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《大连工业大学》 2016年
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产褐藻胶裂解酶菌种筛选与酶学性质研究

罗丹丹  
【摘要】:褐藻胶是由β-D-甘露糖醛酸及其C5差向异构体α-L-古洛糖醛酸聚合而成的线性高分子多糖。褐藻胶裂解酶通过β消去机制能将褐藻胶降解成具有独特生物活性的褐藻寡糖。褐藻寡糖因具有独特的生理活性如促进生长、增强植物抗性、抑菌等而日益受到人们的关注。本文通过筛选褐藻胶裂解酶菌种,对菌种生长条件、褐藻胶裂解酶固定化条件及固定化前后褐藻胶裂解酶酶学性质进行比较研究,希望对褐藻胶裂解酶在工业上的应用有益。其主要研究结果如下:1.从腐烂的海菜中筛选产褐藻胶裂解酶的菌株。经富集培养与初筛选出14株产褐藻胶裂解酶的菌株,经复筛后筛选一株高产褐藻胶裂解酶的菌株为目的菌株,经鉴定属于假交替单胞菌属,命名为Pseudoalteromonas sp.L1。2.对Pseudoalteromonas sp.L1培养基组成及发酵条件进行优化。Pseudoalteromonas sp.L1最佳发酵培养基组成为:酵母粉3g/L,海藻酸钠6g/L,NaCl 30g/L,pH7.0;Pseudoalteromonas sp.L1最佳发酵条件为:装液量30mL(在250mL三角瓶中),转速160r/min,接种量1%,培养时间12h,温度30℃。3.以明胶为载体,戊二醛为交联剂,采用包埋-交联法制备固定化褐藻胶裂解酶,对固定化条件和酶学性质进行了研究。经实验获得的最佳固定化条件为:明胶浓度15%,戊二醛体积分数0.5%,褐藻胶裂解酶与明胶溶液的体积比1:3,交联时间2h,固定化时间4h。最佳条件下制得的固定化褐藻胶裂解酶酶活为18.11U/mL,得到的固定化酶的回收率是88.86%。固定化前褐藻胶裂解酶的最适温度是45℃,最适pH为5;固定化之后褐藻胶裂解酶的最适温度升至55℃,最适pH向酸性偏移变为4,且褐藻胶裂解酶的温度稳定性及耐酸性都有明显提高。
【学位授予单位】:大连工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:Q814

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