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《中国医科大学》 2003年
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抗P-选择素单克隆抗体对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的作用实验研究

李铁民  
【摘要】: 目的 胰腺移植是目前治疗糖尿病的根本性措施之一。移植前,供胰需要切取和保存,因而缺血再灌注过程在所难免。防止缺血再灌注损伤是移植胰腺成活的关键步骤,也是目前研究的热点。缺血再灌注损伤的机制虽然尚未完全阐明,但是其和炎性因子的表达密切相关。P-选择素的激活就是启动诸多炎性因子的重要环节。目前的实验多侧重于阻止某一方面的炎性介质,效果有限。本实验采用Ps单克隆抗体阻止Ps的作用,阻断炎症的起始环节,抑制炎性因子的瀑布反应,从根本上阻止了胰腺的缺血再灌注损伤。缺血再灌注损伤得到有效的抑制,也就意味着移植胰腺术后并发症的减少,对移植胰腺的存活和功能有重要的意义。 实验材料与方法 一、实验材料 1.实验动物: 雄性Wistar大鼠,200±20g,由中国医科大学动物中心提供。 2.仪器和药品 显微外科器械 普通冰箱 超薄切片机 OLYMPUS双目显微镜及图像分析仪 Ps单克隆抗体,购于苏州医学院 Ps、ICAM-1、TNFα单抗及试剂盒,购于博士德生物公司 二、实验方法 1.标本采集: 本实验采用胰腺缺血再灌注模型,将所用大鼠随机分成假手 术组、缺血融注组及Ps单克隆抗体处理组,每组15只,每组又 根据三个时段各分5只。开腹后,找到脾下动脉。假手术组不做 处理;鸡注组夹闭30分钟后再灌,分别于15*0、60分钟后取 材;实验组在再灌前5分钟经阴茎背静脉注抗PS单克隆抗体。三 组取材后用PBS配制的10%甲醛液固定。 2.观察指标:将所取标本制成蜡块,切片。 2.IHE染色:将各组各时段组织染色并观察组织结构。二 甲苯互、11J,脱蜡;梯度酒精人水;苏木素染色,冲洗后人 75% 的盐酸酒精分色;返蓝后,伊红染色;梯度酒精脱水,二甲苯透明, 中性树脂封片。 2.2 免疫组化:显示k、ICAM-L TNTNFa的表达情况,并将 所染玻片放在显微图像分析仪上收集数据。 三、数据处理 采用SPSS 10.0软件进行数据处理,对假手术组、干预组和缺 血组的不同时间点积分光密度值进行方差分析。 实验结果 一、组织形态: 假手术组和实验组各时段胰腺结构损伤均不明显,再灌注组 胰腺组织变化较明显且随再灌注时间的延长而加重。再灌注15 分钟组织肿胀界限不清,胞浆内可见粉染颗粒,血管扩张、淤血;再 灌注30分钟组织有灶状坏死,核溶解;再灌注60分钟可见组织大 片坏死。 二、免疫组化: 观察Ps、ICAMJ、TNFa三个指标。统计分析结果为假手术 ·2· 组与实验组组间和组内差异均无统计学意义河>O.05人而缺血 够注组与假手术组和实验组均存在组间差异计<o.05L且组 内亦有显著差异河<o.05人 结 论 1.P巳ICAM一及’TNFcr随时间延长而表达增加。 2.PS可能是缺血再灌注损伤的起始因素。 3.抗一PS单克隆抗体对缺血再灌注损伤的胰腺有保护作用。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R657.51

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