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东北矮紫杉体细胞胚培养及人工种子制备技术

孙筱筠  
【摘要】:东北红豆杉(Taxus cuspidate Sieb.et Zucc)是红豆杉科(Taxaceae)红豆杉属(Taxus.L)常绿针叶乔木。红豆杉属植物属于雌雄异株,自然结种率低,因此通过自然种子繁殖东北红豆杉受到很大限制。本研究以东北红豆杉的变种-矮紫杉(Taxus cuspidate ‘Nana’)种子及腋芽为繁殖体,建立矮紫杉体细胞胚和人工种子培养体系,旨在通过体细胞胚和人工种子快速繁殖技术,解决东北红豆杉资源匮乏的问题。结果如下: 1.东北矮紫杉种子于200mg/L赤霉素溶液中浸泡24h之后萌发率最高,达66%。 2.将种子切开一个2-3mm的小口后接入mB5+0.5mg/L2,4-D+4mg/L NAA+0.2mg/L KT培养基上暗培养27d,愈伤组织诱导率较高为66.7%,而将种胚剥离种子后接入同样培养基的诱导率只有8.9%。 3.适合诱导体细胞胚的培养基是mB5+3mg/L ZT,培养20d后愈伤组织表面出现白色颗粒状培养物,经显微观察发现其为胚性组织,可以观察到球状细胞团。 4.通过用不同浓度海藻酸钠及CaCl_2配比制作人工种子,并分别置于4℃和24℃下贮藏比较失水率。结果表明,3.0%海藻酸钠+2.5%CaCl_2为人工种皮最佳配方,4℃下贮藏失水率较低。 5.在人工胚乳中添加1.5%的可溶性淀粉能提高人工种子的保水性,24℃下贮藏15d之后失水率为25.29%;在人工胚乳中添加诱导子,以10~(-6)mg/L水杨酸效果最好,种子颗粒均一透明。 6.分别以东北矮紫杉嫩茎诱导出的愈伤组织及从枝条上采取的腋芽作为繁殖体制作人工种子,培养30d后,以腋芽作为繁殖体制作的人工种子较易萌发,最高萌发率达38.1%,而以愈伤组织为繁殖体制作的人工种子没有萌发。 7.将人工种子在低温(4℃)下贮藏5d后,其萌发率保持5.0%,10d后失去萌发力。


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