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《中国医科大学》 2004年
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静脉注射骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑缺血后的bFGF表达

徐军  
【摘要】:目的 研究碱性成纤维生长因子(bFGF)在静脉注射骨髓基质细胞(MSC)治疗大鼠局灶性脑缺血后的表达,探讨骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑缺血的作用机制是否与bFGF蛋白表达增加有关。 方法 取45只Wistar大鼠,随机将大鼠分配到3组中,每组动物15只,分别为股静脉注射生理盐水组(生理盐水组),正常对照组(非处理组),股静脉注射骨髓基质细胞组(治疗组)。按Fridenshtein方法采集、分离、培养骨髓基质细胞,免疫细胞化学方法鉴定骨髓基质细胞,取第八代之前的细胞,在接种前一天以终浓度0.1mM的溴脱氧尿苷(Brdu)标记,接种时,细胞浓度为3×10~6/ml;改良Longa栓线法制作大鼠局灶性大脑中动脉缺血(MCAO)1小时模型,在缺血后24小时股静脉注射生理盐水、正常对照组、股静脉注射Brdu标记的骨髓基质细胞。采用NSS评分,观察脑缺血后3、7、14天神经功能的评分,Brdu免疫组化染色,Brdu分布以及神经功能改善的影响。 免疫组化测定:实验大鼠用10%水合氯醛腹腔注射(3.5 ml/kg)后,以生理盐水及4%多聚甲醛经左心室进行心脏灌注、固定、石蜡包埋、连续冠状切片(厚6um)。应用SABC法,bFGF免疫组化测定一抗为小鼠抗bFGF蛋白前体,二抗为生物素花山羊抗小鼠IgG,DAB显色剂,常规脱水、透明、树胶封片。应用显微图象分析系统测定脑缺血再灌注3、7、14天bFGF蛋白表达。 实验结果 神经功能评分:生理盐水组和正常对照组相比,各时间点均无显著差异(P>0.05)。治疗组与对照组相比,治疗组14天大鼠神经功能缺损不但较前好转而且与另外两组比较也明显好转,并且有显著性差异(P<0.05)。 免疫组化结果:在梗塞半球大量BrdU阳性细胞,对侧半球也可见少量 BrdU阳性细胞。bFGF蛋白表达:生理盐水组和正常对照组之间,缺血各时 间点的表达均无显著性差异(P0.05),治疗组与对照组相比各个时间点 的表达均显著增加(P0.05)。 结论 大鼠局灶性脑缺血后静脉注射骨髓基质细胞,大鼠神经功能评分减低, 可促进大鼠神经功能的恢复。本实验免疫组化的表达结果显示:实验组 bFGF蛋白表达在不同时间明显高于其他两个对照组,故我们认为静脉注射 骨髓基质细胞治疗大鼠局灶脑缺血的机制可能与bFGF蛋白表达增加有 关。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R743.3

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【参考文献】
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