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《中国医科大学》 2007年
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水通道蛋白-1mRNA在人晶状体上皮细胞中的表达

于紫燕  
【摘要】: 目的 水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)参与水跨膜转运及水平衡调节,广泛分布在机体与液体吸收和分泌有关的上皮细胞中,及可能协同水跨细胞转运的内皮细胞中。AQP1存在于前囊下晶状体上皮细胞,它的功能或表达水平变化直接关系到晶状体代谢的异常。本研究用半定量RT-PCR法结合计算机成像分析系统检测人晶状体前囊膜下晶状体上皮细胞AQP1mRNA的表达,并比较透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1mRNA表达的差异,以及人晶状体上皮细胞系HLE-B3和老年性白内障患者晶状体上皮细胞AQP1mRNA表达的差异,为进一步研究老年性白内障成因、防治提供新的线索。 实验材料与方法 一、实验材料 1、标本来源 透明晶状体前囊膜9例9只眼。老年性白内障患者晶状体前囊膜31例31只眼(其中皮质性白内障14例,核性白内障17例)。晶状体上皮细胞系为人晶状体上皮细胞系HLE-B3。标本保存于-70℃冰箱。 2、实验仪器 PCR扩增仪、凝胶电泳成像仪、紫外分光光度仪,微型离心机。 3、实验试剂 动物RNAout,RT-PCR试剂盒,特异性引物由北京三博远志生物技术有限公司合成,耐热DNA聚合酶(Taq酶,浓度为5 U/μl)及Marker(DNA分子量标准DL2000)。 二、实验方法 1、样本总RNA的提取:使用RNAout,按说明书操作。 2、反转录反应 3、PCR反应 4、结果观察 反应结束后,取PeR产物5μl于2%琼脂糖凝胶电泳,成像仪观察结果并摄像,存入成像分析系统。 三、统计学分析 采用SPSS12.0统计分析软件进行方差分析,P<0.05为有统计学意义。 实验结果 RT-PCR扩增产物,可见有一与140bp相一致的扩增片段,为标志人AQP_1mRNA的表达产物。皮质性白内障患者晶状体前囊膜和透明晶状体前囊膜AQP_1mRNA表达差异有显著性(方差分析P<0.01)。核性白内障患者晶状体前囊膜和透明晶状体前囊膜AQP_1mRNA表达差异有显著性(方差分析P<0.01)。皮质性白内障患者晶状体前囊膜和核性白内障患者晶状体前囊膜AQP_1mRNA表达差异无显著性(方差分析P>0.05)。皮质性白内障患者晶状体前囊膜和HLE-B3细胞系AQP_1mRNA表达差异有显著性(方差分析P<0.01)。核性白内障患者晶状体前囊膜和HLE-B3细胞系AQP_1mRNA表达差异有显著性(方差分析P<0.01)。 结论 AQP1mRNA在皮质性白内障患者晶状体前囊膜中的表达低于透明晶状体前囊膜。AQP1mRNA在核性白内障患者晶状体前囊膜中的表达低于透明晶状体前囊膜AQP1mRNA在皮质性白内障患者晶状体前囊膜核性白内障患者晶状体前囊膜表达无差别。AQP1mRNA在皮质性白内障患者晶状体前囊膜中的表达低于HLE-B3细胞系。AQP1mRNA在核性白内障患者晶状体前囊膜中的表达低于HLE-B3细胞系。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R776.1

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