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《中国医科大学》 2007年
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羟苯磺酸钙治疗慢性马兜铃酸肾病大鼠对肾组织CD34和VWF表达的影响

郭伟  
【摘要】: 目的 马兜铃酸肾病(Arisolochic acid nephrapathy,AAN)是由于服用含有马兜铃酸(Arisolochic acid,AA)的中草药所致的急慢性间质肾病。临床上表现为急性肾衰,慢性肾衰和(或)肾小管酸中毒。肾脏病理主要表现为肾小管上皮细胞坏死、脱落、小管基底膜萎缩,间质大量单个核粒细胞浸润和(或)纤维化及微血管病变,血管壁增厚、管腔狭窄、甚至完全闭塞。近年来AAN受到国内外广泛关注,但目前对AAN的治疗尚无成熟方法。 本实验目的是通过关木通水煎剂灌胃制备慢性马兜铃酸肾病(Chronic arisolochic acid nephrapathy,CAAN)大鼠模型,观察应用羟苯磺酸钙(安多明)治疗对CAAN大鼠24小时尿蛋白定量,血肌酐(Scr),血尿素氮(BUN)以及肾小管周毛细血管(PTC)内皮细胞特异抗原CD34和血管性假血友病因子(von Willebrand factor,vWF)表达的影响。探讨羟苯磺酸钙改善CAAN大鼠模型肾脏微循环障碍的作用和机理。 材料和方法 一.实验材料 1.实验动物 雌性Wistar大鼠60只,周龄7~8周,体重190~220g。随机分为3组,每组20只。分为正常对照组,CAAN未治疗组,羟苯磺酸钙治疗组。 2.主要试剂和药品 中药关木通、羟苯磺酸钙(安多明)、Masson试剂盒、兔抗大鼠CD34多克隆抗体免疫组化试剂盒、SABC即用型试剂盒、DAB显色试剂盒、兔抗大鼠vWF多克隆抗体免疫组化试剂盒、生物素化羊抗兔IgG。 3.主要仪器 光学显微镜,显微照像仪,显微图象分析仪,分光光度计,离心机,全自动生化分析仪。 二.实验方法 1.关木通水煎剂配制方法 取关木通生药材2000g,加6倍饮用水,浸泡30分钟,加热至沸,煎煮30分钟,倾出药液,残渣再加入4倍饮用水,煎煮30分钟,合并两次药液,过滤,浓缩后制成1000ml水煎剂(相当于2g生药/ml),4℃放置备用。 2.实验动物分组及给药方法 将Wistar大鼠随机分3组,每组20只均经口灌胃。(1)对照组:饮用水灌胃16周,剂量10 ml/(kg.d),分两次灌胃。(2)未治疗组:关木通水煎剂灌胃12周,剂量20g/(kg.d)相当于10ml/(kg.d),再予饮用水灌胃4周,剂量10ml/(kg.d),分两次灌胃。(3)治疗组:关木通水煎剂灌胃12周剂量、方法同未治疗组,再予羟苯磺酸钙灌胃4周,剂量100mg/(kg.d)(100mg溶于10ml饮用水),分两次灌胃。实验期间大鼠均自由饮食,饮水。 3.尿蛋白及肾功检测 在第12周,16周分别将大鼠放入代谢笼中收集24小时尿液,记24小时尿量,采用磺柳酸—硫酸钠比浊法测尿蛋白。收集尿液后用10%水合氯醛腹腔麻醉大鼠,剖开腹腔,下腔静脉采血,测血尿素氮(BUN),血肌酐(SCr)。取肾组织,置于4%多聚甲醛备用。 4.肾组织形态学检查 肾组织标本用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,HE和Masson常规染色,普通光镜观察。 5.免疫组织化学结果分析 按ABC法进行免疫组织化学染色,DAB显色。用显微照像仪照像,用显微图象分析仪对图像进行定量分析。每张切片随机选取5个高倍视野(400倍),测定其阳性染色物质积分光密度(Intergrated optical density,IOD)值。 6.统计学方法 计量数据用均数±标准差表示,两组间均数比较,应用t检验,组间差异比较采用t检验,用统计软件SPSS13.0分析处理。 结果 1.尿蛋白及肾功检测 关木通水煎剂灌胃12周,未治疗组和治疗组大鼠24小时尿蛋白定量,血清尿素氮,血肌酐升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。第16周,未治疗组24小时尿蛋白定量为(63.56±12.7)mg/24h,BUN为(17.38±2.72)mmol/L,Scr为(83.5±9.91)umol/L;治疗组24小时尿蛋白定量减少为(35.58±3.88)mg/24h,BUN下降为(13.8±2.38)mmol/L,Scr下降为(66.75±8.45)umol/L,与未治疗组比较差异有统计学意义(P0.01)。 2.病理检测 第16周Masson染色,未治疗组间质纤维化区域积分光密度值为(69.97±17.69)×10~3,治疗组大鼠肾间质纤维化减轻,间质纤维化区域积分光密度值为(38.22±5.17)×10~3,与未治疗组比较差异有统计学意义(P0.01)。 3.免疫组织化学结果 3.1 CD34结果:第16周,与未治疗组比较,治疗组大鼠CD34阳性表达增加,未治疗组CD34~+-IOD值为(3.19±1.4)×10~3,治疗组CD34~+-IOD值为(16.7±4.2)×10~3。两者比较差异有统计学意义(P0.01)。 3.2 vWF结果:第16周,与未治疗组比较,治疗组大鼠vWF阳性表达减少,未治疗组vWF~+-IOD值为(18.66±4.65)×10~3,治疗组vWF~+-IOD值为(10.16±1.68)×10~3。两者比较差异有统计学意义(P0.01)。 结论 1.羟苯磺酸钙治疗能减少CAAN大鼠尿蛋白的排泄,改善肾功能。 2.羟苯磺酸钙治疗能减轻CAAN大鼠肾间质纤维化。 3.羟苯磺酸钙治疗能增加CAAN大鼠肾组织CD34~+细胞的表达,增加肾小管周围毛细血管密度;羟苯磺酸钙能减少CAAN大鼠肾组织vWF~+细胞的表达,减少微血栓形成。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R692.9

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