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《沈阳农业大学》 2004年
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白地霉2.498与白腐真菌5.776原生质体融合

林树梅  
【摘要】:本文采用近年兴起的微生物育种的一种有效手段—原生质体融合技术,用PEG6000作为助融剂使对数生长中期的白腐真菌(Phanerochaetechrysosporium 5.776)原生质体与白地霉(Geotrichum candidium 2.498)原生质体融合,结合抗药性及灭活单一亲本的方法在选择性培养基上筛选出产单细胞蛋白能力强又能有效分解木质素的融合菌株。本研究着重探讨了影响白地霉(Geotrichum candidium 2.498)和白腐真菌(Phanerochaete chrysosporium5.776)原生质体形成和再生的各种因素,并采用多种方法对融合子进行了鉴定。试验的具体方法及研究结果如下: 1.白地霉和白腐真菌分别采用平皿菌落计数法和菌丝干重法测定生长曲线,结果显示:白地霉和白腐真菌对数生长中期分别为35小时和70小时。 2.选用11种药物分别对白地霉和白腐真菌进行抗药性测定,最终选择放线菌酮作为抗性鉴定用药品。 3.利用单因素实验探讨影响白地霉和白腐真菌原生质体形成率和再生率的各种因素,结果是:菌龄为对数生长中期、酶浓度为2%纤维素酶+2%蜗牛酶、酶解时间为2小时、酶解温度为31℃、脱壁促进剂为0.2%L-半胱氨酸、渗透压稳定剂为0.8MNaCL。 4.选用正交实验探讨影响白地霉和白腐真菌原生质体形成率和再生率的各种因素的最佳水平组合,结果与单因素实验结果相吻合。 5.选用巯基酶的专一性抑制剂—碘乙酰氨对白地霉原生质体进行灭活处理。 6.用PEG6000作为助融剂,在20℃水浴条件下使二者融合。在选择性培养基上获得72株融合子。连续传10代,获得12株稳定的融合子。 7.比较亲本及融合子菌落表型、显微形态、拮抗试验、对融合子初步鉴定。 摘要 8.用全细胞可溶性蛋白电泳及同工酶电泳进一步对融合子进行鉴定, 去伪存真获得3株遗传稳定的融合子。 9.对亲本及融合子木素过氧化物酶、锰过氧化物酶及漆酶活性进行测 定。结果证明融合子Rl三种酶活都不同程度的高于亲本白腐真菌,将Rl 确立为进一步发酵秸杆的菌种。
【学位授予单位】:沈阳农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q943

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