(66.9)B_7Co_(11)Zr_(0.1)Ga_(1.0)室温氢化—歧化机理及组织结构演变[D];哈尔滨工业大学;2007年
5 魏搏超;甘油生物转化联产乳酸及其盐析萃取[D];大连理工大学;2012年
6 朱永兴;产甘油益生菌的分离鉴定及其发酵条件的优化[D];南京农业大学;2011年
7 白红光;微生物连续发酵动力系统的参数辨识与平衡点的性质[D];内蒙古大学;2011年
8 张静;产1,3-丙二醇的乳酸菌的分离、鉴定及1,3-丙二醇氧化还原酶基因的克隆[D];四川大学;2006年
9 刘艳青;酵母甘油合成关键酶基因在大肠杆菌中的表达研究[D];江南大学;2009年
10 吕黎兵;Klebsiella pneumoniae发酵产1,3-丙二醇工艺研究[D];华南理工大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026