收藏本站
《中国医科大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

白血病免疫分型细胞芯片捕获细胞的免疫细胞化学研究

胥威  
【摘要】: 目的 生物芯片诞生于上世纪90年代初,是近年来高新技术领域中极具时代特征的重大进展,是物理学、微电子学与分子生物学综合交叉形成的高新技术。被广泛应用于疾病诊断等多方面。目前,白血病的免疫分型诊断主要依靠用已知的单克隆抗体(McAb)去鉴定白血病细胞表面或胞浆抗原-CD抗原(cluster ofdifferentiation),根据不同抗原在不同阶段的出现与消失,决定白细胞所属的系列及分化阶段,做出免疫学诊断。 本实验室构建的白血病免疫学分型细胞芯片就是利用抗原、抗体特异性结合的原理,将白细胞表面分化抗原单克隆抗体固定于载体上,形成抗体点阵。不同的单克隆抗体能够自动识别和捕获表达相应表面分化抗原的细胞,从而对白血病进行免疫学分型。这种对白血病进行免疫学分型的方法较免疫细胞化学和流式细胞仪检测法具有高通量、使用简便、样品用量少、检测速度快、灵敏度高、经济实用等优点。 但是,白血病免疫分型细胞芯片作为一种新型的方法,需要传统公认的免疫细胞化学技术和流式细胞术的验证。另外,白血病免疫分型的检测,需要细胞表面抗原和胞浆抗原的检测,尤其是在双表型检测及特殊表型的检测时,胞内抗原的检测更是十分重要的。澳大利亚悉尼大学医学研究所的Larssa Belov等所研制的白血病免疫分型抗体微阵列,仅能检测细胞表面分化抗原,而我们实验室所研制的芯片以具有透明性的玻璃为载体,在表达相应CD抗原的白细胞与芯片上的抗体结合后,在其上用免疫细胞化学,来检测胞浆内的分化抗原,将结果直观、稳定的表现出来,为临床诊断提供更快速、简便、完善、准确的白血病免疫分型诊断方法。 方法 1、确定芯片上捕获细胞的最佳固定方法 制备细胞芯片,室温条件下,分别用下列固定剂固定(1)甲醇:丙酮(1:1v/v)90秒;(2)95%乙醇3分钟;(3)95%乙醇:冰醋酸(AA液95:5v/v)3分钟;(4)AF液(95%乙醇:甲醛:水=68.4:10:21.6v/v)1分钟。除AF液固定后用蒸馏水洗2遍外,其余固定剂固定后芯片自然风干。免疫细胞化学后显微镜下观察点阵捕获的细胞形态、抗原的表现情况、细胞核复染着色情况及计数固定前后细胞数量。 2、确定细胞芯片上的免疫细胞化学所用单克隆抗体的最佳浓度 在相同条件下,细胞芯片上细胞用最佳固定方法固定,进行酶标免疫细胞化学,第一抗体抗CD7、抗CD13、抗CD19、抗MPO浓度分别为4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml、0.25μg/ml,阴性对照滴加等量PBS,室温下孵育1小时;DAB显色,显微镜下观察结果。 3、用免疫细胞化学法染色细胞芯片捕获细胞的胞膜及胞浆抗原 细胞芯片,用最佳方法固定,按1μg/ml最佳浓度稀释免疫细胞化学第一抗体羊抗人抗CD7、抗CD13、抗CD19、抗MPO,阴性对照用PBS缓冲液代替第一抗体,免疫细胞化学染色后,显微镜下观察结果。 4、检测细胞芯片捕获细胞的特异性 细胞芯片,用最佳方法固定,按1μg/ml最佳浓度稀释免疫细胞化学第一抗体抗CD7、抗CD13、抗CD19,阴性对照用PBS缓冲液代替第一抗体,进行免疫细胞化学操作后,显微镜下每种抗体点上取三个高倍镜视野,计数细胞总数和有棕色颗粒的阳性细胞数,计算阳性率。 5、应用细胞芯片进行白血病免疫分型并用免疫细胞化学法验证特异性 制备应用于白血病免疫分型的细胞芯片,从白血病患者的外周血中提取白细胞,吖叮橙染色,孵育芯片,PBS清洗,扫描,检测信号,得到白血病免疫分型结果。再用免疫细胞化学验证。 结果 1、细胞芯片捕获细胞的固定方法以AF液(95%乙醇:甲醛:水=68.4:10:21.6v/v)1分钟最佳 2、细胞芯片上的免疫细胞化学所用单克隆抗体的浓度以1μ/ml室温下孵育1小时最佳。 3、细胞芯片上免疫细胞化学第一抗体为抗CD7、抗CD13、抗CD19时,棕色颗粒在细胞膜上;第一抗体为抗MPO时棕色颗粒在胞浆中。 4、细胞芯片的特异性捕获阳性率在96.7±0.4%以上,非特异性捕获阳性率在0.8±0.3%以下,具有明显的特异性。 5、白血病细胞芯片的特异性捕获阳性率在97.4±0.2%以上,具有明显的特异性。 结论 1、白血病免疫分型芯片捕获细胞的固定用AF液(95%乙醇:甲醛:水=68.4:10:21.6v/v)室温下固定1分钟最佳。 2、免疫细胞化学第一抗体以1μg/ml室温下孵育1小时为最佳。 3、芯片捕获细胞用免疫细胞化学法将胞浆、胞膜抗原染色出来。 4、用免疫细胞化学法验证细胞芯片捕获细胞具有高度特异性。 5、用白血病免疫分型细胞芯片对30例白血病患者外周血进行免疫学分型,同时进行免疫细胞化学分析,诊断结果准确、可靠。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R733.7

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 肖坚;;联合检测Epithelial Antigen、E-cadherin、CEA、TTF-1、CK5/6和Calretinin对胸腔积液中腺癌和间皮细胞的鉴别诊断价值[J];实用医院临床杂志;2011年04期
2 宋荣华;许文灿;傅玉才;;白细胞SIRT1、SIRT4与2型糖尿病的相关性[J];广东医学;2011年09期
3 倪明;芮云峰;陈启明;王岩;李刚;;生长分化因子7体外促进BMSCs向肌腱细胞分化的研究[J];中国修复重建外科杂志;2011年09期
4 吴珊珊;郭珺;张丽红;邱心如;王医术;严铭铭;;小飞蓬活性成分对乳腺癌MCF-7细胞的作用[J];中国实验诊断学;2011年07期
5 杨洁;吴琪;张鸿雁;卢静;霍兴华;李振华;;毛囊神经嵴干细胞的培养、鉴定及其向雪旺细胞诱导分化的实验研究[J];齐齐哈尔医学院学报;2011年08期
6 董丽华;傅士龙;韩素萍;;人上皮性卵巢癌组织中肿瘤相关成纤维细胞的培养[J];南京医科大学学报(自然科学版);2011年07期
7 刘书哲;檀艳丽;高伟敏;薛娟;刘嘉琳;;金雀异黄素对U251MG的抑制作用及对癌基因表达的影响[J];现代预防医学;2011年13期
8 杨波;王志娣;蒋云生;段绍斌;费良玉;颜天铭;;普罗布考对1-甲脲乙醇酸酐诱导HK-2细胞表达纤维化相关因子的影响[J];中南医学科学杂志;2011年04期
9 张丽丽;郭晓红;刘立新;张骞骞;;IGFBPrP1 siRNA诱导的大鼠肝星状细胞凋亡及其机制[J];临床肝胆病杂志;2011年09期
10 王正彩;翟丽丽;杨迷玲;韩伟;王瑞芬;单丽辉;齐蕾;柴翠翠;刘明;王立峰;;人胃癌肿瘤相关成纤维细胞的原代培养和鉴定[J];临床与实验病理学杂志;2011年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 傅云峰;叶枫;陈怀增;吕卫国;谢幸;叶大风;;Pgp和β微管亚型在卵巢癌紫杉醇耐药细胞系中的表达[A];中华医学会第九次全国妇科肿瘤学术会议论文汇编[C];2006年
2 王春婷;杨浩;鞠躬;;嗅神经鞘细胞对神经突起体外生长的作用[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年
3 杨彤涛;张勇;李存孝;黄立军;周勇;范清宇;马保安;;反义RNA抑制Survivin在人骨肉瘤细胞系MG63中表达的实验研究[A];全国骨科临床研究新进展研讨会暨学习班论文集[C];2006年
4 陈义;;细胞芯片分析概念与技术发展[A];第二届全国微全分析系统学术会议论文摘要集[C];2004年
5 何俊瑛;陈倩;刘科;王丽靖;杨小彬;;脑脊液细胞学检查联合免疫细胞化学染色在脑膜癌病早期诊断中的应用[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
6 黄强;王金鹏;朱玉德;张全斌;董军;王爱东;兰青;;从人脑胶质瘤组织中克隆肿瘤干细胞和长期培养的初步研究[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年
7 邵宇权;胡兴越;朱涛;夏萍;;脑脊液单核细胞内结核抗原免疫组化染色对结脑诊断的意义[A];2008年浙江省神经病学学术年会论文汇编[C];2008年
8 刘荷中;陈坤;张贺秋;修冰冰;宋晓国;王国华;闫瑾琦;凌世淦;;不同固定剂对膜表面表达HCV E2蛋白免疫细胞化学染色结果的影响[A];中国动物学会全国显微与亚显微形态科学(细胞及分子显微技术科学)分会第十一次学术研讨会论文摘要集[C];2002年
9 何文艳;刘静;刘树贤;;肝纤维化大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导类肝细胞的实验研究[A];第一届全国疑难重型肝病大会、第四届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2008年
10 余璐;刘彦仿;杨守京;;汉坦病毒体外诱导HSP70的表达规律及意义[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前7条
1 记者吴仲国;动物将退出实验室[N];科技日报;2002年
2 张小明;纳米技术医疗领域显神威[N];中国电子报;2000年
3 张亮;超级“细胞”芯片进入实体设计[N];科技日报;2002年
4 ;丁丁带你买配件[N];中国电脑教育报;2005年
5 向杰;方寸芯何以跨海越洋[N];科技日报;2005年
6 ;面向未来推动我国生物芯片技术的发展[N];中国医药报;2002年
7 记者 张建松;上海生物技术产业强势组合[N];新华每日电讯;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴广平;胸水肿瘤标记物检测及LCT痰检在肺癌诊断中的意义[D];中国医科大学;2005年
2 王晓雷;E1A基因对头颈淋巴结转移性鳞癌的生长抑制和化、放疗增敏作用[D];中国协和医科大学;2001年
3 邓昊;STAT1和Survivin及相关蛋白在胃癌中相关性的研究及其临床意义[D];华中科技大学;2006年
4 孙平;靶向VEGF-C的siRNA表达载体对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡及化疗敏感性的影响[D];山东大学;2008年
5 张大昕;E1A基因对肿瘤放射敏感性的影响及机理探讨[D];中国协和医科大学;2000年
6 章涛;hPPARs系列载体构建及其高效转染表达体系的建立[D];重庆医科大学;2007年
7 邓昊;STAT1和Survivin及相关蛋白在胃癌中相关性及其临床病理学意义的研究[D];华中科技大学;2006年
8 徐顺贵;全氟化碳吸入对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究[D];第三军医大学;2007年
9 王彪;RNAi技术沉默Ang2、Tie2基因抑制血管生成的体外实验研究[D];昆明医学院;2008年
10 陈俊;新生大鼠耳蜗前体细胞分化的分子机制及微环境的初步研究[D];第四军医大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胥威;白血病免疫分型细胞芯片捕获细胞的免疫细胞化学研究[D];中国医科大学;2008年
2 孙莉莉;应用于白血病免疫分型芯片的外周血白细胞分离方法的研究[D];中国医科大学;2007年
3 秦海明;新型细胞芯片的构建及初步应用[D];中国医科大学;2003年
4 李冬梅;用细胞芯片的方法对急性白血病进行免疫分型[D];中国医科大学;2005年
5 张健;大鼠脊髓神经干细胞的分离、培养和鉴定[D];新疆医科大学;2008年
6 王金鹏;人脑胶质瘤干细胞初步研究[D];苏州大学;2005年
7 杨华;白血病免疫分型细胞芯片研究[D];中国医科大学;2006年
8 李燕;味觉细胞芯片及其在味觉传导机理中的研究[D];浙江大学;2006年
9 孙翠云;应用组织芯片技术研究肺癌中Ets1 mRNA表达的生物学意义和相关分子机制[D];天津医科大学;2006年
10 孔征;多通道细胞芯片传感接口及其采集系统的设计[D];浙江大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026