收藏本站
《中国医科大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

卡莫氟固脂纳米粒体外抗癌活性及其逆转人大肠癌细胞多药耐药作用

孟胜男  
【摘要】: 目的 目前应用的抗癌药物普通存在的问题是体内分布广,对肿瘤组织的选择性差,因此会由于药物对健康组织的较高毒性而导致药物较低的治疗指数。为了提高抗癌药的疗效和降低其毒副作用,研制具有缓释、控释、靶向性能的药物制剂,是医药领域中一个极富挑战性和具有实际应用价值的研究热点。随着研究水平的不断深入以及纳米技术对药学研究领域的不断渗透和影响,将纳米技术用于肿瘤的药物治疗,采用具有一定特异性靶向释药系统作为载体,将抗肿瘤药物或其他具有细胞毒性的药物选择性地运送到肿瘤靶组织。纳米技术的应用使药物克服了传统药物许多缺陷以及无法解决的问题,自身存在着许多优越性。纳米粒(Nanoparticles,NP)为固态胶体颗粒,大小在10-1000nm之间,药物可包埋或溶解在纳米粒的内部,也可吸附或偶合在其表面。纳米粒能从肿瘤的有隙漏的内皮组织血管中逸出而滞留在肿瘤内,肿瘤的血管壁对纳米粒有生物粘附性。纳米粒有选择地在肿瘤部位蓄积后,可改变药物在体内的组织分布和摄入,使药物具有一定的被动靶向性,从而提高了药物的疗效和生物利用度;同时纳米粒还可使药物在较长的时间内缓慢释放,使血液中的游离药物降低,减少给药次数,进而降低药物的毒副反应;近几年的研究表明纳米粒载体还能低毒、高效地逆转多药耐药。因此载药纳米粒可以增加药物吸收度、建立新的药物控释系统、改善药物的输送、降低药物的毒副反应及逆转多药耐药等,可为生产安全、合理、有效的理想药物提供强有力的技术保证。纳米粒作为新型的靶向治疗载体,正在抗肿瘤研究中发挥其巨大而独特的作用。 卡莫氟{Carmofur,1-(Hexylcarbamoyl)-5-Fluorouacil,HCFU}为第三代5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)衍生物,具有抗瘤谱广,脂溶性高,非肝脏代谢依赖性;与5-Fu和替加氟无交叉耐药性;骨髓抑制、胃肠不 适等副作用轻微等特点,基于纳米粒这一新型载体的优势和卡莫氟这一新 药的特点,本研究采用溶剂乳化法将卡莫氟制备成固脂纳米粒(Sold iPid nanoParticles,SLN厂比较并考察了载药纳米粒与游离卡莫氟的体外抗癌活 性以及卡莫氟固脂纳米粒(HCFU-SLN)对 CCL-187/HCFU细胞的逆转 作用,为生产安全、合理、有效的抗癌药物制剂和抗肿瘤靶向治疗的研究提 供新思路。 方 法 二.HCFU-SLN的制备及体外释药 1.IHCFU—SLN艺过程的优化 采用均匀设计法优化各种工艺条件,确定HCgu量A磷脂量、三硬脂 酸甘油酯浓度、Plurnic F68浓度、超声时间为考察因素,每个因素设定五个 水平,按方法要求进行实验。 l.2.HCFU-SLN的包封率、载药量及 Zeta电位的测定 取样品溶液适量,置透析袋内透析至电导率低于 50 p后,用电泳法测 定Zeta电位。 采用Senhadex G-50柱层析法分离、纯化纳米粒。应用反相高效液相 色谱法测定 HCFU药物浓度。色谱往:Spherisorb Wate。(ODS,250mm x 4. 6,5卜);流动相*.05M磷酸盐-甲醇(3o:7o);流速:1*血而n;检测 波长:265 urn;进样量为:20 gi。计算包封率和载药量。 1.3 HCFU-SLN体外释药 体外释药采用透析法进行。取适量样品于透析袋中,置于装有适量磷 酸盐缓冲液的量瓶中,恒温振荡,在不同的时间吸取释放液,用高效液相色 谱法对HCFU-SLN在体外试验中释出的HCFU的含量进行测定,计算累 积释药百分率。 工HCFU-SLN的体外抗癌活性 2.1细胞培养 CCL刁87、Hela细胞,以含10%新生牛血清的RPMI 1640培养液培养 (内含mo m/rnl青霉素,n用p牙血链霉素L置于37℃,5%CO。培养箱 内,2或3天更换培养液并传代,取对数生长期细胞进行实验。 .t. 2.2 HCFU—SLN及HCFU抗癌活性比较 采用 MTh比色法进行细胞毒实验。取一定浓度的单细胞悬液,分别接 种于不同96孔培养板,培养24 h后,进行实验。实验组为:不同浓度的游 离HC)’U处理组和相同浓度HCFU-SLN处理组,同时设立平行空白对照 组,于37℃孵育。分别在加药后不同时间进行Mh测定,计算细胞存活率。 3.HCF’U-SLN逆转CCL刁/HCFU细胞多药耐药的作用 采用间歇诱导耐药的方法,初步诱导耐药的CCL叫 细胞。 取对数生长期的 CCL-187和 CCL-187/HC刑细胞分别接种于 9 于 培养板中,实验组中分别加人不同浓度的HCFU-SLN和HCFU,并加设平 行空白对照组,同条件培养72 h后人Th法测定细胞对药物敏感性的变化, 计算细胞抑制率及耐药倍数。 RT-PCR检测细胞中mdr刁和MRP的mRNA的表达,引物为mdr- l:5”一 AAGCTfAGTACCAAAGAGGTCTG,3”一 GGCTAGAAACAATAGT GAAAACAA;MRP:5”一 TGACA…CCTCTI’CGATGAT,3”一 G’ITGTG GTGCCTGCTGATGT。 PCR反应条件:94℃二分钟,二个循环;94℃30秒,55℃30秒,72℃且分 30秒,35个循环;最后72t 5分钟延伸。扩增后的产物经PAGE电泳检 测。 结
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R735.34

手机知网App
【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 段菁华;姜黄素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒抗癌活性及逆转多药耐药研究[D];中南大学;2011年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 何勤,张志荣;万乃洛韦聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒制备工艺的优选[J];华西药学杂志;1998年01期
2 邓英杰,刘素琴,韩丽梅,缪硕宁,李经才,徐锋,苏德森,顾学裘;黄芪多糖脂质体的制备和稳定性研究[J];沈阳药科大学学报;1996年01期
3 张晓菁,刘明生,陈树人,姜志明,王晓瑜,尚坤;均匀设计在齐墩果酸磷酸酯单钠合成中的应用[J];沈阳药科大学学报;1996年04期
4 方开泰;均匀设计——数论方法在试验设计的应用[J];应用数学学报;1980年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈一村;蔡聪艺;冀宾;高分飞;张艳美;黄展勤;白雪婷;石刚刚;;东莨菪亭和橙皮素联用的镇痛效果定量分析[J];癌变·畸变·突变;2010年03期
2 刘利;刘春雷;顾地周;车喜全;赵玉敏;;节蓼不同提取液对白背飞虱的触杀和拒食作用[J];安徽农业科学;2008年31期
3 李玉梅;姜云天;孙智慧;;基于均匀设计优化牛皮杜鹃嫩叶直接再生芽苗及植株再生体系[J];安徽农业科学;2009年02期
4 冯颖;鞠月秋;顾地周;;应用均匀设计法优化两种野生药用及观赏杜鹃花的高效快繁体系[J];安徽农业科学;2009年28期
5 乔淑芬;李杰;顾地周;;基于均匀设计法评价东北雷公藤对油松毛虫的触杀活性[J];安徽农业科学;2009年28期
6 乔淑芬;刘春雷;顾地周;;基于均匀设计法评价龙牙草提取液对桃蚜的生物活性[J];安徽农业科学;2009年31期
7 张佳;金东淳;金海林;刘权钢;;均匀设计法优化北五味子愈伤组织诱导培养基研究[J];安徽农业科学;2011年12期
8 孙益民;袁顺香;李俊;孟祥珍;胡娟;晋顺和;;均匀设计法对ABS树脂表面金属化条件的选择[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2006年05期
9 凤良元,鄢顺琴,段瑞;肝纤康A抗小鼠肝纤维化作用的拆方研究[J];安徽中医学院学报;2005年02期
10 ;Reversing multidrug resistance by tyrosine kinase inhibitors[J];癌症;2012年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵士睿;李琴琴;方玉春;刘晨光;石冠超;;自组装海藻酸钠纳米球的制备及其作为鱼藤酮载体的研究[A];2009’环保农药新技术、新产品暨生物农药技术研讨会论文集[C];2009年
2 刘晨光;董学猛;金晓明;刘成圣;陈西广;;基于疏水化修饰水溶性多糖的纳米粒制备及应用研究进展[A];第六届中国功能材料及其应用学术会议论文集(5)[C];2007年
3 彭元诚;廖朝华;;悬索桥可换式预应力钢绞线锚固系统[A];湖北省公路学会二○○九年学术年会论文集[C];2010年
4 周敏;李世玲;张富堂;;基于均匀设计的不确定扰动系统的鲁棒建模方法[A];中国工程物理研究院第七届电子技术青年学术交流会论文集[C];2005年
5 田治平;高齐圣;;橡胶配方CAD系统的设计与实现[A];1996中国控制与决策学术年会论文集[C];1996年
6 何大阔;王福利;袁平;;基于均匀设计改进遗传算法的研究[A];2005中国控制与决策学术年会论文集(上)[C];2005年
7 高齐圣;隋树林;范汝良;孟宪德;纪奎江;;橡胶配方设计中的非线性建模研究[A];1996年中国控制会议论文集[C];1996年
8 孙先仿;范跃祖;宁文如;;系统辨识中输入信号的最优均匀设计[A];1997年中国控制会议论文集[C];1997年
9 马磊;王峰;莫雪梅;李秀英;孙晗笑;;vMIP-壳聚糖纳米粒的制备及评价[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
10 胡凯莉;李靖炜;沈烨虹;陆伟;高小玲;蒋新国;;乳铁蛋白结合聚乙二醇聚乳酸纳米粒脑内递药特性的体内外研究[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 戚晓红;聚天冬氨酸高分子纳米载体药物的制备、表征及性能研究[D];南京医科大学;2009年
2 谭枫;介入式文化算法及其应用研究[D];哈尔滨工程大学;2010年
3 张静;油酰壳聚糖纳米粒作为抗肿瘤药物载体的研究[D];中国海洋大学;2010年
4 韩瑞玲;鱼精蛋白包覆PLGA纳米粒用于疫苗载体的初步研究[D];华中科技大学;2010年
5 刘培峰;cRGD修饰的mPEG-PLGA-PLL靶向纳米药物递送系统对乳腺癌的治疗研究[D];东华大学;2010年
6 丁宝月;TRAIL-receptor2mAb介导的多功能靶向纳米载药系统的构建及其抗恶性黑素瘤作用研究[D];第二军医大学;2011年
7 屠焰;代乳品酸度及调控对哺乳期犊牛生长性能、血气指标和胃肠道发育的影响[D];中国农业科学院;2011年
8 段菁华;姜黄素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒抗癌活性及逆转多药耐药研究[D];中南大学;2011年
9 严蕙蕙;多模态(磁性/光学)纳米探针无创评估小鼠早期肝纤维化可行性研究[D];复旦大学;2011年
10 蒋东海;新型乳腺癌耐药细胞的建立、鉴定及耐药逆转[D];浙江大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张力;基于甘油、羟基乙酸及乳酸的树枝状聚酯体系的合成和表征[D];湘潭大学;2010年
2 杨培;黄褐毛忍冬总皂苷脂质体的制备工艺及质量研究[D];贵阳中医学院;2010年
3 孟国良;痛泻要方半仿生提取法的研究[D];山东中医药大学;2010年
4 姜子敬;组蛋白去乙酰化酶Ⅰ族对肿瘤细胞多药耐药性作用的研究[D];华东理工大学;2011年
5 孙怡;脑靶向环糊精衍生物纳米载体的制备及体内外功效评价[D];华东理工大学;2011年
6 王嫣虹;大黄素对结肠Cajal间质细胞毒—效相关性的研究[D];成都中医药大学;2010年
7 李健;不确定理论在机械产品设计中的应用研究[D];西华大学;2011年
8 岳苗苗;肝癌特异性靶向药物A54-GFLG-DOX的制备及生物学活性鉴定[D];华东师范大学;2011年
9 曹玉璋;基于Box-Cox变换的Gamma模型[D];华中师范大学;2011年
10 李芳;半夏泻心汤合四逆散半仿生提取物治疗慢性浅表性胃炎实验研究[D];兰州大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李一诗;傅仲学;;姜黄素逆转肿瘤多药耐药的研究进展[J];重庆医学;2010年16期
2 张胜,胡蕴玉,吴道澄;骨形态发生蛋白纳米型缓释制剂的制备及性质[J];第四军医大学学报;2002年18期
3 杨西晓,陈建海,郭丹;聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的生物相容性研究[J];第一军医大学学报;2005年10期
4 黄小龙,张黎明;壳聚糖基载药纳米微粒制备研究进展[J];功能高分子学报;2003年04期
5 马强,张振书;中药逆转肿瘤多药耐药研究进展[J];湖南中医学院学报;2002年04期
6 梁广;田吉来;邵丽丽;杨树林;李校堃;;姜黄素的构效关系及以其为先导物的抗肿瘤化合物研究进展[J];化学通报;2008年02期
7 张炎,鲁功成;阿霉素纳米粒逆转P-gp介导的膀胱移行细胞癌多药耐药的实验研究[J];临床泌尿外科杂志;2003年03期
8 朱青,张王刚,刘苏虎,赵万鸿,曹星梅;姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究[J];陕西医学杂志;2005年10期
9 黄秀君,李顺强,郑振源,仪明光;~3H-α-氰基丙烯酸正丁酯在大鼠体内的吸收、分布和排泄的实验研究[J];生殖与避孕;1988年02期
10 王华芳,胡豫,郑金娥,周薇,方峻;阿霉素纳米粒对白血病耐药细胞株K562/DOX耐药逆转作用的研究[J];华中科技大学学报(医学版);2004年03期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 王夏红;苯妥英钠聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微粒的制备及抗癫痫的药效学研究[D];中南大学;2007年
2 张华;索拉非尼联合三氧化二砷对肝癌细胞株和肝癌裸鼠移植瘤模型作用的研究[D];南方医科大学;2008年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 马佺;颜红;彭买姣;唐欣;伍微微;范鹏程;;中药靶向制剂研究进展[J];湖南中医药大学学报;2012年12期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 华罗庚 ,王元;论一致分布与近似分析——数论方法(Ⅰ)[J];中国科学;1973年04期
2 吴梧桐,余品华,夏尔宁,施卫星,徐碧如,陈琼华;银耳孢子多糖TF-A、TF-B、TF-C的分离、纯化及组成单糖的鉴定[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;1984年04期
3 王鹏,王玉珠,沈建民;均匀设计及其在药学中的应用[J];沈阳药学院学报;1989年04期
4 庞贻慧,鲁纯素;药物稳定性预测方法的简化——初均速法[J];药学学报;1982年03期
5 郭英喜,何平,涂莉,王德方;硫酸链霉素注射液变色规律的探讨和贮存期预测[J];药学学报;1988年07期
6 张志荣,廖工铁,侯世祥;米托蒽醌聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒的研究[J];药学学报;1994年07期
7 潘维新,杨敬荣,于燕玲,王丽华,董善士;云芝多糖含量的比色测定——酚-硫酸法[J];南京药学院学报;1980年02期
8 张志荣,廖工铁,钱文 ;均匀设计法优选米托蒽醌毫微球的制备工艺[J];中国医院药学杂志;1994年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孟胜男;王欣;王怀良;;卡莫氟固脂纳米粒对人大肠癌细胞多药耐药的逆转的机制研究[J];药物生物技术;2008年02期
2 金杏泉,赵体平;卡莫氟Ⅲ期临床试验总结报告[J];中国肿瘤临床;2002年07期
3 苏曼,魏蒲仁,李树强,杜召新,孙华睿;卡莫氟治疗大肠癌的研究进展[J];中国肿瘤;1999年07期
4 董路芳;卡莫氟单用和联合化疗治疗21例晚期胃癌疗效分析[J];临床医学;1995年05期
5 朱振胜,葛军,张丽,王达,陈树泉,于甬华;放疗联合卡莫氟治疗中晚期鼻咽癌的临床研究[J];中国肿瘤临床与康复;2005年03期
6 孟莉 ,郭勇勤;口服卡莫氟治疗结直肠癌的最佳用法:5年随访回顾[J];国外医学.肿瘤学分册;2001年05期
7 李静,谭会洁;卡莫氟含量测定方法的研究[J];中国药事;2001年04期
8 郑荣生,张家驹,秦凤展;卡莫氟联合化疗治疗晚期乳腺癌Ⅱ期临床观察[J];蚌埠医学院学报;1995年06期
9 姜浩,聂跃华;放疗联合卡莫氟治疗颈、上胸段食管癌疗效观察[J];中国肿瘤;2005年06期
10 夏斌,顾汉刚;卡莫氟治疗中晚期恶性肿瘤疗效观察[J];镇江医学院学报;1995年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 宋相容;侯世祥;;长春新碱-槲皮素PLGA复方纳米粒抗多药耐药肿瘤实验研究(英文)[A];2009全国中药创新与研究论坛学术论文集[C];2009年
2 王磊;张桂梅;冯作化;;阿霉素纳米粒、姜黄素和survivin真核反义表达质粒对人白血病多药耐药细胞株HL-60/ADR多药耐药性的逆转作用[A];湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第七届第十四次学术年会论文摘要集[C];2003年
3 周函;徐琳;朱光洁;董磊;张俊峰;高下;;聚乙酰亚胺纳米粒转染离体培养C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜的实验研究[A];2010全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2010年
4 张源潮;杨清锐;梅焕平;潘正论;遇晓;陈立辉;张春玲;;卡莫氟治疗强直性脊柱炎的研究[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
5 马淑燕;欧阳五庆;刘玉梅;;硫酸长春碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的毒性研究[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
6 刘晓秋;韩英;赵阿津;;脉冲磁场对白血病细胞HL60/ADR多药耐药逆转作用及分子机制研究[A];第九届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2009年
7 费新红;许小平;陈莉;高磊;;小鼠多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性观察[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
8 邓联东;蔺晓娜;邢金峰;董岸杰;;聚乙二醇/聚氰基丙烯酸酯嵌段共聚物载药纳米粒的研究[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年
9 李树珍;欧阳五庆;;藤黄酸-聚乳酸纳米粒的研制及对肝癌细胞HepG2的体外抑制作用[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
10 朱健铭;姜如金;吴康乐;王建敏;;多药耐药鲍氏不动杆菌菌株亲缘性分析[A];2009年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 衣晓峰 李晓丽;肠癌多药耐药判断有新说[N];健康报;2003年
2 本报记者 刘云涛;DDS研发 唱响制剂时代主旋律[N];中国医药报;2007年
3 傅德明;红霉素逆转乳腺癌多药耐药[N];中国医药报;2001年
4 记者 李天舒;纳米颗粒可对抗多药耐药菌[N];健康报;2010年
5 解放军总医院病理科 纪小龙;纳米技术在开拓新药中应用前景[N];中国高新技术产业导报;2001年
6 马武开 钟琴 刘正奇;中医药逆转类风湿多药耐药思路[N];中国医药报;2009年
7 记者 衣晓峰 靳万庆 通讯员 李晓丽;大肠癌多药耐药判断标准有新“尺度”[N];中国中医药报;2003年
8 论坛;中药逆转肿瘤多药耐药有新发现[N];北京科技报;2002年
9 陈汉桥;中药逆转肿瘤多药耐药有新发现[N];中国医药报;2002年
10 ;磁性阿霉素白蛋白纳米粒在移植性肝癌模型中的磁靶向性[N];中国医药报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孟胜男;卡莫氟固脂纳米粒体外抗癌活性及其逆转人大肠癌细胞多药耐药作用[D];中国医科大学;2003年
2 陈莉;白血病细胞多药耐药基因表达谱变化及其逆转策略的研究[D];第二军医大学;2002年
3 周晓冬;腺样囊性癌多药耐药机制的实验研究[D];天津医科大学;2005年
4 田彦璋;葡萄糖神经酰胺合成酶参与肝癌细胞多药耐药的实验研究[D];山西医科大学;2011年
5 王天晓;逆转肿瘤MDR的新药开发研究[D];吉林大学;2005年
6 王吉刚;TRAIL逆转白血病骨髓基质细胞粘附介导Jurkat细胞耐药的研究[D];第三军医大学;2005年
7 石琳熙;酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞耐药性的逆转作用及其机制研究[D];天津医科大学;2008年
8 赵燕秋;肿瘤耐药的分子机制研究[D];第四军医大学;2002年
9 郭杨;肺癌多药耐药的分子机制研究[D];河北医科大学;2004年
10 赵园园;三氧化二砷对人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM的耐药逆转作用及机制研究[D];中国医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李斌生;载绿色荧光蛋白基因壳聚糖纳米粒载体的制备和转染的研究[D];中南大学;2004年
2 佟媛;载银杏内酯A纳米粒的制备与理化性质研究[D];安徽大学;2010年
3 郭妍;纳米生物技术治疗肝癌:p53-白蛋白纳米粒的制备和转染的研究[D];中南大学;2004年
4 王娜;治疗高尿酸血症UOX脂质纳米粒的初步研究[D];重庆医科大学;2010年
5 张庆莲;米托蒽醌聚乳酸纳米粒的制备和细胞摄取研究[D];成都中医药大学;2011年
6 尚东浩;蛋白激酶C(PKC)与肾细胞癌多药耐药相关性的研究[D];中国医科大学;2003年
7 吉顺莉;紫杉醇PLGA口服纳米粒的制备及生物利用度的研究[D];江苏大学;2010年
8 王同力;Tf-BCNU-PLGA纳米粒制备及其对鼠C6胶质瘤细胞作用的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
9 蒋妮;三种齐墩果酸纳米粒的制备及质量评价[D];大连医科大学;2010年
10 姚学清;人大肠癌多药耐药细胞株LOVO/5-FU的建立及其生物学特性的研究[D];第一军医大学;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026