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《中国医科大学》 2003年
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氟对大鼠肝脏功能和形态的影响及与氧化应激关系的实验研究

郭晓英  
【摘要】: 氟及其化合物在自然界中分布极为广泛,且广泛地应用于化学、医学、农业等领域中。氟是机体生命活动所必需的微量元素之一,具有多方面的生理作用。但如果机体长期摄入过量的氟,则可导致氟在体内蓄积,引起氟中毒,即以氟斑牙和氟骨症为主要特征的慢性全身性疾病。地方性氟中毒是严重危害我国人民身体健康的地方病,在我国分布面积广,受威胁人口多。其作用机制至今尚不十分清楚。目前,全国地氟病病情仍然比较严重,防治任务繁重,因此深入研究氟对机体的毒性作用是摆在我们面前的一项迫切任务。 肝脏是机体新陈代谢和解毒功能得以完成的重要器官,过量的氟进入体内必然对肝脏产生毒性作用。人群流行病学调查和动物实验均表明氟中毒可引起肝脏组织结构和功能异常。本研究以自由基理论为基础,从体内实验和体外实验两个方面探讨氧化应激在氟化物所致的肝损伤中的可能作用。 目的 1.探讨氧化应激在亚慢性氟中毒大鼠肝脏损伤中的作用。分析氟中毒大鼠肝功能生化指标、过氧化指标及肝结构损害指标的改变及其相关关系,并说明氧化损伤在氟性肝损伤中的可能作用。 2.以原代培养的大鼠肝细胞为研究对象,用各种浓度的氟化钠(NaF)处理肝细胞,从形态学、酶学和生物化学角度观察氟化钠对肝细胞的毒性作用及其可能机制。 方法 1.体内实验 将Wistar大鼠随机分为4组,用含氟化钠(NaF)0mg/L、50mg/L、100mg/L、150mg/L的蒸馏水喂饲大鼠3个月后,分别检测血氟、尿氟含量,肝 脏中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及抗氧化酶超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胧甘肤过氧化物酶(GSH一入)活性和抗氧化物质谷胧甘肤(GsH) 含量的变化,同时检测血清中谷丙转氨酶(SGPT)、谷草转氨酶(SGoT)的活 性,并观察肝脏形态学及超微结构的改变。 2.体外实验 以原代培养的大鼠肝细胞为研究对象,用各种浓度的氟化钠(NaF)处 理肝细胞24小时,MTr比色法测定氟化钠对肝细胞的细胞毒性作用。在 倒置显微镜下直接观察细胞的形态学改变并在电镜下观察细胞超微结构的 变化。收集细胞培养上清液,测定ALT和AST活性和MDA含量。用上述 指标来评价氟化钠对肝细胞的毒性作用及其可能机制。 结果 (一)体内实验 1.三个月后,实验组大鼠尿氟、血氟含量显著高于对照组(p0.01), 实验组所有大鼠均有不同程度的氟斑牙形成,表明已成功地复制出了亚慢 性氟中毒大鼠模型。 2.实验组大鼠SGPT、SGOT活性随饮水氟含量增加逐渐升高,具有剂 量一效应关系(r二0.569,p二0.001;r二0.624,p0.01),15om扩L染氟组 SG钾活性显著高于对照组(p0.01),loom岁L组、150m扩L染氟组 SGOT活性显著高于对照组(p0.01)。 3.实验组大鼠肝脏MDA含量随染氟剂量增加而逐渐升高,150m岁L 组大鼠肝脏MDA含量显著高于对照组(p0.01),MDA与染氟剂量、血氟 之间存在显著的正相关关系(r二0.567,p0.01;r二0.559,p0·01)。 SOD、GsH一入活性随染毒剂量增加逐渐降低,与血氟之间存在显著的负相 关关系(r二一0.563,p0·01;r=一0.419,p0.05)。10om扩L、15om酬L 组大鼠肝脏SOD活性显著低于正常对照组(p0.05);实验组大鼠肝脏 GSH含量显著低于正常对照组,GSH与染氟剂量、血氟之间存在显著的负 相关关系(r二一0.848,v0.01;r==一0.799,p0·01)。 4.MDA与SGPT二者之间存在显著的正相关关系(r二0.460,p= 0 .007)。 5.光镜下对照组大鼠肝小叶结构完整,肝细胞与肝血窦沿中央静脉呈 放射状排列,细胞形态规则。实验组大鼠肝细胞索排列紊乱,肝小叶中央静 脉和肝窦扩张、充血,有假小叶形成,小叶周边性脂肪变性,肝内可见散在的 点状坏死灶,肝汇管区静脉淤血,间质结缔组织增生。透射电镜检查可见对 照组大鼠肝细胞界限清晰,细胞核圆且居中,核仁明显。细胞质内可见丰富 的粗面内质网、线粒体和糖原颗粒,少见脂滴。肝细胞界面处可见毛细胆 管,毛细胆管腔内有微绒毛。染氟组大鼠肝细胞细胞界限不清,细胞内染色 质浓缩、边集,呈半月形聚集于核膜下;线粒体可见明显肿胀,蜡断裂或消 失;内质网扩张;可见较多的白色脂滴;毛细胆管扩张,腔面微绒毛减少。 (二)体外实验 1.采用半原位酶分离方法获得的大鼠新鲜游离肝细胞呈圆形,透亮, 有立体感。培养Zh后开始贴壁,24h后肝细胞由圆形转变为多角形,胞体 变平变薄,体积明显增大,细胞间出现岛状连接,许多肝细胞呈双核。透射 电镜显示细胞胞浆内存在多种丰富的细胞器,其中线粒体丰富,内质网、核 蛋白体发达。滑面内质网附近常见糖原颗粒。细胞核圆形,位于细胞中央, 有1一2个核仁。肝细胞膜上有大量微绒毛,细胞间有特征性的紧密连接。 以上结果证明所分离的细胞为大鼠肝实质细胞。 2.采用MTT比色试验评价氟化钠对原代培养大鼠肝细胞存活率的影 响。在1.5一5~oFL浓度范围内,氟化钠染毒24h后可使原代培养大鼠 肝细胞的细胞存活率显著下降,并呈剂量一效应关系。Ic50为3 .58~FL。 3.倒置显微镜下观察发现未经NaF处理的原?
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R114

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【引证文献】
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4 刘洪玲;康寿灵对东莨菪碱模型大鼠的作用及影响记忆功能机制研究[D];青岛大学;2005年
5 董丽;暴露于二噁英、五氯酚(钠)的男工氧化应激指标、维生素A和生殖激素水平的改变及二噁英对表皮细胞增殖的影响[D];天津医科大学;2005年
6 殷霞;那格列奈和瑞格列奈对2型糖尿病患者血清丙二醛、超氧化物歧化酶影响的比较研究[D];四川大学;2004年
7 李晶;高血糖、高胰岛素对内皮细胞凋亡及Mn-SOD表达影响的研究[D];天津医科大学;2006年
8 陈雯;骨胳肌缺血再灌注的心肌损伤机理及其保护[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
9 张全喜;沙尘暴细颗粒物的DNA损伤及氧化应激作用[D];山西大学;2006年
10 李彤;不同剂量氟对体外培养成骨细胞增殖活性与氧化应激水平的影响[D];吉林大学;2007年
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