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《中国医科大学》 2004年
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质粒pLXSN-bcl-2治疗短暂性局灶性脑缺血及对热休克蛋白70表达影响的实验研究

邹巧治  
【摘要】: 目的 目前,转bcl-2基因治疗缺血性脑血管病的研究尚处于探索阶段,其中载体的选择和基因导入途径是该治疗能否临床应用的关键。国内外多采用以病毒为载体通过脑缺血局部注射的方法,但该方法由于一些不可避免的缺陷使临床广泛应用受到很大限制。本实验为寻求更为简便快捷的治疗方法,用质粒作为载体携带bcl-2基因,直接注入短暂性局灶性脑缺血大鼠的侧脑室内,观察该方法能否收到良好的治疗效果。热休克蛋白70(Heat shock protein 70,Hsp70)在应激状态的细胞内大量存在,对缺血状态的细胞有保护作用。近来有研究发现hsp70蛋白的脑保护作用可能与其抗凋亡效应有关。因此,本实验欲观察bcl-2的过度表达能否引起hsp70蛋白表达的变化,为进一步探讨二者之间的关系提供依据。 方法 采用改良的Longa栓线法构建大鼠局灶性脑缺血模型,用立体定位仪确定大鼠侧脑室精确位置,缺血后立即向治疗组和对照组大鼠侧脑室中分别注入质粒pLXSN-bcl-2(100ng/ul)、空质粒pLXSN(100ng/ul)和生理盐水各20ul。缺血一小时后将拴线拔出进行缺血鼠脑再灌注。存活的各组大鼠分成再灌注3h、6h、24h、48h、72h组,在各时间点将大鼠断头取大脑。用免疫组织化学方法观察bcl-2蛋白和hsp70蛋白表达情况,用2%TTC(2%2,3,5-triphenyltetrazolium chloride红四氮唑)染液显示鼠脑梗死灶,并用直接测量法比较治疗组和对照组大鼠各时间点脑梗死体积变化。 结果 1.再灌注3h大鼠脑内即可见bcl-2蛋白、hsp70蛋白表达,随后表达逐渐增加,均在再灌注24h达到峰值,再灌注48h、72h表达逐渐降低,二者均在梗死灶周围的“半暗带”区大脑皮质以及对损伤比较敏感的海马、尾状 核和丘脑的部分区域表达最强。但治疗组两种蛋白的表达在各时间点均较 对照组强,而注射空质粒和生理盐水的两个对照组之间两种蛋白的表达在 各个时间点均无差异。治疗组可见bcl一2蛋白在全脑广泛表达,而对照组 仅在梗死灶局部少量表达。 2.再灌注6h、24h、48h、72h治疗组大鼠的脑梗死体积较对照组小,两 个对照组中大鼠的脑梗死体积无差异。 结论 1.向大鼠侧脑室中直接注射质粒pLXSN一bcl一2后,bcl一2基因能够 在短暂性局灶性缺血的大鼠脑组织中广泛表达,且以缺血区表达最强,表达 产物能发挥生物学效应,减小鼠脑梗死体积,从而保护缺血脑组织,因此该 治疗方法具有可行性。 2.bd一2基因的表达促进了hsP70基因的表达,引起缺血区hsp70蛋白 增多,间接保护了缺血脑组织。因两种蛋白表达的时间窗一致,且均有抗凋 亡作用,因此推测二者之间可能存在协同抗凋亡效应。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R743.3

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【参考文献】
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