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《沈阳农业大学》 2018年
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羊肚菌发酵菌丝体三萜的提取、纯化及生物活性研究

郭睿昕  
【摘要】:羊肚菌是现下炙手可热的兼具食药用的野生真菌之一。当前,很多人对于其食用保健效果,有了越来越多的认识,例如:羊肚菌中的多糖成分具有提高人体免疫力、缓解疲劳、抗癌、抑菌、抗氧化等多种对人类身体有益的保健功能。羊肚菌中含有种类繁多的对人体有益的成分,实验证明人工培植的羊肚菌子实体与自然生长的羊肚菌,基本营养成分在子实体和发酵培养的菌丝体中的含量都相差无几,羊肚菌子实体与其菌丝体中都含有丰富的滋补用及药用价值的活性物质。本研究利用野生的羊肚菌子实体进行组织分离和孢子分离,分离并纯化,最后得到了一株羊肚菌菌株,菌丝呈现乳白色,长势致密。然后对分离后的菌种进行纯化,由孢子分离母种后的菌丝体生长茂密且旺盛。将菌丝体接入液体培养基中培养,得到的菌丝球形态与标准的羊肚菌菌丝球形态一致,说明由孢子分离得到的菌种纯度可靠。通过培养形态观察和显微镜观察,分离得到的菌株菌丝与标准的羊肚菌菌株形态特征一致,表明所分离得到的菌株是羊肚菌菌株。本研究利用响应面法对羊肚菌菌丝体的发酵条件进行了优化,使用Design-Expert8.0软件进行试验与分析。模型预测的最优发酵组分为:碳源为可溶性淀粉,氮源为牛肉膏,pH值为6,摇床转速为140rpm/min。在预测条件下羊肚菌菌丝体干重质量为3.82g/200mL。经验证试验得到羊肚菌菌丝体干重为3.77g/200mL,证明了模型的可行性。本研究利用响应面法对羊肚菌发酵菌丝体中三萜类物质的提取工艺进行了优化,利用Design-Expert8.0进行试验与分析。模型预测提取的最佳条件为:乙醇体积分数60.90%,超声时间25.46min,超声功率700.21W,液固比为23.90mL/g。在此条件下,三萜类化合物提取率是35.16mg/mL。经验证试验得到三萜类化合物提取率为35.22mg/m L,说明模型有效。本试验选用D-101型大孔吸附树脂对羊肚菌发酵菌丝体中三萜类物质进行纯化,效果良好。洗脱剂选择乙醇,浓度分别选择30%、40%、50%、60%、75%、95%对总三萜粗提液进行梯度洗脱,其中60%、70%、95%乙醇都可以将三萜类化合物洗脱下来。通过DPPH法定量测定流出液中三萜类物质抗氧化活性,其清除率接近40%,说明各部分洗脱的收集液均具有较高的抗氧化活性。高效液相色谱(HPLC)分析后得出结果:87号管收集液和123号管收集液中含有的三萜类物质为白桦脂酸。本试验对羊肚菌发酵菌丝体中所提取的三萜类物质进行了抗氧化活性与抗肿瘤细胞的生物活性的测定,其中抗氧化活性的测定指标包括DPPH自由基、总还原力、超氧阴离子自由基、羟基自由基,整体上来讲,从羊肚菌发酵菌丝体中提取出的三萜类化合物具有一定的抗氧化活性。同时它也能够显著抑制HT-29细胞、HepG-2细胞、PC-3细胞和HeLa细胞增殖的生长,四种肿瘤细胞的IC50分别为1.79、3.06、1.31和4.23,对于PC-3细胞的抑制作用是最好的。
【学位授予单位】:沈阳农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:TS219;TQ920.6

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