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《大连工业大学》 2018年
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长春质碱转运基因CrTPT2在长春花毛状根中的应用

贾姗姗  
【摘要】:长春花Catharanthus roseus是萜类吲哚生物碱(Terpenoid Indole Alkaloids,TIAs)次生代谢研究的一种重要的模式植物,其中长春质碱(catharanthine)有抗菌止血、降血糖作用;阿玛碱(ajmalicine)能够扩张血管,降血压,但含量极少。长春花生长周期长,易受环境影响,使得长春花生物提取萜类吲哚生物碱受到很大程度上限制,市场上供不应求。长春花为多年生双子叶植物,易受发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)的感染,产生毛状根(Hairy root),其代谢及遗传特性皆稳定,且生长迅速,次生代谢品种多,适于发酵培养,有利于次生代谢物生产的优化。本论文通过大量实验确立长春花毛状根最优诱导方案,以C58C1为侵染用菌株,以无菌苗的叶片为外植体材料,1/2 MS培养基为诱导培养基,预培养时间为2天,使用共培养缓冲液侵染,5 s超声辅助为诱导可以实现最高的毛状根诱导率,然后将长春质碱转运基因CrTPT2过表达载体通过转化发根农杆菌C58C1,经农杆菌介导整合到长春花毛状根基因组中,构建转基因长春花毛状根。提取野生型以及转基因毛状根的总RNA,经DNA消化后反转录成cDNA,利用实时荧光定量PCR与高效液相技术分析CrTPT2的过表达对长春花毛状根中长春质碱合成的影响,发现通过构建CrTPT2的过表达转基因毛状根,在过表达目的基因的转基因毛状根中,长春质碱转运基因CrTPT2的表达量远远高于野生型毛状根,并且长春质碱的含量与野生型相比提高了四倍左右,并且转基因毛状根中阿玛碱的含量也比野生型中约提高了两倍。综上所述,本论文一方面通过大量实验确立了一种长春花毛状根最优诱导方案,另一方面通过构建过表达长春质碱转运基因CrTPT2的转基因毛状根,成功提高长春花毛状根中长春质碱与阿玛碱的含量,表明CrTPT2在阿玛碱的合成转运中也起到的关键作用,为后续代谢调控途径相关基因的功能研究以及长春花中次生代谢产物合成的调控提供一条高效可行性方案。
【学位授予单位】:大连工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:Q943.2

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄伟剑;何梦玲;张宏意;严寒静;;发根农杆菌诱导广藿香毛状根的研究[J];广东药学院学报;2015年02期
2 杨致荣;王兴春;薛金爱;李润植;;发根农杆菌介导的长春花高效转基因体系的建立[J];植物生理学报;2012年10期
3 邢世海;王荃;潘琪芳;赵静雅;唐克轩;;长春花萜类吲哚生物碱的生物合成途径[J];西北植物学报;2012年09期
4 章津;赵淑娟;胡之璧;;长春花吲哚萜类生物碱代谢途径研究进展[J];药物生物技术;2012年03期
5 董晓宁;赵海福;刘文博;;长春花生物碱提取技术的研究进展[J];畜牧与饲料科学;2012年03期
6 张悦;杨世海;;黄秋葵毛状根的诱导及培养[J];时珍国医国药;2011年12期
7 谢小东;程廷才;王根洪;段军;夏庆友;;植物ABC和MATE转运蛋白与次生代谢物跨膜转运[J];植物生理学报;2011年08期
8 李景滨;刘同祥;王培忠;张宗申;;金铁锁毛状根诱导及培养体系的建立[J];中国中药杂志;2011年05期
9 向蓓蓓;朱晔荣;王文娟;王勇;;盐胁迫对长春花愈伤组织生长及阿玛碱积累的影响[J];中草药;2011年01期
10 陈伟莉;牟旭鹏;刘冬影;;毛状根在植物次生代谢产物生产方面应用的研究进展[J];黑河学院学报;2010年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵雪;孔维军;麻馨月;常桂英;董长颖;杨世海;;黄花败酱发状根培养体系的建立及其抑菌作用研究[J];世界中医药;2015年12期
2 胡海英;吴晓玲;;银柴胡离体培养与毛状根诱导技术初步研究[J];生物技术进展;2015年06期
3 陈颖;罗永亚;邱娜菲;王瑞琪;盛丽莉;曹福亮;;NaCl处理对银杏悬浮培养细胞生长、耐盐性和黄酮积累的影响[J];南京林业大学学报(自然科学版);2015年06期
4 刘向;徐雅娟;;金铁锁活性成分机制研究及新技术应用[J];人参研究;2015年03期
5 陈观水;陈来;林思妮;喻阳;艾育芳;;太子参毛状根诱导及培养体系的建立[J];时珍国医国药;2015年08期
6 王斌;刘金岩;张燕;;水苏碱衍生物的合成研究[J];药物生物技术;2015年04期
7 刘连旺;张永清;李先恩;;药用植物毛状根研究进展[J];山东中医药大学学报;2015年03期
8 金红;焦根林;陈刚;;基于RNA-seq技术的楮头红转录组分析[J];生物技术通报;2015年05期
9 刘彤;杨淑慎;方荣锋;张广昊;;Ri质粒介导的毛状根体系建立及其在植物次生代谢产物合成中的研究进展[J];植物科学学报;2015年02期
10 黄伟剑;何梦玲;张宏意;严寒静;;发根农杆菌诱导广藿香毛状根的研究[J];广东药学院学报;2015年02期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王颖芳;贾真;韩彬;李钟;戴王强;李军;陈艳芬;胡旭光;;改进CTAB法提取红豆杉毛状根DNA[J];亚太传统医药;2012年04期
2 芦韦华;陈永芳;王芳;代宁波;郝爱花;李翠芳;嘉素尔;;理化条件对新疆紫草毛状根培养及紫草素含量的影响[J];华中农业大学学报;2012年01期
3 赵爽;潘少丽;;毛状根培养技术在中草药中的应用[J];时珍国医国药;2011年06期
4 李景滨;刘同祥;王培忠;张宗申;;金铁锁毛状根诱导及培养体系的建立[J];中国中药杂志;2011年05期
5 陈伟莉;牟旭鹏;刘冬影;;毛状根在植物次生代谢产物生产方面应用的研究进展[J];黑河学院学报;2010年04期
6 周晨;赵淑娟;胡之璧;;长春花脱乙酰氧基文多灵-4-羟化酶基因启动子的克隆与生物信息学分析[J];药物生物技术;2010年06期
7 徐立新;赵寿经;梁彦龙;钱延春;金士琨;;外源调节物质对人参毛状根生长及皂苷合成的影响[J];吉林大学学报(工学版);2010年06期
8 周玮玲;;长春碱的提取与纯化研究[J];山东轻工业学院学报(自然科学版);2010年04期
9 岳庆喜;祝冬青;赵淑娟;郑珍贵;王峥涛;胡之璧;;长春花细胞C_(20)hi生物碱超量合成及激素自养的分子机制探讨[J];药物生物技术;2010年05期
10 张来;罗正伟;张显强;孙敏;;发根农杆菌Ri质粒的特征及其应用[J];安徽农业科学;2010年15期
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1 王慧芳;李凤霞;秦立强;;烟草毛状根中茄尼醇的研究进展与展望[J];科技创新导报;2017年05期
2 王丽;刘琪;宁明明;张卫东;戚小利;李秀霞;;龙葵毛状根诱导条件的研究[J];北方园艺;2015年04期
3 李敏;曲丹;于海娣;王慧梅;;木豆毛状根生长特性及相关生理生化指标研究[J];植物研究;2014年03期
4 谢丽琼;杨毅;马东建;李冠;;甘草毛状根培养体系研究[J];食品工业科技;2011年05期
5 李雅;齐香君;龚频;刘瑞颖;李卫平;;黄芩毛状根抗炎、解热及镇痛活性研究[J];陕西科技大学学报(自然科学版);2011年06期
6 王子艳;杜旻;吴晓俊;周吉燕;胡之璧;;转透明颤菌血红蛋白基因黄芪毛状根急性毒性研究[J];食品与药品;2010年09期
7 齐香君;郭乐康;陈秀清;;黄芩毛状根的生长与产物代谢动态研究[J];安徽农业科学;2008年30期
8 黄玉仙;;药用植物毛状根培养与次生代谢产物的研究[J];海峡药学;2008年08期
9 刘展眉;崔英德;;喜树毛状根诱导及其喜树碱产生研究[J];化学试剂;2007年08期
10 刘高;饶力群;杨华;;影响毛状根生长及其次生代谢产物合成因素的研究进展[J];生物技术通讯;2007年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郝瑞文;贾敬芬;林雪;郝建国;;怀牛膝毛状根转化系的建立及其齐墩果酸含量的分析[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
2 刘峻;丁家宜;周倩耘;何林;;真菌诱导子对人参毛状根皂苷生物合成和生长的影响[A];全国第5届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2002年
3 杨世海;毕晓秀;;紫锥菊毛状根培养体系的建立及生物活性成分分析[A];中国植物学会七十五周年年会论文摘要汇编(1933-2008)[C];2008年
4 胡之璧;刘涤;宋纯清;;生物技术研究与产业开发是药物资源可持续利用的重要途径[A];中国自然资源学会全国第三届天然药物资源学术研讨会论文集[C];1998年
5 徐洪伟;陆静梅;周晓馥;;水分胁迫下玉米毛状根再生植株生理指标分析[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
6 王洪峰;;NAA/IBA配比对金铁锁毛状根构型及生长的影响[A];第九届海峡两岸森林保育经营学术论坛论文集[C];2018年
7 肖雄健;范文毅;杨敬平;朱凌;杨永华;;甘草细胞次生物形成和调控的初步研究[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
8 ;虎杖毛状根的诱导、优化培养及白藜芦醇和虎杖苷的产生[A];第六届全国药用植物和植物药学术研讨会论文集[C];2006年
9 傅承新;姜维梅;王沛;王晓韵;陈绍媛;;八角莲毛状根的诱导及其鬼臼毒素的产生[A];第六届全国药用植物和植物药学术研讨会论文集[C];2006年
10 刘成洪;段艳冰;张磊;张汉明;陈万生;;短葶飞蓬毛状根的诱导及黄酮含量测定[A];长三角现代植物生物学与农业专题论坛论文集[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 张建中 季文;黄芪毛状根培养体系建成[N];健康报;2006年
2 王华锋;上海中医药大学黄芪毛状根培养获突破[N];中国医药报;2006年
3 记者 王阳;让中药材长出更多有效成分[N];上海科技报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 焦骄;黄芪毛状根培养体系的优化及其主要活性成分生物合成的诱导调控研究[D];东北林业大学;2016年
2 李明;通过大豆毛状根体系快速验证GmNAC08、GmNAC06和GmNAC15的基因功能[D];石河子大学;2017年
3 徐洪伟;发根农杆菌诱导玉米毛状根再生植株及抗旱性研究[D];东北师范大学;2007年
4 翟丹丹;青蒿毛状根中活性化合物的分离分析及其生物合成调控探索[D];华东理工大学;2010年
5 阎岩;微生物对丹参毛状根生长和次生代谢的影响及其机理[D];西北农林科技大学;2014年
6 李铂;丹参近缘种成分差异及毛状根中丹参酮积累调控研究[D];西北农林科技大学;2015年
7 汝梅;夏枯草迷迭香酸生物合成途径酪氨酸支路关键酶基因的克隆与功能研究[D];中国科学院教育部水土保持与生态环境研究中心;2017年
8 吕冬梅;道地药材研究模型“丹参毛状根”的评价研究[D];中国中医科学院;2008年
9 肖璇;发根农杆菌介导的柑橘遗传转化体系建立及转基因柑橘溃疡病抗性分析[D];华中农业大学;2014年
10 王渭玲;膜荚黄芪营养特性及次生代谢调控的研究[D];西北农林科技大学;2008年
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1 郭双;酵母提取物对颠茄毛状根碳氮代谢及托品烷类生物碱代谢的调控研究[D];西南大学;2018年
2 娄亚芳;棉花毛状根转化体系的建立[D];河北农业大学;2018年
3 靳小莎;甘草转基因毛状根诱导及培养体系的建立[D];河北农业大学;2018年
4 贾姗姗;长春质碱转运基因CrTPT2在长春花毛状根中的应用[D];大连工业大学;2018年
5 刘彤;Ri质粒介导的曼地亚红豆杉毛状根体系的探索性研究及决明毛状根体系的建立[D];西北农林科技大学;2014年
6 俞颖;西兰花毛状根诱导体系的优化及信号分子对萝卜硫素合成释放的调控[D];甘肃农业大学;2018年
7 尤红;野生丹参微生物资源及其对毛状根的诱导效应[D];浙江理工大学;2017年
8 王慧芳;利用诱导子技术提高烟草毛状根中茄尼醇含量的研究[D];苏州大学;2017年
9 李春玲;不同影响因子对水飞蓟毛状根生长及次级代谢产物的影响[D];吉林农业大学;2016年
10 王丽;龙葵毛状根诱导及其抑菌活性研究[D];佳木斯大学;2015年
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