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《中国医科大学》 2008年
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不同妊娠时期人类胎盘EPO和EPO-R在胎盘绒毛中表达的研究

张燕  
【摘要】: 目的 促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)作为一种促进红系祖细胞增殖和分化的造血生长因子,对于成人有刺激骨髓造血的作用,在胎胚发育期对于维持胚胎的发育、促进脑、心脏和血管的形成和提高胎儿对缺氧的耐受性都具有重要的生理作用。在成人EPO的产生器官主要是肾脏。很多研究表明,人类和大鼠在妊娠期母体血浆中EPO浓度明显高于非妊娠期,其EPO的来源一部分可能来自于肾脏产生增加,而胎盘组织亦可能是EPO的重要来源之一。 胎儿循环中的EPO的来源及其在胎儿生长发育中的作用仍不明确。人和羊血浆中的EPO是不能通过胎盘屏障由母体进入胎儿体内或者经胎儿入母体的。有研究认为在胎儿发育过程中最初胎儿肝脏是EPO产生的主要器官,到妊娠30周后EPO的生成逐渐由胎儿肝脏转向肾脏。然而在人类肾脏缺如的胎儿和将动物两侧肾脏切除的胎儿,其出生时血浆EPO浓度及红细胞压积是正常的,此现象说明胎儿体内除肝肾外还有其他的EPO生成位点,近年的研究发现,EPO和EPO-R在胎儿的非造血组织如脑、眼及胎盘均有表达,因此,胎盘组织EPO的产生也有可能与胎儿循环中的EPO有关。 本研究拟进一步探讨EPO和EPOR在胎盘的表达情况及不同孕周的变化趋势。 材料和方法 一、试剂 EPO一抗(P2804Rb)由武汉中美科技有限公司提供、EPOR一抗(SC5624)三塔试剂公司提供,二抗(兔抗人)及免疫组化试剂盒均由博士德试剂公司提供。 二、标本来源 收集2006年6月到2006年12月期间在我院住院的正常妊娠孕妇,孕龄在12周-40周的胎盘共60例,孕龄以末次月经计算,并结合超声检查认真核实。排除多胎妊娠、胎儿宫内生长受限、妊娠期高血压、糖尿病和感染、胎儿畸形、染色体异常、围产期窒息和难产。分为三组:一组(12-28周),二组(29-36周),三组(37-40周),每组各20例。 三、方法 胎盘组织EP0和EPOR的检测用免疫组化S-P法和蛋白免疫印迹法,以三塔公司提供的阳性对照片为阳性对照,以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。 四、结果判定 (一)免疫组化法以滋养细胞胞浆出现棕黄色颗粒,染色明显高于背景为阳性,每张切片放大400倍后选择典型切片进行摄影。 (二)Western-blot法以醋酸纤维素膜上显色蓝紫色带所对应的既是目标蛋白的位置,将胶片进行拍照,扫描,用凝胶图像处理系统分析目标条带,进行统计学处理。 五、统计学处理 所有结果用平均值±标准差((?)±s)表示,利用SPSS13.0统计学处理软件进行t检验、相关分析,P<0.05认为在统计学上有显著差异,有显著差异者再进行多重比较。 结果 1、免疫组化SP法中EPO及EPOR在妊娠一、二、三组胎盘绒毛的合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞、毛细血管内皮细胞的胞浆均成阳性染色,位于绒毛最外层的合体滋养层细胞和内层的细胞滋养层细胞阳性染色最强,血管内皮细胞次之,绒毛间质无阳性染色。且随着妊娠的进展,阳性染色逐渐增强。 2、Western blotting检测EPO及EPOR在妊娠一、二、三组胎盘组织均有免疫反应性,且随着妊娠的进展,免疫反应逐渐增强。定量分析显示在妊娠一组、妊娠二组、妊娠三组各组胎盘绒毛的表达,差异均有统计学意义(P<0.05);EPO及EPOR在胎盘绒毛的表达与妊娠时间成正相关关系。 结论 不同孕龄胎盘均有EPO、EPOR表达,推测胎盘可能是妊娠期EPO生成的新位点;EPO与EPOR二者在胎盘滋养细胞的表达随孕龄增加有增强的趋势,推测与妊娠的维持及胎儿的生长发育有一定关系。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R714

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