收藏本站
《中国医科大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

中国HIV/AIDS患者na(?)ve、memory CD8+T细胞亚群数量及功能与疾病进展的相关性研究

施万英  
【摘要】: 目的 CD8+T细胞在抗人类免疫缺陷病毒(human immuno-deficiency virus,HIV)感染过程中起着关键作用,其中na(?)ve CD8+T细胞没有接受过抗原刺激,对人体产生针对新抗原的免疫应答非常重要,受抗原刺激后,能迅速活化、增殖,并分化为细胞毒性T细胞。Memory CD8+T细胞对机体产生快速二次免疫应答和维持机体免疫平衡具有重要作用,依据表型不同,外周血memory CD8+T细胞主要分为三个亚型:中央型(T_(CM))和两个效应型(T_(EM)-1和T_(EM)-2),接受刺激后,T_(CM)缺少效应功能,但能有效地刺激树突状细胞递呈抗原,并能快速增殖,分化为效应型T细胞;而T_(EM)能产生效应分子IL-4、IFN-γ和TNF-α,且含有穿孔素,具有细胞毒性,能迅速杀伤感染细胞,介导炎症反应。国外研究报道,在CD8+T_(EM)的两个亚型中,T_(EM)-2型表达的穿孔素最多,对β-趋化因子的趋化活性最强,且具有增殖活性。目前,有关na(?)ve和memory CDS+T细胞,尤其是T_(EM)-2型CD8+T细胞在HIV感染者体内的动态变化、免疫作用机制及在抗病毒治疗、疫苗研制中的作用尚不明确,HIV感染长期不进展者的系统报道甚少,尚无中国HIV感染者及HAART治疗患者不同亚群memory T细胞的研究。以往多以CD45RA和CD62L作为标志测定na(?)ve、memory T细胞数量,本课题在此基础上,应用多色流式细胞仪,运用多参数(CD45RA、CCR7、CD28)进一步明确定义na(?)ve、memory T细胞及其不同亚群,研究不同疾病进展阶段的中国HIV感染者na(?)ve、memory T细胞数量变化及其活化、增殖、受体表达情况,并探讨这些指标与疾病进展及免疫功能的相关性。 方法 1、研究对象: 58例未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者来自中国辽宁、吉林和河南,其中男性28例,女性30例,年龄分布为30-68岁(40.7±9.2)。根据HIV感染时间和CD4+T细胞数量将上述患者分为HIV感染长期不进展组(long-termnonprogressors,LTNP;感染时间大于10年,CD4+T细胞500个/μl)、典型进展HIV组(感染时间5年,CD4+T细胞介于200-500个/μl之间,无艾滋病指征性疾病)和典型进展AIDS组(感染时间5年,CD4+T细胞200个/μl或出现艾滋病指征性疾病)。58例HIV/AIDS患者中LTNP 18例、HIV感染者20例、AIDS患者20例。20例健康对照为随机抽取的HIV抗体阴性、未暴露于HIV的健康人,其中男性10名,女性10名。 2、T细胞绝对值检测: 将20μl CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP试剂加入绝对计数管中,经反向加样法加入50μl抗凝血,室温避光15min,加入免洗溶血素450μl,室温避光15min,FACS MultiSET软件检测并进行自动分析,计算CD4+T淋巴细胞绝对值。 3、HIV病毒载量检测 采用RT-PCR方法,用美国Roche公司的COBAS AMPLICOR自动载量仪测定病毒载量,最低检测范围是400拷贝/ml。 4、Na(?)ve、memory CD8+T淋巴细胞数量检测: 取HIV-1感染者及健康人全血100μl,应用以下荧光标记的单抗进行染色:CD28-FITC/CD27-PE/CD8-PerCP/CD45RA-APC/CCR7-PE-Cy7/CD4-APC-Cy7,室温孵育30min。加入溶血素3ml,室温孵育8min,1200r/min离心5min,弃上清。加入3ml PBS洗涤两次,加入含1%多聚甲醛的PBS 200μl重悬,FACSAria流式细胞仪Diva软件进行分析。以FSC、SSC、CD8-PerCP、CD45RA-PE-cy7、CCR7-PE-Cy7定义na(?)ve、memory CD8+T细胞,计算这些细胞群的百分比。na(?)ve、memory CD8+T细胞判断标准如下: na(?)ve CD8+T细胞:CD8+CD45RA+CCR7+CD28+ memory CD8+T细胞:中央型(TCM):CD8+CD45RA-CCR7+CD28+ 效应型:T_(EM)-1:CD45RA-CCR7-CD28+/CD45RA-CCR7-CD28- T_(EM)-2:CD45RA+CCR7-CD28- 5、Na(?)ve、memory CD8+T淋巴细胞表面CCR5、CXCR4及CD38水平的检测: 取HIV/AIDS患者及健康人全血100μl,应用以下荧光标记的单抗进行染色:CD28-FITC/CCR5-PE/CD8-PerCP/CD45RA-APC/CCR7-PE-Cy7/CD4-APC-Cy7、CD28-FITC/CXCR4-PE/CD8-PerCP/CD45RA-APC/CCR7-PE-Cy7/CD4-APC-Cy7和CD28-FITC/CD38-PE/CD8-PerCP/CD45RA-APC/CCR7-PE-Cy7/CD4-APC-Cy7,室温避光染色30min。加入溶血素3毫升,室温避光10分钟,1200r/min离心5min,弃上清。加入ml PBS洗涤两次,加入1%多聚甲醛的PBS重悬,FACSAria流式细胞仪Diva软件进行分析。以FSC、SSC定义淋巴细胞,分析na(?)ve、memory CD8~+T细胞表面CCR5、CXCR4及CD38表达水平。 6、CD4+、CD8+T细胞及其亚群内ki67水平检测 密度梯度离心法分离HIV-1感染者及健康人PBMC。向流式管1×10~6 PBMC中加入anti-CD28-FITC、anti-CD8-PerCP、anti-CD45RA-APC、anti-CCR7-PE-cy7和anti-CD4-APC-Cy7各10μl,4℃避光染色25 min,用冷的PBS 2ml洗涤1次(1200r/min离心5min)。应用BD细胞破膜固定试剂盒(BD cytofix/cytoperm kit),加入500μl Fixation/Permeabilization solution,室温避光20 min,离心弃上清,加入2mlBD Perm/Wash buffer,室温避光10 min,离心弃上清,加入100μl BD Perm/Washbuffer重悬。加入anti-ki67-PE及IgG1-PE同型对照,室温避光30min。2ml BDPerm/Wash buffer洗涤后弃上清,300μl PBS重悬,FACSAria流式细胞仪Diva软件进行分析。以FSC、SSC、CD4-APC-Cy7、CD8-PerCP、CD45RA-PE-cy7、CCR7-PE-Cy7定义na(?)ve、memory CD4+、CD8+T细胞,计算这些细胞群内ki67表达百分比。 7、统计学分析: 用SPSS13.0软件包对资料进行统计学分析,全部数据用均数±标准差表示。各组间实验指标的比较采用方差分析,各指标间的相关关系采用Spearman秩相关检验,P0.05为有统计学意义。 结果 1、Na(?)ve、memory CD8+T细胞数量变化及与疾病进展的关系: 通过单细胞水平检测外周血na(?)ve、memory CD8+T细胞水平发现,HIV/AIDS患者与健康对照相比,na(?)ve CD8+T细胞百分比和绝对值均显著减少,memoryCD8+T细胞百分比和绝对值均显著升高(P0.05)。在memory CD8+T细胞各亚群中,T_(EM)-1百分比显著升高(P0.05),T_(CM)、T_(EM)-2百分比和绝对值无显著变化(P0.05)。 LTNP组、HIV组及AIDS组中na(?)ve CD8+T细胞百分比和绝对值均依次下降,AIDS组、HIV组显著低于LTNP组(P0.05),memory CD8+T细胞百分比无显著变化,但绝对值依次下降,各组间的下降均有显著性差异(P0.05)。在memoryCD8+T细胞各亚群中,LTNP组、HIV组及AIDS组TEM-1百分比依次升高,AIDS组显著高于LTNP组(P0.05);T_(EM)-2百分比及绝对值依次下降,AIDS组显著低于LTNP组(P0.05)。LTNP组na(?)ve CD8+T细胞百分比和绝对值与对照组并无显著差异(P0.05),但T_(EM)-2及总的memory CD8+T细胞绝对值显著升高(P0.05)。 通过相关性分析发现,Na(?)ve CD8+T细胞与CD4+T细胞显著正相关(P0.01),与HIV病毒载量显著负相关(P0.01);T_(CM)、T_(EM)-2型CD8+T细胞与CD4+T细胞显著正相关(P0.01),但与HIV病毒载量无关(P0.05);T_(EM)-1型CD8+T细胞与CD4+T细胞及病毒载量均无关(P0.05)。 2、HAART治疗对na(?)ve、memory CD8+T淋巴细胞亚群的影响: HAART治疗后,HIV/AIDS患者na(?)ve、T_(EM)-2型CD8+T细胞百分比和绝对值均显著升高(P0.01),T_(EM)-1型CD8+T细胞百分比显著降低(P0.01)。 3、Na(?)ve、memory CD8+T细胞表面趋化因子受体CCR5、CXCR4表达水平及与疾病进展、T细胞亚群数量的相关性: 中国HIV/AIDS患者与健康对照相比,na(?)ve CD8+T细胞表面CCR5表达显著升高(P0.01),CXCR4表达显著下降(P0.01),memory CD8+T细胞表面CCR5、CXCR4表达均无显著变化(P0.05)。 在LTNP组、HIV组及AIDS组中,na(?)ve、T_(CM)、T_(EM)-1及T_(EM)-2型CD8+T细胞表面CCR5表达均依次升高,HIV组和AIDS组显著高于LTNP组(P0.01);na(?)ve CD8+T细胞表面CXCR4表达依次下降,而memory CD8+T细胞各亚群上CXCR4表达却有升高趋势,其中AIDS组T_(CM)、T_(EM)-1型CDS+T细胞上CXCR4表达显著高于LTNP组(P0.05),T_(CM)型CD8+T细胞上显著高于HIV组(P0.05)。LTNP组与健康对照组相比,T_(CM)、T_(EM)-1型CD8+T细胞上CCR5表达显著下降(P0.05)。 相关性分析发现,(1)na(?)ve、T_(CM)及T_(EM)-2型CD8+T细胞表面CCR5表达与CD4+T细胞显著负相关(P0.05),T_(CM)型CD8+细胞表面CCR5表达与HIV病毒载量显著正相关(P0.05);T_(EM)-1型CD8+T细胞表面CXCR4表达与CD4+T细胞显著正相关(P0.05),与HIV病毒载量显著负相关(P0.05)。(2)Na(?)ve CD8+T细胞数量与其表面CCR5表达的百分率显著负相关(P0.01),T_(EM)-2型CDS+T细胞数量与其表面CCR5、CXCR4表达的百分率显著负相关(P0.05)。 4、中国HIV/AIDS患者CD4+、CD8+T淋巴细胞及其亚群增殖、活化及与疾病进展的相关性 LTNP组、HIV组及AIDS组中,na(?)ve、memory CD4+、CDS+T细胞亚群内ki67表达均依次升高,AIDS组na(?)ve、T_(CM)、T_(EM)-1型CD4+、CD8+T细胞及T_(EM)-2型CD4+T细胞内ki67表达均显著高于LTNP组(P0.01);LTNP组与对照组无显著差异(P0.05)。从亚群分布看,na(?)ve T细胞ki67表达率约增加2-4倍,memoryT细胞约增加3-5倍。 LTNP组、HIV组及AIDS组中,T_(CM)、T_(EM)-1型CD4+T细胞和各CD8+T细胞亚群上CD38表达均依次升高,在AIDS组显著高于LTNP组(P0.05);但na(?)ve及T_(EM)-2型CD4+T细胞上CD38表达并无明显变化(P0.05)。 相关性分析发现,CD4+、CD8+T细胞内ki67表达与CD4+T细胞显著负相关(P0.01),与HIV病毒载量显著正相关(P0.01),与CD4+、CD8+T细胞表面CD38水平显著正相关(P0.05)。CD4+T细胞与CD8+T细胞之间ki67表达显著正相关(P0.01)。 结论 1.中国HIV/AIDS患者na(?)ve CD8+T细胞显著减少,memory CD8+T细胞显著增加,以T_(EM)-1表型为主,T_(EM)-2表型随疾病进展进行性减少。na(?)ve、memoryCD8+T细胞数量与中国HIV/AIDS患者疾病进展显著相关。 2.中国LTNP者T_(EM)-2型CD8+T细胞显著高于AIDS患者,而且显著高于健康对照,提示T_(EM)-2型CD8+T细胞对HIV感染后疾病延缓进展具有保护作用。 3.HAART治疗使na(?)ve、T_(CM)、T_(EM)-2型CD8+T细胞显著增加,T_(EM)-1型CD8+T细胞显著减少,提示HAART治疗促进AIDS患者的免疫重建。 4.中国HIV/AIDS患者na(?)ve、T_(EM)-2型CD8+T细胞上CCR5表达的显著增加与疾病进展中相应na(?)ve、T_(EM)-2型CD8+T细胞数量的显著下降密切相关,提示CD8+T细胞亚群表面高水平CCR5表达可导致其数量下降。 5.中国LTNP者CD8+T细胞各亚群表面CCR5表达明显低于HIV感染者和AIDS患者,甚至低于正常人;CXCR4表达亦较正常人有下降趋势,提示趋化因子受体表达的下降有助于维持疾病长期不进展状态。 6.中国HIV/AIDS患者T淋巴细胞增殖速度明显加快,且与疾病进展、细胞活化水平密切相关。HIV感染对na(?)ve和memory T细胞增殖的影响程度相似。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R512.91

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 张子宁,尚红,叶晓卉,刘瑛,刁莹莹,王亚男,韩晓旭,姜拥军;HIV/AIDS患者CCR5、CXCR4的表达与疾病进展的关系[J];中华微生物学和免疫学杂志;2003年11期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 饶和平;吴南屏;冯磊;Armin Bader;;HIV感染者第二受体CCR5和CXCR4表达与机会性感染的相关性[J];解放军预防医学杂志;2009年04期
2 赵伟,吴引伟,刘伟,姚文虎,赵红;AIDS患者外周血淋巴细胞表面CCR5、CXCR4表达情况分析[J];中华男科学杂志;2005年08期
3 叶景荣;辛若雷;卢红艳;白立石;曾毅;;北京市50例HIV/AIDS病人CCR5 CXCR4 HLA-DR和CD38表达与疾病进展关系[J];中国艾滋病性病;2011年03期
4 张子宁;尚红;姜拥军;王亚男;张旻;韩晓旭;施万英;李革飞;金鑫;;中国经采供血HIV感染长期不进展者CD4~+T淋巴细胞趋化因子受体表达研究[J];中国免疫学杂志;2010年05期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 卫艳萍;建立作用于CCR5启动子的药物筛选方法及初步应用[D];郑州大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 张子宁,尚红,姜拥军,张远志,王亚男,周立平,叶晓卉;HIV-1感染者淋巴细胞活化与第二受体表达的研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2002年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵宏儒;路新利;赵翠英;李保军;李巧敏;陈志强;刘丽花;白广义;;河北省抗HIV治疗失败者体内CD4细胞数和HIV载量分析[J];河北医药;2009年22期
2 施万英;张子宁;张旻;刘静;孙国权;王亚男;韩晓旭;姜拥军;尚红;;外周血纯真、记忆性CD8~+T细胞数量与中国HIV/AIDS患者疾病进程的相关性研究[J];中国免疫学杂志;2010年07期
3 刘真;洪坤学;高占;贾明明;胡新韬;赵全壁;阮玉华;邵一鸣;;HIV-1感染者外周血Ⅰ型干扰素产生细胞水平变化的研究[J];中华实验和临床感染病杂志(电子版);2011年02期
4 洪坤学;唐海丽;冯毅;张瑞军;陈健平;阮玉华;邢辉;邵一鸣;;我国HIV感染者HAART治疗后IPC水平变化的研究[J];中国艾滋病性病;2006年03期
5 任清波;郑卉;王斌;闫志勇;;HIV病毒载量与CD细胞亚群的关系[J];职业与健康;2007年23期
6 李信业;朱永宝;;HIV和HCV双重感染者细胞免疫功能的研究[J];医学检验与临床;2007年03期
7 宋培新;韩亚萍;孔练花;刘源;李军;;慢性丙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群与病毒载量的相关性分析[J];放射免疫学杂志;2007年05期
8 高永军;;中药复方抗艾滋病的研究现状与展望[J];职业与健康;2009年24期
9 王琪;尚红;王亚男;张子宁;姜拥军;;人类免疫缺陷病毒1 Gag-特异性T淋巴细胞增殖反应特征的研究[J];中华医学杂志;2006年44期
10 代娣;尚红;姜拥军;张子宁;韩晓旭;耿文清;刁莹莹;王亚男;刘静;张旻;;我国HIV/AIDS患者外周血CD4~+ T淋巴细胞凋亡与疾病进展的相关性分析[J];中国免疫学杂志;2006年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 靳昌忠;姚航平;冯婷婷;吴南屏;;HIV-1感染者/AIDS患者免疫活化标记的长期随访研究[A];2008年浙江省感染病、肝病学术年会论文汇编[C];2008年
2 庄严;翟嵩;李新红;康文臻;孙永涛;;高效抗逆转录病毒治疗对慢性HIV-1感染者病毒载量、CD4+T细胞计数及特异性CD8+T细胞应答的影响[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
3 许利军;吴南屏;董明清;陈亮;范薇薇;姚航平;靳昌忠;;CD4+CD25+调节性T细胞和CD38的表达在HIV感染者中的关系[A];传染病诊治高峰论坛暨2007年浙江省感染病学、肝病学学术年会论文汇编[C];2007年
4 许利军;吴南屏;陈亮;范薇薇;;CD4~+CD25~+调节性T细胞和CD38的表达在HIV感染者中的关系[A];2006年浙江省感染病、肝病学术会议论文汇编[C];2006年
5 孙健;吴南屏;;CD127和HIV-1感染的免疫关系[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年
6 靳昌忠;冯磊;李杰;姚航平;冯婷婷;吴南屏;;长期HAART对AIDS患者CD8+T细胞活化分子CD38和HLA-DR水平的影响[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年
7 孙健;吴南屏;Armin Barder;H.Stefan;N.Brockmeyer;;长期HAART治疗对HIV感染者体内免疫激活和免疫细胞的影响[A];第二届传染病诊治高峰论坛暨2009年浙江省感染病、肝病学术年会论文汇编[C];2009年
8 靳昌忠;冯磊;李杰;姚航平;冯婷婷;吴南屏;;长期HAART对AIDS患者CD8+T细胞活化分子CD38和HLA-DR水平的影响[A];中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2009年
9 连莉;徐建华;;类风湿关节炎患者外周血中T辅助细胞亚群失衡的研究[A];第十届全国风湿病学学术会议论文集[C];2005年
10 张忠东;吕铁锋;;74例经拉米夫定治疗的乙型肝炎病毒感染者耐药检测分析[A];2008年浙江省感染病、肝病学术年会论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张宏梁 肖宏;抗HIV化学药物研发推陈出新[N];中国医药报;2006年
2 本报记者 梁明;全市发现艾滋病感染者839例[N];绵阳日报;2010年
3 本报记者 王邻;遏制艾滋 履行承诺[N];贵州日报;2009年
4 牛玉亮;过时规定正成为艾滋感染者就业障碍[N];法制日报;2010年
5 记者 蒋炜宁 通讯员 陶子 陈琼;宁波艾滋病感染者921例[N];宁波日报;2010年
6 本报记者 刘景峰;社区防艾 英乌模式[N];医药经济报;2009年
7 记者 宜秀萍;甘肃省女性艾滋病感染者逐年增多[N];甘肃日报;2006年
8 陈飞 钱峰;我国累计报告艾滋病感染18万多例[N];健康报;2006年
9 ;改变命运从我开始[N];中国妇女报;2005年
10 罗刚;“我就在你身旁”[N];健康报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 施万英;中国HIV/AIDS患者na(?)ve、memory CD8+T细胞亚群数量及功能与疾病进展的相关性研究[D];中国医科大学;2007年
2 张子宁;CD4+CD25+调节性T细胞在中国HIV感染者疾病进展中的作用及机制研究[D];中国医科大学;2007年
3 宋扬;HIV-1感染者CD8+T细胞中Toll样受体的表达及免疫功能研究[D];第四军医大学;2008年
4 赵敏;中国HIV/AIDS患者外周血单个核细胞APOBEC3G表达水平及病毒Vif变异与疾病进展的相关性研究[D];中国医科大学;2008年
5 张政;SARS病人和HIV感染者/AIDS病人临床免疫学和病毒学特征的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
6 王月云;HIV-1高暴露持续血清阴性人群分子流行病学研究[D];华中科技大学;2009年
7 徐向升;共抑制分子BTLA在HIV慢性感染中的特点及与疾病进展的关系研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年
8 李珍;HIV感染者外周血γδT细胞表型及功能分析及HIV相关γδT细胞特异性MicroRNAs的筛选[D];北京协和医学院;2012年
9 刘彦春;HIV/AIDS患者的临床流行病学特征、皮肤表现特点及与免疫状态和病毒载量的相关性研究[D];北京大学;2008年
10 周华英;高效抗反转录病毒治疗6年的临床疗效、安全性和基因耐药的观察[D];中南大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙国全;中国HIV/AIDS患者B7-H1的表达特点及与疾病进展关系的研究[D];中国医科大学;2009年
2 金鑫;中国HIV-1感染者NKT细胞与疾病进展的相关性研究[D];中国医科大学;2008年
3 陈欢;HIV感染者自然杀伤细胞抑制受体和活化受体变化研究[D];中国医科大学;2009年
4 李海霞;强直性脊柱炎患者外周血CD8~+CD28~-T细胞的检测及意义[D];青岛大学;2008年
5 童新灯;益气活血法治疗对艾滋病患者免疫重建的影响[D];湖北中医学院;2006年
6 孙蕾;HAART治疗对血液传播HIV-Ⅰ型感染者淋巴细胞亚群及其功能的影响[D];郑州大学;2007年
7 王立志;食道癌患者围手术期CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T细胞亚群定量监测及临床意义[D];中南大学;2009年
8 靳昌忠;中国儿童与成人AIDS患者多种免疫因子的相关分析和比较[D];浙江大学;2007年
9 王前明;慢性HBV感染者TLR2的表达与Th1/Th2细胞亚群变化相关性研究[D];福建医科大学;2008年
10 李瑞淼;SIV血浆病毒载量检测方法的建立及优化[D];广州中医药大学;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026