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《中国医科大学》 2007年
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核因子κB信号途径调控腹膜间皮细胞表达MCP-1的实验研究

李志明  
【摘要】: 前言 腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)是终末期肾脏病的主要替代疗法,具有血液透析(hemodialysis,HD)无法替代的优势。然而长期的腹膜透析几乎不可避免地引起腹膜炎性改变和腹膜纤维化,二者病理改变主要表现为腹膜层单核巨噬细胞浸润和腹膜细胞外基质的沉积,最终导致腹膜透析失败。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是大肠杆菌的主要致病物质,是其唯一内毒素。LPS主要来源于长期腹膜透析引起的导管相关性感染,其次肠道内细菌可穿过通透性增高的肠壁进入腹腔。LPS和腹膜透析液中的高浓度葡萄糖是引起腹膜炎性改变和腹膜纤维化的主要原因。 腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells,PMC)是腹膜表面的一层细胞,是腹膜透析时与腹膜透析液直接接触的第一道生理屏障,也是腹膜损伤反应的第一步。研究腹膜间皮细胞在LPS作用下的反应是研究腹膜损伤机制和干预腹膜损伤的基础。 单核细胞趋化蛋白1(motocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)是重要的趋化因子CC亚家族的一员。MCP-1的受体CCR2是一类表达于不同类型细胞(单核细胞、记忆性T淋巴细胞、嗜碱性白细胞等)上的含有7个跨膜区的G蛋白偶联受体。MCP-1与CCR2结合后,CCR2变构并与G蛋白结合,激活信号转导通路,发挥生物学作用。MCP-1主要趋化单核/巨噬细胞和T淋巴细胞,诱导单核细胞、内皮细胞表达粘附分子,使各种炎性细胞尤其是单核/巨噬细胞向病变部位聚集,启动炎症反应,并促进细胞外基质的分泌,进一步导致组织器官纤维化、硬化。目前认为其在糖尿病肾病和腹膜透析腹膜炎性病变和腹膜纤维化中起到了启动和加重病变的作用。目前国内外还没有关于LPS影响PMC表达MCP-1的系统研究,因此本实验确立其为本研究课题之一。 核因子kappaB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)是重要的参与炎症反应的转录因子,存在于多种组织细胞中,与多种疾病的发生和发展相关。NF-κB是调节多种因子转录的核因子,正常情况下在细胞浆中以二聚体形式与无活性的调节亚单位NF-κB抑制蛋白(inhibitory protein ofNF-κB,IκB)形成复合物,遮蔽其核定位序列。在外界多种因素刺激下,IκB在被激活的IκB激酶(IκB kinase,IKK)复合物的作用下发生磷酸化,磷酸化后的IκB被泛素识别而发生泛素化,最后被26S蛋白酶体所降解,IκB的降解使NF-κB的核定位序列暴露出来,NF-κB进入核内与相关基因启动子区κB序列结合,从而参与相关基因的转录。目前研究较多并被证明有激活转录活性的NF-κB是p65:p50二聚体,因此通常所指的NF-κB是p65:p50,参与此二聚体激活过程的主要成分有IKKβ、IκBα等。基因序列的检索和相关研究表明MCP-1的基因启动子区有NF-κB结合序列,NF-κB信号途径参与了某些组织细胞MCP-1的表达。在腹膜间皮细胞中NF-κB的表达情况是研究其是否参与了MCP-1表达过程的基础。 NF-κB核移位抑制肽SN50、蛋白酶体抑制剂MG-132、IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082、IKKβ特异性抑制剂SC-514是NF-κB途径不同位点抑制剂,检测PMC在这些抑制剂作用下MCP-1的表达情况,可以明确NF-κB途径在LPS促进PMC表达MCP-1中的作用。研究MCP-1在PMC中的表达情况以及NF-κB途径在此过程中的作用可为改善腹膜透析失超滤提供思路。 方法 1、组织来源:雄性SD大鼠数只,体重120±20g,由中国医科大学动物实验中心提供。 2、细胞培养:胰蛋白酶消化法分离培养PMC,倒置相差显微镜、透射电镜、扫描电镜、免疫细胞化学方法对培养的细胞进行鉴定。 3、在LPS、高糖作用下,用RT-PCR法检测PMC表达MCP-1mRNA的情况;用Westem blot法检测PMC表达MCP-1、p-IKKβ、IκBα、p-IκBα及细胞核内p65蛋白的情况。细胞免疫荧光法检测p65的核移位情况。 细胞分组: (1)不同浓度LPS组:0、0.1、1.0、10、100mg/L; (2)1.0mg/L LPS作用不同时间组:0、0.5、1、3、12、24、48h; (3)高糖、LPS联合组:正常组、1.5%葡萄糖、1.0mg/L LPS、1.5%葡萄糖+1.0mg/L LPS。 4、在SN50、MG-132、BAY11-7082、SC-514的作用下,用RT-PCR法检测MCP-1mRNA的表达情况;用Western blot法检测PMC表达MCP-1蛋白的情况。 细胞分组: (1)不同浓度(10、25、50mg/L)SN50预孵育3h,加入1.0mg/L LPS再作用3h;设立SN50M(SN50无活性对照肽)对照组; (2)不同浓度(5、10、20uM)MG-132预孵育3h,加入1.0mg/L LPS再作用3h; (3)不同浓度(5、10、20uM)BAY11-7082预孵育3h,加入1.0mg/L LPS再作用3h; (4)不同浓度(10、50、100uM)SC-514预孵育1h,加入1.0mg/L LPS再作用3h。 结果 1、LPS促进PMC表达MCP-1 0.1mg/L的LPS可促进MCP-1mRNA和蛋白的表达(P0.05),100mg/L LPS的作用最强(P0.01)。1.0mg/L浓度的LPS作用1h时MCP-1mRNA表达增加(P0.05),3h时MCP-1蛋白明显增高(P0.05),48h MCP-1mRNA和蛋白质表达达到最大(P0.01)。 2、高糖、LPS对PMC表达MCP-1的影响 高糖促进PMC表达MCP-1(P0.01);与单纯高糖和单纯LPS比,高糖、LPS联合作用促进PMC表达MCP-1的作用最强(P0.05)。 3、LPS对PMC表达p-IKKβ、IκBα、p-IκBα、p65的影响 在0.1mg/L LPS作用下,细胞浆中p-IKKβ增多(P0.05),IκBα减少,p-IκBα增多(P0.05),核中p65表达增加(P0.05),100mg/L LPS作用最大(P0.01);LPS作用0.5h时细胞中p-IKKβ增多(P0.05),IκBα减少,p-IκBα增多(P0.05),核中p65表达增加(P0.01);1h时细胞中p-IKKβ增至最多(P0.01),3h时细胞中p-IKKβ迅速下降,IκBα减至最低,p-IκBα增至最多(P0.01),细胞核中p65表达最高(P0.01),随后p-IKKβ缓慢下降,IκBα开始增高,p-IκBα开始减少,核中p65表达开始下降,24h时p-IKKβ、p-IκBα再次增高,IκBα减少,p65在核内明显增多,48h时p-IKKβ、p-IκBα显著下降,IκBα明显增高,p65在核内明显减少。 4、NFκB信号途径在LPS促进PMC表达MCP-1中的作用 与LPS组比,10mg/L SN50、5uM MG-132、5uM BAY11-7082、10uM SC-514均可抑制LPS作用下MCP-1mRNA和蛋白质的表达(P0.05),50mg/L SN50、20uMMG-132、20uM BAY11-7082、100uM SC-514明显抑制MCP-1mRNA和蛋白质的表达(P0.01);SN50M则无此作用(P0.05)。 结论 1、LPS促进PMC表达MCP-1mRNA和蛋白质呈浓度和时间依赖性; 2、高浓度葡萄糖和LPS联合作用对PMC表达MCP-1mRNA和蛋白质的作用大于单纯葡萄糖或单纯LPS; 3、LPS可浓度依赖性促使PMC中p-IKKβ表达增多;IκBα减少、p-IκBα增多;p65发生核移位;IKKβ-IκBα-p65活性呈双峰表现; 4、LPS促进PMC表达MCP-1是IKKβ—IκBα—p65:p50信号途径依赖的。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R692.5

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张刚;NF-κB及其相关分子研究进展[J];国外医学(临床生物化学与检验学分册);2002年05期
2 罗非君,肖献忠,尢家騼,王燕如,罗正曜;内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的机制探讨[J];湖南医科大学学报;2000年05期
3 刘达,姚智;NF-κB及其活化的研究进展[J];天津医科大学学报;2001年01期
4 方炜,钱家麒,余志远,陈诗书;Morphological changes of the peritoneum in peritoneal dialysis patients[J];Chinese Medical Journal;2004年06期
5 杨琼琼,叶任高,许韩师,陈永雄,余学清,孔庆瑜,黄凌虹;高糖对大鼠腹膜间皮细胞中p21~(WAF1)基因表达的影响[J];中华肾脏病杂志;2000年02期
6 陆福明,顾亢霞,郭晓敏,杨海春,黄宇峰,林善锬;终末糖基化产物在尿毒症患者血清中的水平及血管壁和腹膜上的表达[J];中华肾脏病杂志;2000年03期
7 刘伏友,段绍斌,彭佑铭,夏家辉;细菌毒素和肿瘤坏死因子-α对人腹膜间皮细胞白细胞介素8和纤连蛋白分泌的影响[J];中华肾脏病杂志;2001年03期
8 杨琼琼,叶任高,阳晓,郑智华,关伟明,余学清;细胞周期抑制蛋白p27在慢性腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞肥大中的作用[J];中华肾脏病杂志;2001年06期
9 窦献蕊,余学清,王文健,郑智华,陈文芳,李晓艳,彭文兴,尹培达,贾占军,王欣,孙辽,张晖;一种新的大鼠慢性腹膜纤维化动物模型的建立[J];中华肾脏病杂志;2004年06期
10 郝文科;余学清;窦献蕊;李晓艳;骆宁;王欣;贾占军;彭文兴;郑智华;;上调Smad7表达对腹膜纤维化大鼠腹膜炎症细胞浸润及促炎症因子表达的影响[J];中华肾脏病杂志;2006年04期
【共引文献】
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1 李龙海;腹膜透析治疗肾功能衰竭时植管方法的临床探讨[J];安徽医学;2005年02期
2 黎淮;郝丽;何衡杰;刘桂凌;;简易腹膜透析在危重肾衰竭患者抢救中的应用[J];安徽医学;2010年03期
3 吴丹;连双袋可弃式“Y”形管道系统腹膜透析患者护理体会[J];安徽医药;2001年03期
4 邓燕;商红;;~(99m)Tc-MDP骨显像诊断肾性骨病的临床意义[J];标记免疫分析与临床;2011年03期
5 孙艳艳;方敬爱;张晓东;刘文媛;常沁涛;王蕊花;;大鼠腹膜纤维化形成过程中TGF-β/Smads 2/3信号蛋白的变化及意义[J];北京医学;2011年02期
6 阎晋川;316例次CRF患者腹膜透析置管术体会[J];重庆医学;2004年01期
7 焦秀娟,姜慧卿,韩忠厚,李金花,高丽萍;肝硬化病人营养指标评估的临床意义[J];肠外与肠内营养;2003年04期
8 杨波;尿毒素胃肠道清除的现状与展望[J];郴州医学高等专科学校学报;2003年04期
9 吴群;腹腔灌洗治疗重症胰腺炎的观察及护理[J];当代护士(学术版);2003年06期
10 赵秀秀;;腹膜透析患者并发腹膜炎的原因分析及对策[J];当代护士(学术版);2010年01期
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1 胡跃明;谭锦华;杜娟;张梅;汪涛;;肾衰竭持续性自动腹膜透析充分性的智能评价方法[A];第二十四届中国控制会议论文集(下册)[C];2005年
2 郭姗姗;高英杰;时宇静;苏丹;崔晓兰;王意忠;;一枝蒿总黄酮体外乙肝病毒作用机理的实验研究[A];2009年全国中药学术研讨会论文集[C];2009年
3 化秋菊;黄德梅;李娜;;肾友会对农村腹膜透析患者治疗依从性的影响[A];2013年河南省腹膜透析及肾病血液净化护理新进展培训班论文集[C];2013年
4 马蓓佳;;腹膜透析患者的健康教育[A];2013年河南省腹膜透析及肾病血液净化护理新进展培训班论文集[C];2013年
5 张红;;健康教育及家庭随访对腹膜透析患者疗效的影响[A];2013年河南省腹膜透析及肾病血液净化护理新进展培训班论文集[C];2013年
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1 孟立锋;化痰祛瘀法防治腹膜纤维化的作用及机理研究[D];广州中医药大学;2011年
2 孙丽娟;Withanolide类成分的活性筛选及抗自身免疫性疾病的实验研究[D];华东理工大学;2011年
3 郝清智;深静脉血栓形成IκK/IκB/NF-κB信号传导通路及中医药干预机制的研究[D];山东中医药大学;2011年
4 黄蔚;肾上腺髓质素调节视网膜色素上皮细胞及细胞内信号传导通路的研究[D];第四军医大学;2002年
5 王琳;gp350影响培养CD5~+B细胞免疫球蛋白产生及其机理的研究[D];第四军医大学;2004年
6 樊怡;高糖通过p38MAPK和ERK1/2通路诱导腹膜间皮细胞己糖激酶表达的实验研究[D];中国医科大学;2006年
7 彭卫生;上调表达Smad7对腹膜纤维化大鼠模型腹膜转运功能的影响及其机制的研究[D];中南大学;2006年
8 李钺;PPARγ对炎症状态下C57小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇外流的影响[D];重庆医科大学;2007年
9 林治卿;碳纳米管致血管内皮细胞损伤的作用及其分子调控机制[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
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1 于有军;酸浆属植物中免疫抑制活性物质的筛选及药理学研究[D];华东理工大学;2009年
2 吴晓;大鼠闭合性脑损伤中IL-1β,p38 MAPK及VCAM-1表达的实验性研究[D];新疆医科大学;2011年
3 吴楠;腹膜透析充分性智能评估方法的研究与实现[D];华南理工大学;2011年
4 吕杨;卵巢肿瘤患者大网膜结节性组织细胞/间皮细胞增生[D];第四军医大学;2011年
5 杨波;爱西特对小分子尿毒素的吸附作用及其影响因素的研究[D];中南大学;2003年
6 吴红红;脓毒血症过程TNF-α和肝脏细胞凋亡关系及其机制探讨[D];新疆医科大学;2003年
7 李志明;脂多糖对腹膜间皮细胞己糖激酶活性的调控及对肿瘤坏死因子表达的影响[D];中国医科大学;2004年
8 郑进;川芎嗪对大鼠腹膜粘连及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白和TNF-α、TGF-β1表达的影响[D];河北医科大学;2004年
9 刘玉玲;丹参对大鼠烫伤早期肝损伤保护作用的实验研究[D];安徽医科大学;2005年
10 祁秀敏;重度创伤后体内锌及其相关功能改变与MOF关系的实验研究[D];汕头大学;2005年
【二级参考文献】
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1 郑智华,叶任高,杨琼琼,李惠群,余学清;腹膜透析液对腹膜间皮细胞凋亡与增殖的影响[J];中华肾脏病杂志;1999年05期
2 杨琼琼,叶任高,许韩师,陈永雄,余学清,孔庆瑜,黄凌虹;高糖对大鼠腹膜间皮细胞中p21~(WAF1)基因表达的影响[J];中华肾脏病杂志;2000年02期
3 林洪丽,陈香美,程庆砾,叶一舟,傅博,于力方;白介素1β对肾小球系膜细胞表达纤维蛋白溶解酶原激活物抑制物-1和纤维连接蛋白的影响[J];中华肾脏病杂志;1999年03期
4 李文歌,陈香美,叶一舟,傅博;血管紧张素Ⅱ2型受体抑制成纤维细胞增殖和纤维连接蛋白分泌[J];中华医学杂志;1998年10期
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1 侯凡凡,臧燕,张训,杨铁城;高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞生长和基质合成的影响[J];中华内科杂志;1995年05期
2 邹莎琳;凌光辉;夏运成;袁曙光;彭佑铭;孙林;刘伏友;;EMT在腹膜纤维化中的作用及意义[J];中国中西医结合肾病杂志;2009年07期
3 唐子勇,范敏华,邹万忠;胰岛素样生长因子-1拮抗高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞的毒性作用[J];北京医科大学学报;1999年01期
4 董秀清,阳晓,叶任高,彭文兴,杨琼琼,余学清;川芎嗪抗腹膜间皮细胞损伤的实验研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2001年08期
5 樊敏,刘伏友,段绍斌,彭佑铭,刘映红,袁芳;改良法培养鼠腹膜间皮细胞[J];湖南医科大学学报;2002年06期
6 张苗;蒋春明;陶娜娜;孙;;葛根素对腹膜透析液诱导腹膜间皮细胞氧化应激反应的影响[J];药物生物技术;2009年03期
7 崔明姬;王芳;张宝红;南光贤;;人参总皂甙抑制乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞的损伤[J];中国实验诊断学;2009年07期
8 钱敏;张苗;;葛根素对腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞分泌TGF-β_1的影响[J];现代生物医学进展;2009年18期
9 詹林达;黄锋先;;罗格列酮对尿酸致腹膜间皮细胞损伤的干预作用[J];中华全科医学;2010年01期
10 ;用热灭活的微生物直接激活人体腹膜间皮细胞[J];国外医学.外科学分册;1997年03期
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1 阳晓;叶任高;孔庆瑜;杨琼琼;余学清;汪涛;魏毅;;不同剂量川芎嗪对大鼠腹膜间皮细胞CD40表达的影响[A];2001年全国中西医结合急救医学学术会议论文集[C];2001年
2 阳晓;叶任高;魏毅;孔庆瑜;杨琼琼;;不同剂量川芎嗪对大鼠腹膜间皮细胞CD40表达的影响[A];第四次全国中西医结合中青年学术研讨会论文集[C];2002年
3 武士锋;杨洪涛;;腹膜透析相关模型建立的研究进展[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
4 曾健;李晓辉;;腹膜粘连的分子机制及防治[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
5 谢幸;;血清CA125在卵巢癌诊治中的应用:现状与展望[A];2011中国妇产科学术会议暨浙江省计划生育与生殖医学学术年会暨生殖健康讲习班论文汇编[C];2011年
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1 陶春祥;新型腹膜透析液的研究与评析[N];中国医药报;2003年
2 冯世容;低剂量川芎嗪可保护腹膜功能[N];中国医药报;2001年
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1 李孟慧;腹膜间皮细胞及转化生长因子在子宫内膜异位症粘连中作用研究[D];北京协和医学院;2012年
2 葛燕;microRNA-29c对人腹膜间皮细胞间充质转分化的影响及机制研究[D];中南大学;2012年
3 熊飞;参芎注射液对腹膜透析液诱导的腹膜间皮细胞损伤的干预作用研究[D];湖北中医药大学;2012年
4 李勰家;慢病毒介导的miRNA-302c对腹膜间皮细胞EMT的干预作用及机制研究[D];中南大学;2012年
5 张柯;miRNA589在TGF-β_1诱导人腹膜间皮细胞上皮—间充质转分化的作用及分子机制[D];中南大学;2010年
6 吴涛;TGF-β_1 SiRNA对人胃癌细胞和腹膜间皮细胞作用意义的初步探讨[D];中国医科大学;2006年
7 李志明;核因子κB信号途径调控腹膜间皮细胞表达MCP-1的实验研究[D];中国医科大学;2007年
8 易斌;PAMAM介导pCTGF-shRNA抑制小鼠腹膜纤维化的实验研究[D];中南大学;2007年
9 郭清;CXCL12-CXCR4生物轴与卵巢上皮性癌腹腔转移关系的研究[D];河北医科大学;2009年
10 樊怡;高糖通过p38MAPK和ERK1/2通路诱导腹膜间皮细胞己糖激酶表达的实验研究[D];中国医科大学;2006年
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1 李晓兰;高糖对腹膜间皮细胞细胞外基质影响的研究[D];中国医科大学;2003年
2 胡华;高糖腹透液对大鼠腹膜间皮细胞超微结构的影响[D];中南大学;2012年
3 曾真;抗生素对腹膜间皮细胞的影响的观察[D];大连医科大学;2010年
4 樊怡;己糖激酶在原代培养的腹膜间皮细胞表达与调控的实验研究[D];中国医科大学;2002年
5 李志明;脂多糖对腹膜间皮细胞己糖激酶活性的调控及对肿瘤坏死因子表达的影响[D];中国医科大学;2004年
6 丁红;高糖、PKC对原代培养的腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白1调节作用的研究[D];中国医科大学;2004年
7 钟晓娟;灯盏花素对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞MyD88、TNF-α表达的影响[D];南方医科大学;2013年
8 戢晴;舒洛地特对高糖诱导下大鼠腹膜间皮细胞纤维化的作用[D];福建医科大学;2011年
9 杨丽娜;1,25(OH)_2D_3对脂多糖及高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞维生素D受体及炎症因子表达的影响[D];中国医科大学;2010年
10 韩捷;脂多糖对人腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响[D];中国医科大学;2006年
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