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《中国医科大学》 2008年
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人卵巢癌细胞系OVCAR3的肿瘤干细胞的分离培养和鉴定

尹航  
【摘要】: 目的 肿瘤干细胞是存在于肿瘤中的一小部分细胞,具有无限增殖和自我更新的能力,有研究表明,很多肿瘤组织中存在具有干细胞特性的少量的细胞群,是肿瘤发生、复发和转移的原因。但对于卵巢癌的肿瘤干细胞的研究报道甚少。本研究通过无血清悬浮培养人卵巢癌细胞系OVCAR3,获得具有非锚着依赖能力的肿瘤干细胞球,观察其生物学特性及形态学的变化,并采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)及细胞免疫化学的方法鉴定肿瘤干细胞标志ABCG2在贴壁细胞及肿瘤干细胞球中的表达差异。 方法 用无血清悬浮培养的方法分离培养肿瘤干细胞,并且在缺乏B27(无血清添加剂)、未使用超低吸附的培养皿及用甲基纤维素悬浮培养等不同的培养条件下观察细胞的形态及生长情况。通过卵巢癌细胞系OVCAR3的单细胞培养、肿瘤干细胞球形成分析及连续传代的方法鉴定肿瘤干细胞的特性,用RT-PCR及细胞免疫化学的方法鉴定肿瘤干细胞标志ABCG2的mRNA和蛋白表达情况。统计学方法:应用SPSS13.0软件进行分析,细胞免疫化学的结果应用t检验进行分析,所得数据以(?)±s表示,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 在卵巢癌细胞系OVCAR3中只有少数细胞(0.9%)能在无血清悬浮培养的条件下存活,形成具有非锚着依赖生长的肿瘤干细胞球,并保持连续增殖分裂的能力。通过不同的培养方法证实,B27和超低吸附的培养皿对于得到肿瘤干细胞球是非常重要的条件,而在甲基纤维素中培养获得的细胞团能悬浮生长,但小而不规则。单细胞培养实验证实肿瘤干细胞球是由单细胞增殖而来,而不是细胞聚集;肿瘤干细胞球中只有少数细胞具有再形成细胞球的能力,其比例随传代次数增多而增多;细胞球来源的细胞具有自我更新的能力,并能连续增殖。肿瘤干细胞球的干细胞标志ABCG2mRNA及蛋白的表达高于在有血清的培养条件下贴壁生长的细胞。 结论 在卵巢癌细胞系OVCAR3中存在一小群具有自我更新和连续增殖能力的细胞,其能在无血清的条件下形成细胞球、悬浮生长并连续传代,高表达干细胞标志ABCG2,本实验支持肿瘤干细胞理论,即肿瘤中可能存在肿瘤干细胞,肿瘤干细胞是肿瘤形成、复发和转移的根源。
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