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《沈阳农业大学》 2008年
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β-葡萄糖苷酶提高刺嫩芽皂甙活性方法的研究

颜廷才  
【摘要】: 本论文以辽宁本溪县产刺嫩芽为原料,系统研究了刺嫩芽皂甙的提取纯化方法与条件、刺嫩芽皂甙基本性质、β-葡萄糖苷酶处理对皂甙影响及酶处理后刺嫩芽皂甙生理活性的提高程度,确定出了刺嫩芽皂甙的提取纯化工艺和降低毒性提高活性的方法,扩大了刺嫩芽皂甙的应用范围,提高了刺嫩芽的经济价值。得到主要结论如下: 确立了齐墩果酸作为标准品的波长为291nm的皂甙紫外检测方法,证明了刺嫩芽含有丰富的齐墩果酸类皂甙,可以用齐墩果酸含量计算出刺嫩芽皂甙的总量。极差分析提取正交试验因素的影响大小关系顺序为:提取温度>提取时间>固液比>乙醇浓度,最佳条件为浸提温度70℃、浸提时间3h、固液比1:20、乙醇浓度90%,最大提取率为:8.1%。超声波处理正交试验结果表明:影响超声波辅助提取皂甙的因素从大到小排列依次是料液比、温度、超声波处理时间、乙醇浓度,当料液比为1:20,温度为65℃,超声波时间为20min,乙醇浓度为100%,刺嫩芽皂甙提取率最大为8.7%。 刺嫩芽粗皂甙经过4次氯仿脱蛋白处理后,脱去了81.9%的蛋白质。经木瓜蛋白酶正交试验极差分析,影响因素从大到小排列顺序依次为:温度、酶量、处理时间、pH值,最佳处理条件为温度50℃、酶用量为2%、酶解2h、pH为6.0,又脱去剩余蛋白的80.2%,蛋白质浓度降到0.4mg/mL。AB-8树脂对刺嫩芽皂甙的吸附量达63.9mg/g,解吸率为96.5%,当解吸液体积为400mL,乙醇浓度为70%,流速为0.6mL/min,pH值为8.0时,AB-8大孔树脂对刺嫩芽皂甙的纯化效果最好。用硅胶柱层析分离刺嫩芽皂甙的不同组分得到6份样品,质量比例为:34.3%、21.1%、16.9%、15.1%、7.9%、4.7%。 泡沫试验、Liebermann反应、三氯化锑-氯仿饱和溶液反应、TCL检测试验都证明了刺嫩芽提取物里面含有丰富的皂甙成分。硅胶薄层层析证明刺嫩芽皂甙的单糖可能由鼠李糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖和木糖组成,这为酶水解提高刺嫩芽皂甙活性研究提供了依据。确立了215nm为检测波长,乙腈与水为流动相梯度洗脱的HPLC皂甙组分检测条件,发现样品1、2、3中含有4个单体物质;样品4、5中含有5个单体物;样品6中含有6个单体物质。6个皂甙样品中都含有齐墩果酸,齐墩果酸保留时间为14.7min。确立了HPLC检测齐墩果酸含量的方法条件为波长215nm、乙腈和水等度洗脱,齐墩果酸保留时间为7.0min。6个样品的齐墩果酸含量分别为45.6%、36.1%、31.4%、10.7%、26.6%、25.5%,精总皂甙里的齐墩果酸含量为33.5%。紫外吸收表明,刺嫩芽总皂甙有六个比较明显的吸收峰,其中在299nm处的吸收峰最大,说明总皂甙中含有多个皂甙单体,分子比较大;皂甙样品1到皂甙样品6六个皂甙样品中有多个明显吸收峰,吸收峰逐渐向长波附近集中,说明皂甙单体分子逐渐变大,极性减弱。红外吸收表明:皂甙组分的波形都非常相近,经过基础图谱分析可以发现皂甙中含有脂肪烃、脂肪族伯醇、脂肪族仲醇等官能团,样品1与2还含有脂肪酸官能团,经详细图谱检索,说明皂甙含有带羟基的长碳链、异麦芽糖和β-D-半乳糖。 β-葡萄糖苷酶水解正交试验极差分析表明,影响程度依次为酶解温度>酶用量>酶解时间,三因素的最佳水平为:酶解温度为40℃,酶用量为3.0mg,酶解时间为120min。经β-葡萄糖苷酶酶解后刺嫩芽皂甙以甲醇为洗脱剂用硅胶柱分离,共收集6份样品,质量比例为:34.8%、24%、11.8%、11.3%、8.1%、10.0%。经进样量10μL;流动相甲醇与水70:30等度洗脱;流速为1.0mL/min,检测波长215nm,柱温为25℃的高效液相色普检测,β-葡萄糖苷酶酶解后样品E1、E2、E3中含有4个分离比较好的基本单体物质,样品E4、E5、E6中含有5个单体物质,样品都含有齐墩果酸,保留时间为5.1min。酶解后刺嫩芽皂甙在紫外检测条件下仍然含有多个吸收峰,但吸收明显向低波长靠近,多数在236nm处的吸收峰最大,说明酶解后皂甙中单体分子明显变小,单体数量减少。红外吸收表明:酶解后皂甙的波形都非常相近,经过基础图谱分析可以判断皂甙中含有脂肪烃、脂肪族伯醇、脂肪族仲醇、脂肪族伯胺、脂肪酸盐等官能团,说明酶水解掉部分单糖,裸露出了羧基与长的碳链。含有带羟基或氨基的长碳链、烯酸结构、异麦芽糖、β-D-苯基葡糖苷、甘露醇、苯甲酸和β-D-半乳糖成分。 皂甙溶液在较低浓度时对羟基自由基与氧自由基就有一定的清除作用,自由基的清除效果与皂甙的浓度呈显著正相关性。解酒与防醉试验表明,刺嫩芽皂甙具有抑制乙醇吸收作用,从而能够显著延长酒精耐受时间,降低醉酒维持时间,有解酒防醉保护肝脏效果。体内抗氧化试验表明,刺嫩芽皂甙可以提高小鼠SOD活性,降低小鼠体内组织的MDA含量。刺嫩芽皂甙能够提高小鼠的脾脏指数与胸腺指数,增强小鼠的免疫能力;也可以降低血清中的总脂、总胆固醇,提高血清中高密度脂蛋白。刺嫩芽皂甙只是在一定程度上调解正常小鼠的血糖与胰岛素水平;显著降低高血糖模型小鼠的血糖值,显著提高高血糖模型小鼠的胰岛素水平,对于高血糖具有非常好的治疗作用。经β-葡萄糖苷酶酶解后的皂甙活性更加显著,说明β-葡萄糖苷酶可以提高刺嫩芽皂甙活性。
【学位授予单位】:沈阳农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:TQ464.3

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【参考文献】
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1 吴勃岩,齐彦,宋春燕,肖洪彬;龙牙木忽木叶总皂甙拮抗环磷酰胺致突变作用的研究[J];癌变.畸变.突变;1999年06期
2 葛敬岩,郭春尧,赵春燕,张学新;龙牙葱木皂苷对大鼠血流动力学的影响[J];白求恩医科大学学报;2001年06期
3 赵春燕,郭春尧,张义,张学新,孙晓霞,孙亚芹;龙芽葱木皂苷对离体工作心脏的正性肌力作用[J];吉林大学学报(医学版);2002年03期
4 董志恒,李才,曲萌;苯那普利对糖尿病大鼠心肌CTGF基因表达的影响及作用机制[J];吉林大学学报(医学版);2004年04期
5 张学义,李发,李平,艾志新;刺嫩芽加工前后营养成份分析[J];中国林副特产;2002年03期
6 刘瑞林;佟立君;纪萍;那晓婷;朴明浩;宋海风;;无刺龙牙楤木生物学特性调查初报[J];中国林副特产;2006年02期
7 闫子鹏,薛锦峰;紫外分光光度计测定大豆中的总皂甙的方法[J];大豆通报;2005年02期
8 王忠壮,陈琰,宋洪杰,高玮,胡晋红,檀密艳;太白楤木中齐墩果酸的含量测定[J];第二军医大学学报;2000年05期
9 马小琼,鱼红闪,田兵,金风燮;人参皂甙组分的分离方法[J];大连轻工业学院学报;1999年01期
10 徐龙权,韩颖,田晶,金凤燮;大豆皂苷的提取[J];大连轻工业学院学报;2000年01期
【共引文献】
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1 赵泽贞,温登瑰,魏丽珍,黄民提;杏仁对12种抗肿瘤药物的诱变性的抑制效应[J];癌变.畸变.突变;1992年06期
2 徐鑫成,杨守志,彭一良;芦荟和大蒜抗诱发微核效应[J];癌变.畸变.突变;1999年05期
3 柳金矿,王明寿,周雪梅,张倩,陈卫红,周松林;嚼食槟榔人群末梢血淋巴细胞微核率的调查研究[J];癌变.畸变.突变;1994年04期
4 吴勃岩,王华江,赵玉桢,段玉芹,孙玉珍;赤包根茎醇提取物致突变性研究[J];癌变.畸变.突变;1998年03期
5 王金文;无药残饲料添加剂在畜牧生产中的应用[J];山东农业科学;2003年01期
6 陈彦;吴东儒;李国贤;;黑果菝葜皂甙的化学结构和灭螺活性研究[J];安徽大学学报(自然科学版);1992年04期
7 张部昌,吴东儒,陶乐平;天门冬多糖的分离纯化及其部分理化性质[J];安徽大学学报(自然科学版);1994年02期
8 章春芳;低极性人参皂甙的制备研究[J];安徽化工;2005年03期
9 魏凤玉;余锦城;解辉;;天然无患子皂苷的提取分离[J];安徽化工;2007年03期
10 何国兴;郭凌超;;蜜饮茶治疗慢性咽炎200例报告[J];中医临床与保健;1989年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 裴迎新;衡正昌;段广才;张遵真;;传统豆制品中大豆皂甙含量的测定[A];食物功效成分与健康——达能营养中心第九次学术年会会议论文集[C];2006年
2 彭鑫林;王辉宪;谢聃;马玉美;欧阳建文;王仁才;熊兴耀;;葡萄籽中多酚的超声波提取及提取物中齐墩果酸的含量分析[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
3 武媛林;刘平;刘孟军;;酸枣仁化学成分研究进展[A];第五届全国干果生产、科研进展学术研讨会论文集[C];2007年
4 赵映淑;朱毅;陈国彪;;水黄皮的生药学研究[A];海南省药学会2009年学术会议论文集[C];2009年
5 张强;;红花的药理与使用[A];第二十一届航天医学年会暨第四届航天护理年会论文汇编(下册)[C];2005年
6 李钢;潘俊伟;王克宇;;矿物中药白矾的结构测定与分析[A];江苏省计量测试学会2005年论文集[C];2005年
7 刘钢;吴飞虎;屠彦红;宋若会;;滴鼻灵治疗变应性鼻炎300例的临床观察[A];中华中医药学会耳鼻咽喉科分会第十二次学术研讨会暨嗓音言语听力医学专题学术研讨会论文集[C];2005年
8 乔金丽;王丽娜;;浅谈傣药血竭的应用[A];2005国际傣医药学术会议论文集[C];2005年
9 杨生绪;肖一宾;杨斌;;土家药通草根治疗老年男性前列腺增生性排尿障碍31例临床观察[A];2006年全国土家族医药学术研讨会论文集[C];2006年
10 郑才成;;海南生态药材资源利用与可持续发展[A];第二届中国(海南)生态文化论坛论文集[C];2005年
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1 柳风祥;中药提取物免疫调节作用的研究及多糖的提取分离鉴定和分子量测定[D];山东农业大学;2009年
2 于定荣;以慈航丹方药探讨含挥发性成分复方用“半仿生提取法”研究的模式[D];山东中医药大学;2010年
3 张为民;太白蓼和朱砂七提取物抗病毒及抑菌活性研究[D];西北农林科技大学;2010年
4 才谦;中药独活有效部位抗风湿新药研究[D];辽宁中医学院;2001年
5 封洲燕;大鼠睡眠特性分析和催眠药物筛选方法的建立[D];浙江大学;2001年
6 丁之恩;西洋参干制机理及茎叶果深加工的研究[D];中南林学院;2002年
7 郭志新;血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其作用机制的研究[D];天津医科大学;2002年
8 付玉杰;甘草黄酮和甘草酸提取纯化工艺研究[D];东北林业大学;2002年
9 陶朝阳;刺异叶花椒根抗肝纤维化活性物质基础研究[D];第二军医大学;2002年
10 许强芝;条纹拟海牛和大室膜孔苔虫生物活性成分研究[D];第二军医大学;2002年
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1 王俊;林荫银莲花离体快繁体系的优化及其有效成分的研究[D];华中农业大学;2010年
2 李秀珍;解耦联蛋白2对糖尿病小鼠心肌细胞凋亡相关指标的影响[D];南京医科大学;2010年
3 张桂敏;宣木瓜果实中主要生理活性物质提取分离研究[D];安徽农业大学;2010年
4 周胜男;马铃薯中酚类物质的提取、纯化及检测方法研究[D];安徽农业大学;2010年
5 韩美艳;桔梗多糖的提取、分离纯化和结构研究[D];郑州大学;2010年
6 程素霞;雀儿舌头化学成分研究和三氮烯的合成[D];郑州大学;2010年
7 边静静;不同产地娑罗子主要成分分析比较研究[D];甘肃农业大学;2010年
8 高叶;椿皮氯仿提取物的化学成分研究[D];湖南中医药大学;2010年
9 何少平;柴胡三参胶囊对心肌缺血心律失常模型大鼠心肌细胞Ca~(2+)及SERCA2a表达的影响[D];湖南中医药大学;2010年
10 李芳;四妙君逸软膏外用于肛肠病术后镇痛的长期毒理学实验研究[D];湖南中医药大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 区大卫;胸腺激素类在肿瘤治疗上的应用[J];癌症;1984年02期
2 冯炜权;运动疲劳及过度训练的生化诊断——运动生物化学动态之三[J];北京体育大学学报;2000年04期
3 周锦琳,田野;急性运动对大鼠骨骼肌线粒体Ca~(2+)-ATP酶和H~+-ATP酶活性的影响[J];北京体育大学学报;2001年03期
4 李晓梅,陆艳娟,李晓林;成年糖尿病大鼠重要器官组织POD活性变化[J];吉林大学学报(医学版);2004年01期
5 钟国赣,孙晓霞,李云义, 江岩, 魏永弟,安占元;黄芪皂甙对离体工作心脏的强心作用[J];白求恩医科大学学报;1994年05期
6 李昀,田呈瑞;银杏叶总黄酮复合饮料加工工艺研究[J];保鲜与加工;2000年01期
7 李霞,李荣芷,王序,张全兴,朱孝伦,施荣富;大孔吸附树脂对亲水性酚类衍生物吸附作用的研究[J];北京医科大学学报;1988年06期
8 柳荣祥,朱全芬,夏春华;茶皂素生物活性应用研究进展及发展趋势[J];茶叶科学;1996年02期
9 王章存;大豆皂甙研究进展[J];大豆科学;1996年01期
10 崔洪斌,刘颖,陈近利,彭向雷;大豆中具生理活性物质的研究与开发[J];大豆通报;1998年06期
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1 韩伟;叶亚婧;雷祖海;葛珊珊;姬鹏俊;;超声波在活性成分提取中的应用进展[J];机电信息;2011年20期
2 岳磊;林琼妹;许格;林磊;石贤爱;;含离子液体介质中酶催化糖基化合成4-羟基苯乙基β-D-葡萄糖苷[J];分子催化;2011年03期
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6 何友文;李江;王剑锋;饶军;毛慧玲;;Penidiella sp. HEY-1β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质[J];林产化学与工业;2011年03期
7 康永锋;李艳;段吴平;邹世文;徐佳漪;孙涛;;超声波辅助提取赤豆中总黄酮的工艺研究[J];时珍国医国药;2011年07期
8 李治龙;刘新华;郭凌云;赵明;;新疆孜然精油提取工艺的优化[J];塔里木大学学报;2011年02期
9 李艳梅;李国银;赵福顺;张红梅;;玫瑰香葡萄皮色素的提取及其抗氧化活性研究[J];食品工业科技;2011年07期
10 李艳梅;钟智敏;赵福顺;;苦菜中天然物质的提取及抑菌效果的研究[J];中国食品工业;2010年12期
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1 孟宪文;宋小红;陈历俊;刘长江;;β-葡萄糖苷酶的研究进展[A];中国奶业协会年会论文集2009(下册)[C];2009年
2 蔡亚楠;郁彩虹;高裙裙;张琦;张耀东;;木犀草素和β-葡萄糖苷酶相互作用的荧光光谱法研究[A];中国化学会第十届全国发光分析学术研讨会论文集[C];2011年
3 赵伯涛;钱骅;陆伟;张卫明;;β-葡萄糖苷酶水解栀子苷研究[A];第九届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C];2010年
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5 林曦;方幼兰;庄艺娜;王锐勇;;玫瑰茄皂甙的纯化与测定[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
6 罗志勇;陆秋恒;刘水平;胡维新;;人参植物皂甙生物合成相关新基因的筛选与鉴定[A];湖南省生理科学会新世纪学术年会论文摘要汇编[C];2002年
7 刘春龙;李杰;;丝兰皂甙对绵羊瘤胃内纤维素酶、总脱氢酶活性及原虫数的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
8 唐彦君;李杰;;丝兰属植物提取物——丝兰皂甙对绵羊瘤胃氨氮及尿素氮浓度的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
9 唐彦君;李杰;;丝兰属植物提取物——丝兰皂甙对绵羊饲料氮代谢率的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
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1 彭任辉 肖午阳;植物皂甙与中药[N];中国医药报;2001年
2 记者 孙华泰;西丰县人工栽培刺嫩芽万余亩[N];铁岭日报;2007年
3 记者/师威;夹河厂村念“山字经”走“规模路”[N];铁岭日报;2009年
4 云南农业大学 管敏强 毛华明 易礼胜 刘影;生物活性添加剂——皂甙[N];中国畜牧水产报;2001年
5 张宁;仙人洞村反季“高档菜”产业创造高效益[N];辽宁日报;2006年
6 本报记者 王宝鑫;在九分山上做大文章[N];丹东日报;2006年
7 本报记者 张文馨;野菜并非绝对的绿色[N];中国消费者报;2003年
8 ;刺五加皂甙对大鼠血管性痴呆有防治作用[N];中国中医药报;2005年
9 解放军总医院营养科 刘英华;餐前饮黑豆奶减肥[N];健康时报;2007年
10 刘志华;恰到好处煮豆浆[N];卫生与生活报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 颜廷才;β-葡萄糖苷酶提高刺嫩芽皂甙活性方法的研究[D];沈阳农业大学;2008年
2 钱利纯;高效水解大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶及其对肉公鸡生产性能的影响研究[D];浙江大学;2008年
3 张益波;新型β-葡萄糖苷酶菌株syzx4筛选、发酵及酶纯化表征和应用[D];吉林大学;2011年
4 李良鸣;运动后糖原恢复规律与机制及中药的干预研究[D];北京体育大学;2004年
5 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
6 刘泽源;中草药镇痛活性的筛选和药理学研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2001年
7 彭文杰;若干皂甙和黄酮甙的合成研究[D];中国科学院研究生院(大连化学物理研究所);2006年
8 张梁;基质利用和酒精发酵性能改善的重组酿酒酵母[D];江南大学;2005年
9 赵雪淞;一种番茄褐孢霉产生的高选择性转化人参皂甙Rb_1为Rd的β-葡萄糖苷酶[D];东北师范大学;2009年
10 贾汇红;疏绵状嗜热丝孢菌热稳定纤维素酶的分离纯化和基因克隆[D];山东农业大学;2007年
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1 赵仪;虾壳虾青素提取与纯化研究[D];福州大学;2006年
2 崔翠翠;甘草酸的提取、纯化及其活性的研究[D];天津科技大学;2009年
3 曹明华;发酵葡萄籽中原花青素的提取与分离研究[D];郑州大学;2008年
4 赵钟兴;解吸-内部沸腾两步法提取植物有效成分工艺及其工艺及其机理的研究[D];广西大学;2005年
5 吴玉敏;蜂胶中黄酮提取方法及工艺优化研究[D];四川农业大学;2007年
6 蔡玲;水蓼总黄酮、挥发油的分离分析研究[D];中南大学;2007年
7 柳华贵;Sphingomonas sp.ZUTE03产辅酶Q_(10)发酵提取新工艺研究[D];浙江工业大学;2008年
8 廖豪;厚朴中酚类化合物分离与提取工艺的研究[D];西南交通大学;2008年
9 孟宪金;微生物法制备富含游离型大豆异黄酮发酵豆乳的研究[D];东北农业大学;2008年
10 廖德芳;耐热β-葡萄糖苷酶细菌的筛选、基因的克隆与表达[D];江南大学;2010年
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