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《中国医科大学》 2019年
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肝癌细胞增殖、凋亡研究及SH2B1对Akt/mTOR通路的影响

周正  
【摘要】:目的:探讨阿帕替尼与5-Fu联合用于肝癌细胞系的增殖抑制作用;SH2B1是原癌基因RET的关键增强子,以前的研究表明,SH2B1有助于肿瘤的恶性进展,包括消化系统中,如胃癌,呼吸系统中,如非小细胞肺癌等。本研究致力于探索肝癌新的治疗方法,并探讨未来潜在治疗肝癌的新途径,为患者提供更多线并且可靠的治疗方法,为肝癌患者探索副作用小且有效的治疗方法。研究方法:1.肝细胞系的培养:正常肝细胞株QSG-7701,肝癌细胞株MHCC-97,肝癌细胞株HepG2;2.阿帕替尼及5-Fu单药及联合用于肝癌细胞株MHCC-97H,计算CCK8法检测处理48 h后的IC50及细胞增殖抑制率;3.使用CCK8法检测处理48 h后的细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率,CompuSyn软件计算两种药物的联合效应;4.重组慢病毒转染HepG2细胞获得稳定转染细胞株;5.qRT-PCR法检测SH2B1 mRNA相对表达量;6.Western blot法检测蛋白表达;7.使用流式细胞术检测细胞周期;8.CCK-8法检测细胞增殖能力;9.双染流式细胞术检测细胞凋亡能力;10.SPSS 17.0对数据进行分析。结果:1.阿帕替尼单药及联合5-Fu用药能够以剂量依赖的方式抑制MHCC-97细胞的增殖;2.Chou-Talalay中位效应法计算两种药物的联合效应显示两药存在轻微协同作用;3.与正常肝细胞相比,肝癌细胞中SH2B1 mRNA、SH2B1蛋白相对表达量显著升高(P0.05);4.HepG2细胞慢病毒转染后SH2B1表达变化,空白组与NC shRNA组SH2B1 mRNA、SH2B1蛋白表达差异无统计学差异(P0.05),与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组SH2B1 mRNA、SH2B1蛋白表达显著降低(P0.05);5.沉默SH2B1表达对HepG2细胞增殖的影响,CCK8试验显示,NC shRNA组与空白组相比,各时间点OD值差异无统计学意义(P0.05);与NC shRNA组和空白组相比,SH2B1 shRNA组转染48 h后OD值显著降低(P0.05);6.沉默SH2B1表达对HepG2细胞周期的影响;NC shRNA组与空白组相比,各时期细胞比例差异不显著(P0.05);与NC shRNA组和空白组相比,SH2B1 shRNA组G0/G1期细胞比例有所减少,S期变化不显著,G2/M期细胞比例显著增多(P0.05);7.沉默SH2B1表达对HepG2细胞凋亡的影响空白组与NC shRNA组细胞凋亡率差异无统计学意义(P0.05),与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组细胞凋亡率显著升高(P0.05);8.沉默SH2B1表达对HepG2细胞凋亡相关蛋白的影响空白组与NC shRNA组相比细胞中Bax、Bcl-2、Caspase 3蛋白水平差异无统计学意义(P0.05),与空白组、NCshRNA组相比,SH2B1 shRNA组细胞中Bax、Caspase 3蛋白水平显著上升(P0.05),Bcl-2蛋白含量下降(P0.05);9.沉默SH2B1表达对Akt/mTOR通路的影响,空白组与NCshRNA组相比p-Akt、AKT、mTOR蛋白表达差异无统计学意义(P0.05),与空白组和NCshRNA组相比,SH2B1 shRNA组p-AKT、mTOR蛋白水平明显降低(P0.05)。结论:1.阿帕替尼及5-Fu用于MHCC-97肝癌细胞系,单药及联合用药均呈浓度依赖性方式抑制MHCC-97肝癌细胞系的增殖。2.Chou-Talalay中位效应法计算两种药物的联合效应显示两药存在协同效应。3.SH2B1在肝癌细胞株HepG2中高表达,沉默SH2B1表达可能通过抑制Akt/mTOR信号传导活化,抑制增殖、促进凋亡。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R735.7

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