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《中国医科大学》 2002年
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PPD对HIV复制的作用及其与细胞因子的关系

张蕴秀  
【摘要】: 前言 艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的免疫缺陷综合征,是目前对人类威胁最大的传染病之一。因HIV侵袭免疫系统,AIDS病人最终多因机会性感染而死亡。结核是HIV感染者和AIDS病人最常见的机会性感染,全球约有1/3的艾滋病病人死于结核。 结核菌素的纯蛋白衍化物(PPD)诱导细胞因子TNF-α和IL-10分泌的作用与结核分支杆菌相似,但水平稍低。Delia Golett和C.J.C.Dehaas的研究发现,PPD和结核分支杆菌能诱导结核菌素试验阳性(PPD(+))者外周血单个核细胞(PBMC)内HIV的复制。体外实验证实,TNF-α能促进单核巨噬细胞和T细胞系内HIV的复制,IL-10能抑制单核巨噬细胞和PBMC内HIV的复制。由于中国人免疫状况与外国人不完全一样,因此有必要研究中国人群中结核对HIV复制的影响;此外,PPD对HIV感染的PBMC分泌细胞因子的作用及其对淋巴细胞内HIV复制的促进作用与细胞因子的关系还不清楚,国外有关研究甚少,国内未见报道。 本研究拟通过体外实验将PPD分别与正常的和HIV-1感染的PBMC共培养来探讨PPD对国人PBMC中HIV-1复制的作用,同时检测PPD(+)者的HIV-1感染和未感染的PBMC分泌TNF-α和IL-10的情况,分析PPD对正常PBMC和HIV-1感染的PBMC分泌细胞因子的影响,从而为AIDS和结核病的预防和治疗提供新思路。 实验材料 PBMC从4份PPD(刁和3份PPD(刁健康人的新鲜抗凝血 中提取。HIV-ISF-33毒株由卫生部艾滋病预防与控制中心参 比实验室惠赠,实验滴度为125 TCID。/Inl。PPD购自中国药品生 物制品检定所。HIV-IP24抗原 EllSA试剂盒为荷兰阿克苏公 司产品。IL-10和TNF-a ELISA试剂盒为深圳晶美公司分装美 国Ge啊me公司产品。RPMI 1640为GIBCO B既公司产品。 实验方法 l邑PPD对*V-1复制的作用 密度梯度离心法分离4个PPD(+)健康人和3个PPD(-) 健康人的PBMC,感染HIV-ISF-33株(125 TCID。/IInl)后接种 于 48 yL板(终浓度为 IX 10‘细胞/InlX将 PPD按终浓度为 10fig/ d和Nd加人实验孔(设立不加”D的阴性对照X培养72 jJ\ 时后收上清,测定州抗原含量。 2.PPD对PBMC分泌细胞因子的影响 PPD(+)健康人的PBMC和PPD共培养72 jJ’时后收上清 (设立不加PPD的阴性对照入测定细胞因子TNF-。和IL习 的 含量。 3.PPD对*V-1感染的PBMC分泌细胞因子的影响 HIV叫-33感染的PPD(+)健康人的PBMC与PPD共 培养72小时后收上清(设立不加 PPD的阴性对照人测定细胞因 子 TNF-a和 IL—10的含量。 4.统计方法t检验。 ·2· 实验结果 二.PPD对HIyJ复制的促进作用 4个PPD(叫健康人的PBMC启体外感染HIVJ 刁3株 *25 hID/lrnl)后,用 PPDO)刺激72小时,HIVJ 的含量比无PPD刺激的阴性对照组明显升高(P<o.仍*而在3 个PPD(刁健康人的PBMC,未见到PPD明显提高HIVJ 含 量(P>o.05)(见图二)。 2.PPD对PBMC分泌细胞因子的影响 将PPD(owtml)与4个PPD(+)健康人的PBMC共同培养 72小时后发现,与无PPD刺激的阴性对照组相比fPD能显著诱 导细胞因子’YNr-a和IL-ic的分泌(P<o.05)(见图2)。 3.PPD对H二V-二感染的PBMC分泌细胞因子的影响 一个PPD(+)健康人的PBMC,在体外感染HIV—ISF—33株 O25冗1礼八)后,用匹D* 吵d)刺激72小时,上清中细胞 因子wF-a的含量比无凹D刺激的阴性对照组显著升高(P< o.05),IL-10比阴性对照组显著下降(P<O.05)(见图3)。 讨 论 近些年来,结核病再次成为全球最紧迫的公共卫生问题。我 国现有活动性结核病人500万,其中传染性肺结核病人200万。 HIV感染者和AIDS病人是结核的高发人群,发生结核病的概率 是 IIW(-)PPD(+)者的 30倍。临床观察和流行病学调查都证 实,活动性结核能加速HIV感染后病程进展,缩短患者生存期。 人体的免疫反应包括天然门特异性)免疫和获得性(特异 ·3· 性)免疫。机体对抗原的初次免疫应答需要4-7天。初次免疫 应答后,部分效应细胞转变为兔疫记忆细胞,当机体再次遇到相同 抗原刺激时,免疫记忆细胞迅速转人活化增殖状态,分化出效应性 淋巴细胞,因此,记忆性抗原引起的再次免疫应答比初次兔疫应答 更快、更强。此外八6T细胞可能在微生物感染的早期发挥作用。 结核分支杆菌刺激机体产生获得性细胞免疫,它是机体抵抗结核 杆菌感染的主要防御机制,主要由抗原特异性 CD4叮细胞介导, CDS叮细胞和YST细胞也发挥一定的作用。 HIV是一种逆转录病毒,主要侵袭免疫系统,导致?
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R512.91

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【参考文献】
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