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《中国医科大学》 2008年
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RNA干扰Livin基因对乳腺癌细胞ZR-75-30凋亡的影响

梁春艳  
【摘要】: 目的 Livin,又称ML—IAP或KIAP是与肿瘤发生发展密切相关的凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoposis proteins,IAPs)中的新成员,能够与内源IAP抑制剂SMAC和caspase-3,caspase-7,caspase-9结合,发挥抗细胞凋亡的作用。它特异性高表达于多种肿瘤组织而使肿瘤组织对放化疗作用变得耐受。有研究表明,Livin基因在人乳腺癌组织中高表达,而在乳腺癌癌旁组织中低表达或不表达。本研究旨在采用RNA干扰技术阻断Livin基因的表达,观察其对人乳腺癌细胞ZR-75-30凋亡的影响。 方法 1、体外化学合成Livin序列特异性双链RNA(siRNA),在脂质体(lipofectamine~(TM)2000)的介导下转染人乳腺癌细胞ZR-75-30。 2、荧光共聚焦显微镜下观察转染效率,进行siRNA转染细胞条件筛选及效率的评价。 3、靶向Livin的siRNA转染乳腺癌细胞ZR-75-30 24h后,RT-PCR检测Livin mRNA的表达。 4、用Western blot法和免疫组化法检测转染后ZR-75-30细胞中Livin蛋白的表达。 5、流式细胞术检测转染Livin-siRNA转染后乳腺癌细胞ZR-75-30的凋亡率。 结果 1、用荧光FAM标记的阴性对照siRNA转染人乳腺癌细胞ZR-75-30,在细胞密度为4.0×10~5/孔,siRNA为250pmol/孔时,有较佳的转染效率(80%左右)。 2、靶向Livin的siRNA转染乳腺癌细胞ZR-75-30 24h后,Livin在mRNA水平的表达被显著抑制(P<0.01),其抑制率达53.66%。 3、靶向Livin的siRNA转染乳腺癌细胞ZR-75-30 24h后,Western blot结果显示,在蛋白质水平其表达抑制率为58.32%;免疫组化结果显示,转染Livin-siRNA 24h后的Livin蛋白表达明显下调。 4、流式细胞术检测转染Livin-siRNA 24h后的乳腺癌细胞ZR-75-30的凋亡率为(8.33±0.20)%,与阴性对照组的凋亡率(2.60±0.15)%相比,有显著性差异(P<0.01)。 结论 Livin-siRNA能有效抑制Livin基因在乳腺癌ZR-75-30细胞中的过表达,显著诱导乳腺癌细胞ZR-75-30凋亡。靶向Livin的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有潜在的价值。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R737.9

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【参考文献】
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