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《中国医科大学》 2010年
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小鼠H22肝癌细胞肺高转移株的建立及其生物学特性的测定和RhoC基因的表达

张璐  
【摘要】: 目的 建立小鼠H22肝癌细胞肺高转移细胞株并测定其相关生物学特性和RhoC基因的表达,为研究转移相关分子机制提供经济实用的模型。方法 将小鼠H22肝癌细胞(简称为M0)接种于小鼠腹腔形成腹水瘤,取腹水瘤细胞经尾静脉注射,待其肺转移结节形成后,取其肺转移结节处肝癌细胞再次腹腔接种、形成腹水瘤,再尾静脉注射,反复进行此操作后获得第四代肺高转移肝癌细胞(简称为M4)。检测M4在昆明小鼠体内转移能力、体外细胞增殖能力、计算细胞倍增时间、计数细胞分裂指数、Giemsa染色观察其染色体形态、用流式细胞仪检测细胞周期分布,并与M0比较。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定M4细胞RhoC基因mRNA的表达水平,并应用Imagequant软件进行比较分析。 结果 肺高转移H22细胞M4与M0相比较,尾静脉注射后在第30天和40天,M4肺转移结节总体积明显大于M0;M0与M4细胞体外培养24h、36h、48h、60h及72h,P值均小于0.05,范围从3×10-9至7.2×10-26,M4细胞浓度明显高于M0;M0细胞倍增时间为71.98h,而M4细胞倍增时间缩短为44.10h;M4细胞分裂指数大于M0(P=0.014);M4细胞周期G0/G1期比例较M0减少(P=0.024),S期比例增多(P=0.022);染色体数目无差异,但高转移H22细胞染色体存在明显异型性。高转移细胞RhoC基因mRNA的表达高于M0细胞,M0细胞RhoC基因与GAPDH基因表达比值为0.486±0.045,M4细胞RhoC基因与GAPDH基因表达比值为1.011±0.163,存在统计学差异(P=0.0029)。 结论 建立了小鼠H22肝癌细胞肺高转移细胞株M4,M4转移能力明显增高、体外细胞生长速度快、倍增时间短、分裂期细胞比例多、细胞周期G0/G1期比例较减少、S期比例增多、染色体异型性明显。高转移细胞的RhoC基因mRNA的表达明显增高;RhoC基因的过量表达与小鼠H22肝癌细胞的高转移能力相关。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R735.7

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