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《大连工业大学》 2016年
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季也蒙假丝酵母(Candida guilliermind)胞外多糖的分离纯化及活性研究

孙晓萌  
【摘要】:多糖是构成生命有机体的重要基础物质,对调节细胞的各种生命活动起着重要作用。多糖具有广泛的药理学活性,对人体健康有很大的促进作用。海洋微生物处于低温、高盐、高压、寡营养的特殊环境,具有产生结构新颖、功能独特的新型活性多糖的潜力,因此从海洋微生物寻找新型活性多糖已成为开发新资源的重要策略之一。本研究对一株源于海参肠道的季也蒙假丝酵母(Candida guilliermind)产胞外多糖进行分离纯化,并对其产率、理化性质、单糖组成及活性进行研究。首先酵母发酵液的上清液经乙醇沉淀、Sevag试剂除蛋白等方法得到黄褐色絮状胞外粗多糖(EPS),其产率为0.137 g/L。分别采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝法对EPS的纯度及蛋白含量进行测定,结果表明EPS的纯度为48.78%,蛋白含量为1.45%。采用气相色谱法分析其单糖组成,结果表明EPS是由木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为1.00:41.60:7.17:3.21。再分别采用Fenton反应,邻苯三酚自氧化法和普鲁士蓝法对EPS的体外抗氧化活性进行测定,结果表明EPS能够有效的清除羟基和超氧阴离子自由基,并具有一定的还原力。体内免疫及抗氧化活性实验是通过向海参体内注射EPS溶液,检测其对海参体腔液中碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明EPS能够不同程度地增强海参体腔液中AKP、LSZ、SOD、CAT活性,并显著减少MDA含量。胞外多糖EPS具有较高的生物活性,因此对其做进一步的纯化和分析。首先经Sepharose强阴离子交换层析初步纯化后,分别得到3个组分EPS1、EPS2和EPS3,并对3个组分的体外抗氧化活性进行比较。进一步采用Sephacryal凝胶过滤层析法,对抗氧化活性较高的EPS2组分再纯化,得到1个单一组分EPS2-1,采用气相色谱法分析其单糖组成,并验证其抗氧化活性。结果表明:EPS2-1是由木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖按摩尔比1.00:35.98:1.22:1.68的比例组成的;它具有较强的抗氧化活性,当其浓度为0.36 mg/mL时,对羟基自由基的清除率可达100%,明显高于同浓度下Vc对羟基自由基的清除率14.42%;当EPS2-1浓度为0.60 mg/mL时,对超氧阴离子自由基的清除率可达53.22%;同时EPS2-1表现出一定的还原力。研究证明该活性多糖具有很好的应用潜力,值得进一步研究开发。
【学位授予单位】:大连工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:Q936

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1 孙晓萌;季也蒙假丝酵母(Candida guilliermind)胞外多糖的分离纯化及活性研究[D];大连工业大学;2016年
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