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《大连工业大学》 2016年
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构树体细胞胚悬浮培养关键技术研究

张朝晖  
【摘要】:本研究以杂交构树为实验材料,建立通过愈伤组织制备体细胞胚的技术途径。通过构建细胞悬浮培养动力学模型,建立稳定的构树细胞悬浮培养体系。同时研究了体细胞胚诱导的关键影响因素。主要结果如下:(1)构树愈伤组织诱导过程中,选用叶片作为诱导材料时愈伤组织的诱导率最高且诱导得到的愈伤组织细胞的生长状态最佳。最佳培养基为:MS+1.0 mg/L 6-BA+2.0mg/L 2,4-D,诱导率达到96.55%。(2)愈伤组织于固体MS培养基上经过20 d继代培养,于1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D的激素组合试验组中表现出最佳继代增殖效果。(3)构树愈伤组织的细胞悬浮培养出现典型的“S”型,愈伤组织于13 d的增殖倍率为4.32,13 d之后生长速度逐渐变缓,从第19 d开始进入生长停滞期。(4)构树细胞悬浮培养的激素组合优化试验中,6-BA的质量浓度在激素组合中具有极显著性,生长素2,4-D的质量浓度及细胞分裂素KT质量浓度对悬浮培养的结果有显著影响。优化结果显示,最佳的悬浮培养激素组合配比为:1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.4 mg/L KT+0.4 mg/L NAA。(5)选择在4 g鲜重接种量及50 ml液体培养基的组合条件下,愈伤组织的增殖效果最佳。(6)细胞悬浮培养动力学模型建立的试验中,通过响应面试验分析得出,鲜重比Y=+5.72-0.48A+0.067B-0.079C-0.85D-0.1AB-0.27AC-0.21AD-1.09BC+0.05BD+0.038CD-1.05A2-1.02B2-0.50C2-0.24D2,其中A因素(摇床转速)和D因素(碳源浓度)在方程具有极显著影响,B因素(温度)和C因素(p H)对于细胞悬浮培养的增殖效果也有显著协同影响。(7)通过正交试验优化体细胞胚的诱导条件,构树体细胞胚诱导的最佳条件组合为:温度25℃,光照条件1800 lx,MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,pH 6.4。
【学位授予单位】:大连工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:Q943.1

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