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《沈阳农业大学》 2017年
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丹东地区鸡传染性贫血病毒的分离鉴定及VP3蛋白促凋亡作用的研究

蔡静  
【摘要】:鸡传染性贫血病(Chicken infectious anemia CIA)俗称蓝翅病,是由鸡贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)引起的以鸡的贫血和免疫抑制为主要特征的传染病。该病1979年在日本被首次发现后,如今已遍布全球所有的养鸡国家,是危害养禽业的重要传染病。鸡是CAV的唯一宿主,雏鸡感染CAV后的典型病理变化是:贫血、骨髓黄化、胸腺萎缩等组织学损伤。本试验通过临床症状观察、病理剖检、基因片段的PCR扩增、鸡胚接种、动物回归试验等对辽宁省丹东地区4个商品肉鸡饲养场疑似CAV感染的鸡群进行了 CAV的分离、鉴定。结果:成功分离出1株CAV,命名为DD-2016;DD-2016基因编码区全长为2297bp,共编码764个氨基酸。利用生物学软件对分离株DD-2016与GenBank中已发表的国内外具有代表性的7株CAV基因进行对比,结果DD-2016与F507715.1South kores同源性最高,为99.17%,与AF313470.1USA同源性最低,为95.59%;该分离株能引起雏鸡发生贫血、皮下出血、胸腺萎缩、骨髓黄化等典型病理学损伤。分离株DD-2016与参考株CUX-1比较结果显示,DD-2016的VP3基因的碱基序列存在两个位点的碱基突变,并导致了相应的第116位、118位这两个位点的氨基酸发生改变。为了阐明这两个位点的氨基酸的变异是否能影响其促凋亡作用,本实验以分离株DD-2016感染5日龄SPF鸡胚,以感染19日龄鸡胚的胚体基因组DNA为模板,扩增VP3基因,并克隆表达到原核载体pET-32a上,然后转染鸡马立克氏肿瘤细胞-MDCC-MSB1细胞,经流式细胞仪检测,研究分离株VP3蛋白的促凋亡作用。结果:成功构建了 DD-2016VP3基因的原核表达载体pET-32a-VP3,表达产物CAV VP3蛋白能显著促进MDCC-MSB1细胞凋亡:正常生长状态下的细胞中活细胞占84.5%、死亡细胞占9.1%、凋亡早期细胞占1.1%,凋亡晚期占5.3%;试验组细胞中活细胞占24%、死亡细胞占1%、凋亡早期细胞占5.2%,凋亡晚期细胞占69.7%。
【学位授予单位】:沈阳农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.65

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相关作者
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