收藏本站
《中国医科大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效及基因变异的研究

马英  
【摘要】: 前言 乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个严重的公共卫生问题,全球范围内大约有3.5亿人慢性携带乙肝病毒。感染HBV后,其中部分病人发展为慢性乙型肝炎(CHB),部分病人最终发展为肝硬化甚至肝癌,因此通过抑制HBV复制来控制CHB炎症持续活动的治疗非常重要。目前除干扰素之外,拉米夫定是另一类可有效抑制HBV复制的抗病毒药物,拉米夫定通过与HBV DNA聚合酶(P)基因结构域YMDD(酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸)结合来抑制病毒复制。但长期应用拉米夫定会诱发HBV DNA P基因变异,出现药物抵抗,从而限制了药效。因此拉米夫定长期应用效果、引起的HBV DNA P基因变异特点、此变异与基因型的关系、以及出现变异后的对策成为目前研究的热点。本文对拉米夫定1年的治疗效果、P基因变异特点、此变异与基因型的关系以及其他影响变异的因素加以研究。 实验材料与方法 一、实验材料: 1.受试对象及血清标本采集: 试验组:33例慢性乙型肝炎患者,每日口服拉米夫定100mg,疗程1年,分别在用药前、用药后6个月、用药后12个月时抽取血清放于-70℃冻存待检。 对照组:20例慢性HBV携带者,入选后抽取血清放于-70℃冻存待检。 2.实验试剂及设备: 门)弓 物设计:用 DNA STAR软件,依据 HBV DNA (AF100309)P基因设计了3条引物,分别命名为HBV381。 HBV840、HBV801,序歹u分另u为 5*TGCGGCGTITfATCATC’ITCCT- 3’、5\GT7’T’xAATGTATACCCAAAGAC-3\5二CAGCGGCATAAAGG- GACTCAAG-3’,配成两对半巢式PCR弓物:HBV381/HBV840。 HBV381/HBV801。用于测序的引物为 HBV381。 门川NA纯化试剂盒和测序反应试剂盒。 (3)PCR扩增仪(ABI Gene Amp PCR System 2400)。 (4)PCR扩增仪(AB Gen,Amp PCR System 9600)。 (5)自动序歹测序仪(AB1377)。 二、实验方法: 1.处理血清,提取HBV DNA。 2.半巢式PCR: 门)第一次扩增:反应体系50ul,产物453hP,反应过程为: 94 CC 45秒、50℃30秒J72℃l分钟30秒,共30个循环。 *)第二次扩增:反应体系50al,产物415hp,反应过程为: 94℃45秒、55℃30秒、72℃卫分钟,共30个循环。 门)用 DNA Markers验证半巢式PCR产物。 3.PCR产物纯化规序反应、沉淀及自动测序。 4.数据处理: 厂X总结拉米夫定的疗效J基因变异出现的时间,用SAS软 件分析影响疗效和变异的因素。 (二)用 DNA STAR软件的 CLUSTAL V方法对HBV DNA P基 因片段的种系发生、核着酸和氨基酸差异、变异类型进行分析。 门)用DNACICb由 软件分析出现P基因变异前后所编 码的蛋白质的二级结构的差异。 ·二· 实验结果 1.拉米夫定治疗效果:按照ALT正常值最高上限(ULN人把 试验组分成4组:35 X ULN、2-5 X ULN、IZ X ULN、$IULN。如表 二所示,各组间促进ALT正常化没有明显差异。在治疗后12个 月,nhxg转阴率随着治疗前xu水平的升高呈直线上升,比率 为72.41%(21/29);但是HI3eAg血清转换(HBeAg(刁、HBeAb (十厂率却随着治疗前 ALT水平的升高呈直线下降,比率为 13. 79%K/29人未发现 HBSAg血.清转换及转阴。在治疗后 6个月血 清标本中未发现YMDD变异,在治疗后12个月血清标本中发现二 例YMDD变异。 2.基因分型:对照组和试验组经半巢式PCR扩增后,对照组 20个标本检出门个阳性,试验组用药前33个标本都为阳性,治 疗后 6个月* 2个月分别有 22个标本阳性。如图 2、表 3所示:试 验组治疗前和对照组检出 BJ:、D三个基因型,分别占22%j0%。 28%(P=0.000人未发现基因型 A、E*、G土。基因型 D的分布 与基因型B相当,其中在慢性HBV携带者中基因型D的分布仅 次于基因型C,并且高于CHB患者中基因型D的分布。 3.YMDD变异:在对照组中发现了1例n28M变异;在拉米 夫定治疗后6个月中未发现YMDD及n28M变异;在拉米夫定治 疗后12个月发现了2例YVDD变异,这2例YVDD变异都伴有 n28M变异,还发现了2例只有is28M的变异。 4.基因型对拉米夫定治疗的影响:如表4所示:基因型B在 ALT正常化和HBeAg血清转换中的比率最高;基因型C在HBeAg 转阴率和HBV DNA转阴率中的比率最高,但2例YVDD变异都 发生在基因型 C中;基因型 D在 ALT正常化、HBeAg转阴率。 HBeAg血清转换率JBV DN.人转阴率都占一定的优势。 ·3· 5.预测 YMDD变异株与 HBV野生株编码的蛋白质二级结 构:如图4所示:在截取的氨基酸序列中YMDD对应的是70- 73AA,n28M对应的是 47AA;在用药前未发生变异时 47AA和 70J3AA蛋白质的二级结构都为转角,在发生变异后,70-73AA的 转角结构变为折叠,47AA的转角结构没变。 讨 论 在本研究中,HBeAg血清转换率只有13.79%,与Lai对亚洲 患者拉米夫
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R512.62

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谷强业,陈合民;拉米夫定加肝络欣治疗慢性乙型肝炎疗效及对YMDD变异的影响[J];临床肝胆病杂志;2005年02期
2 龙宝光;拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的进展[J];现代诊断与治疗;2000年04期
3 刘新钰,孙梅,张汉荣;慢性乙型肝炎拉米夫定治疗中YMDD变异的预后[J];江苏医药;2004年12期
4 马明,刘新钰,张汉荣,李定坤,孙薇薇;YMDD变异后停用拉米夫定导致病情加重的临床过程与时间的关系[J];现代医药卫生;2004年19期
5 宓余强;拉米夫定治疗乙型肝炎研究进展[J];天津药学;2002年04期
6 张继明;乙型肝炎病毒YMDD变异与乙型肝炎的治疗[J];世界临床药物;2004年07期
7 左维泽,张跃新,田群,刘佩芝,买力坎木,姚寿敏,詹爱琴;基因芯片检测拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者YMDD变异的初步研究[J];临床荟萃;2004年23期
8 马明,刘新钰,张汉荣,李定坤,孙薇薇,殷国庆;YMDD变异后继续使用及停用拉米夫定的临床转归分析[J];中华传染病杂志;2005年02期
9 蔡皓东,马秀云;拉米夫定相关性HBV变异及防治[J];药物不良反应杂志;2002年03期
10 秦成勇,孟宪国;拉米夫定与YMDD变异[J];山东医药;2003年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吕铁锋;王飞;;拉米夫定联合α干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效观察[A];2004年浙江省传染病、肝病学术会议论文汇编[C];2004年
2 张德忠;;拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒C基因的nt2020和nt2167的检测和分析[A];2004年浙江省传染病、肝病学术会议论文汇编[C];2004年
3 徐春军;林凌云;刘敏;;拉米夫定联合益气凉血解霉中药治疗慢性乙型肝炎[A];中国中西医结合学会第十五次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2003年
4 徐春军;刘燕玲;李秀惠;戚团结;刘敏;林凌云;;益气凉血解毒类中药对拉米夫定诱发乙肝病毒YMDD变异的干预作用研究[A];中华中医药学会第十三届内科肝胆病学术会议论文汇编[C];2008年
5 周飞;王灵台;陈建杰;张斌;赵钢;高月求;;联合应用拉米夫定和补肾方治疗慢性乙型肝炎的疗效及对YMDD变异的影响[A];第十二次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2003年
6 黄志荣;;三组拉米夫定序贯干扰素α1b治疗慢性乙型肝炎的疗效分析[A];2004年浙江省传染病、肝病学术会议论文汇编[C];2004年
7 徐朝峰;张友定;张凌燕;田义州;;拉米夫定联合左旋咪唑涂布剂治疗慢性乙型肝炎的临床研究[A];中国中西医结合学会第十六次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2004年
8 罗勇生;;拉米夫定单独和联合苦参素治疗慢性乙型肝炎60例[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年
9 袁春蓓;;拉米夫定联合复方甘草甜素治疗病毒性肝炎疗效观察[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
10 王虹;王省良;彭华国;周东耀;万成松;;拉米夫定耐药的临床和实验研究[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 杨旭;拉米夫定药物引起的副作用?[N];大众卫生报;2003年
2 嵇旭东 杨丽佳;乙肝病毒变异后仍应使用拉米夫定[N];健康报;2006年
3 陶春祥;拉米夫定引起锥体外系症状[N];中国医药报;2003年
4 李亮;“救命药”拉米夫定[N];法制日报;2008年
5 韩咏霞;拉米夫定亦可治疗小儿肝炎[N];中国医药报;2002年
6 李文侠 池艳君;对慢性乙肝治疗问几个为什么[N];健康报;2005年
7 本报记者 胡永忠 王勇;贺普丁的中国遭遇[N];医药经济报;2004年
8 周运珠;乙肝用药常见四误区[N];健康时报;2006年
9 张天华;拉米夫定可引起锥体外系反应[N];大众卫生报;2004年
10 辽宁主任医师 王振坤;抗乙肝病毒用干扰素还是用拉米夫定[N];家庭医生报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙剑;拉米夫定耐药患者的临床特点及耐药毒株的分子病毒学研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
2 张传涛;HH胶囊体内外抗乙肝病毒作用及其部分作用机制研究[D];成都中医药大学;2010年
3 张瑞祺;乙型肝炎病毒基因分析及其与抗病毒疗效关系的研究[D];第二军医大学;2002年
4 马卫国;拉米夫定联合中药治疗慢性乙型肝炎临床研究[D];北京中医药大学;2007年
5 焦作义;单用拉米夫定或联用乙肝免疫球蛋白预防肝移植术后乙肝病毒再感染的临床研究[D];四川大学;2007年
6 赵攀;核苷(酸)类似物抗HBV感染的临床研究以及病毒耐药突变对其免疫原性的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2012年
7 王永刚;原位肝移植(OLT)前后HBV多聚酶(P)区准种演变与其克隆型序列分析的研究[D];第三军医大学;2004年
8 高纪东;中国北方肝细胞癌与乙肝病毒感染的紧密关联及拉米夫定对HBV X基因表达的影响[D];中国协和医科大学;2002年
9 霍红;HBV YMDD自然变异的影响因素及其对核苷类药物抗病毒疗效的影响[D];第二军医大学;2006年
10 邢茂迎;乙肝病毒突变定量检测方法的建立和临床应用研究[D];第二军医大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张岩;拉米夫定治疗期间患者体内HBV DNA聚合酶基因变异的研究[D];第四军医大学;2002年
2 马英;拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效及基因变异的研究[D];中国医科大学;2003年
3 杨丹红;拉米夫定抗HBV治疗中聚合酶YMDD变异的PCR-限制性片段长度多态性分析[D];浙江大学;2001年
4 李春明;HBV YMDD拉米夫定耐药变异的检测及临床治疗相关因素的分析[D];新疆医科大学;2003年
5 国泽延;拉米夫定治疗HBV相关性肝硬化失代偿期的疗效分析[D];第一军医大学;2002年
6 王晶波;拉米夫定联合干扰素治疗慢性HBV感染的临床研究[D];山东大学;2005年
7 杨春;拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的临床观察及病理学研究[D];重庆医科大学;2002年
8 祝美琴;拉米夫定阻断乙肝病毒母婴传播的疗效性及安全性的系统评价[D];广西医科大学;2010年
9 甄秀梅;阿德福韦酯联合拉米夫定治疗拉米夫定耐药慢乙肝随机对照试验的Meta分析[D];广西医科大学;2010年
10 刘振中;慢性乙型肝炎患者服用拉米夫定前后外周血T淋巴细胞亚群、CD4~+CD25~+调节性T细胞及细胞因子的变化[D];河北医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026