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《中国医科大学》 2002年
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多西紫杉醇对人鼻咽癌细胞系CNE-I的放射增敏作用

唐秋  
【摘要】: 前言 最近人们发现某些抗肿瘤药物除了具有细胞毒性作用外,可能还有放射增敏作用。由于抗肿瘤药物作为放射增敏剂在临床应用时,有其它药物不可比拟的优越性,因此受到肿瘤放射治疗界的广泛重视。目前作用于微管的紫杉类新型抗肿瘤药物较多,其中对泰素放射增敏作用的研究较多,而且各家的报道差异很大,有关多西紫杉醇放射增敏作用的研究报道较少见。本实验采用细胞集落形成方法来研究多西紫杉醇对鼻咽癌细胞系CNE-Ⅰ有无放射增敏作用及其放射增敏作用与其作用时间和浓度的相关性,从而为今后临床使用多西紫杉醇作为放射增敏剂提供理论依据。 实验材料 1、细胞系:人鼻咽癌细胞系CNE-Ⅰ,由中国预防医学科学院病毒研究所提供。 2、药物:多西紫杉醇(TAXOTERE),由AVENTIS公司馈赠,冷藏保存。实验前将药物用PRMI1640培养液配制成所需的浓度。 3、主要试剂:PRMI1640培养液,内含10%新生小牛血清。胰酶,PBS液。 4、主要仪器:二氧化碳培养箱、倒置显微镜、微量加样器和血球计数器由中国医科大学细胞生物实验室提供。PRIMUS直线加速器由中国医科大学放疗科提供。6cm塑料平皿,由华美生物制品有限公司提供。 实验方法 将人鼻咽癌细胞系 CNE{置于 37T,5%CO。培养箱内,用含 10%新生小牛血清的PRMll640培养液在培养瓶内单层传代培 养,取指数生长期细胞进行实验。 实验分组: 阴性对照组:培养皿内只接种瘤细胞,不做任何处理; 阳性对照组:即单纯用药组,采用不同浓度的药物作用不同的 时间; 单纯放射组:分别照射 1.3j*s; 多西紫杉醇加照射组:不同浓度药物作用不同时间后,立即除 去药物,然后照射l3j*J。 每平皿内接种细胞数因药物浓度、药物作用时间、照射剂量不 同而不同,接种细胞数要使形成的集落数达到100----00个为宜。 实验步骤: 门)多西紫杉醇药物毒性测定 取处于指数生长期的CNEJ细胞,胰酶消化计数,将细胞接种 于6cm平皿中,每平皿接种400个细胞,贴壁培养12 /J\时后,吸出 培养液,分别加人用PRMll640培养液配制好的多西紫杉醇,浓度 媚u为 2 x 10-‘mg/Inl、lx10-‘…rnl、5 x 10-’mg/rnl、Zx 10-bg/ Inl、lx 10-’mgilnl、5 x 10-‘mg/ml、2 x 10-‘mg/Inl,每个浓度设 2 个平行样。药物作用3小时后,立即除去药物,并用PBS液洗涤 细胞二次,重新加人不含药物的新鲜培养液SInl,置于培养箱中培 养14天,固定染色后计数细胞集落数,计算出集落形成率。实验 重复2次,取2次平均值,以多西紫杉醇药物浓度负对数为模坐 标,以存活率为纵坐标,绘出多西紫杉醇的剂量-效应曲线,推算出 多西紫杉醇的 ID35、ID50、ID70和 ID90。 ·2· p)不同浓度多西紫杉醇作用相同时间对 CNEI细胞放射 敏感性的影响 以高于ID50的lx 10-‘mg/ml(ID90),2 x 10-’mgllnl(ID70) 和低于ID50的 IX 10一仰4rnl(ID3)的药物浓度作放射增敏研 究。将培养瓶内指数生长期的CNE{细胞胰酶消化,计数活细胞 数,逐级稀释后将细胞接种6cm平M中,贴壁培养12 /J\时。吸出 培养液,用药组分别加人含有不同浓度多西紫杉醇厂 10-Vg/ ml,2 x 10-bg/Inl,lx 10-\g/Inl)的培养液 SInl,单纯照射组只加 人不含药物培养液srnl,继续培养3小时后立即除去药物,并用 PBS液洗涤细胞两次,加人不含药物培养液srnl。然后单纯照射 组和药物加照射组用剂量率 200cGy/min,SSD100cm 6MV X线分 别照射1乃5 P。照射后在37℃,5%CO。培养箱内继续培养 14天。 O)同一浓度多西紫杉醇作用不同时间对CNE{细胞放射 敏感性的影响 以 2 x 10刁m矿d多西紫杉醇进行实验。用药组加人含有 2 x 10-b砂d多西紫杉醇培养液分别继续培养 3在、24 /J’时,余处 理方法同上。 培养14天后,细胞用95%乙醇固定后,0.25%结晶紫染色, 并计数集落数(计数含有250个细胞的集落入计算细胞存活率 瞩F八存活率=照射后细胞形成的集落创(接种细胞数X未照 射细胞集落形成数人 采用SPSSS.0和Origin统计软件根据各照射剂量点的存活率 绘制细胞存活曲线,由细胞存活曲线计算出多西紫杉醇在10%存 活率水平时的放射增敏比(SER人SER的定义为在达到相同生 物效应时单纯照射组的剂量与药物加照射组的剂量之比。 ·3· 实验结果 根据多西紫杉醇的药物剂量-效应曲线,推算多西紫杉醇的 ID35为 lx 10-‘mgllnl,ID50为 3.2 x 10-‘m才rnl,ID70为 2 x 10-bg/ml,ID90为 IX 10-\。从实验结果看,多西紫杉醇 对CNE-I细胞有较强的细胞毒性作用,随药物浓度的增加,细胞的 存活率降低。根据细胞存活曲线测得在10%细胞存活水平时,不 同浓度的多西紫杉醇(二 X10-‘、2 X10-’\1 X10-‘*g/d)作用3 /J\
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R739.63

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