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《中国医科大学》 2007年
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白芨水煎剂对变形链球菌影响的体外研究

陈玉  
【摘要】: 目的 龋病是细菌感染性疾病,变形链球菌(Streptococcus mutans,以下简称变链菌)是目前所公认的主要的致龋菌之一。白芨是传统的中草药,临床应用广泛,毒副作用较小,具有杀菌、消炎作用。虽然白芨在防龋中药中有所提及,但是相关的实验研究很少。本研究通过白芨水煎剂(Bletille striata Reichb.f decoction,BSD)对变链菌生长、产酸、粘附以及产胞外多糖的影响,初步探讨中药白芨成为防龋药物的可能性。 方法 1、白芨水煎剂和变链菌标准菌液的制备 取白芨55g,干燥,粉碎,水提取前冷浸1小时,用蒸馏水1430ml(26倍加水量)煎煮2次,共煎煮4小时。无菌4层纱布过滤杂质,合并滤液浓缩至55ml,此为1g/ml的BSD,备用。 变链菌标准菌株按说明书溶解,放入牛心脑浸液(BHI)固体培养基中,厌氧环境下复苏48小时。之后将菌种接种于胰蛋白酶大豆(TS)液体培养基中,增菌18小时。涂片检查为纯培养后,将菌液在4℃下3000 r·min~(-1)离心15分钟,收集细菌,用无菌生理盐水洗菌2次,并用其调整,使菌悬液在540nm处吸光度等于1.0,备用。 2、白芨水煎剂对变链菌生长的影响 1g/ml的白芨水煎剂和已溶化的BHI固体培养基采用倍比稀释法,使最终培养基含药液浓度分别为250.00mg/ml、125.00mg/ml、62.50 mg/ml、31.25mg/ml、15.62mg/ml、7.81mg/ml、3.90mg/ml、1.95mg/ml、0.98mg/ml。按CLSI/NCCLS推荐的琼脂稀释法测定实验菌株的MIC值。 3、白芨水煎剂对变链菌产酸作用的影响 根据BSD对变链菌MIC测定结果,选取MIC值以下4个浓度梯度,配制含1%蔗糖的TS液体培养基。采用酸度计调定初始PH值为7.4,接种等量的变链菌悬液。用PHS-25数显PH计测定培养物上清液的PH值,并求出培养前后的△PH值。实验共分5组(4个不同浓度的实验组和1个对照组),每组4个平行管,每管测定3次,结果取平均值。 4、白芨水煎剂对变链菌粘附作用的影响 采用比浊法。选取白芨水煎剂MIC值以下4个浓度,每管中插入已灭菌的直径为0.8mm牙用不锈钢丝一根及等量菌悬液,厌氧(80%N_2、10%CO_2、10%H_2)培养24小时后换上新鲜培养液,同等条件下再培养24小时;取出钢丝,将钢丝上粘附的细菌洗脱下来,分别测OD值。实验共分6组(4个不同浓度的实验组和阴性、阳性2个对照组),每组4个平行管,每管测定3次,结果取平均值。 5、白芨水煎剂对变链菌产胞外多糖作用的影响 本研究采用葸酮测多糖技术,测量BSD对变链菌产水溶性(样品A)、水不溶性(样品B)胞外多糖的影响。实验共分5组(4个不同浓度的实验组和1个对照组),每组4个平行管,每管测定3次,结果取平均值。 6、统计学处理 实验数据由SPSS 10.00软件进行统计学处理,结果以(?)±s表示,各组总体均数之间用单因素方差分析进行比较(Analysis of variance,ANOVA),各样本组间均数的比较采用SNK(Student-Newman-Keuls)。P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果 1、抑菌实验 BSD浓度在62.50mg/ml以上的培养基内无变链菌生长,浓度在31.25mg/ml以下的培养基内均有变链菌生长,且随着浓度的降低,变链菌的菌株增多。根据实验结果判定其MIC值是62.50mg/ml。 2、产酸实验 随着BSD浓度的增加,实验前后△PH减少,说明变链菌产酸随浓度的增加而减少。经统计学处理,除3.90mg/ml浓度组外,各浓度组实验前后△PH值与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。 3、粘附实验 随着BSD浓度的降低,粘附抑制率明显减小。经统计学分析,除3.90mg/ml浓度组外,其它各浓度组吸光度值总体均数间及与对照组之间有统计学差异(P<0.05)。 4、产胞外多糖实验 随着BSD浓度的增加,样品A、样品B的吸光度同时减少,而吸光度与胞外多糖的量呈正比关系,故随着浓度的增加,产水溶性、水不溶性胞外多糖的量也随着减少。其抑制作用随着浓度的增加而增强。经统计学分析,除3.90mg/ml、7.81mg/ml浓度组外,15.62mg/ml、31.25mg/ml浓度组与对照组之间有显著性差异P<0.05。 结论 白芨水煎剂具有抑制变链菌生长、产酸、粘附和产胞外多糖的作用,有望成为新一代的中药防龋剂。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R285.5

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