收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

丹参酮IIA对小鼠脑血管内皮细胞内皮素系统的影响

唐超  
【摘要】: 目的 脑的微循环障碍,血脑屏障的破坏是脑水肿的重要机制,内皮素(ET)是迄今为止所知的最强的长效缩血管物质,它参与了脑水肿的发生,发展的过程,它促进了血脑屏障的破坏。所以以内皮素为作用靶点,改善脑创伤后脑血流动力学,减少血管痉挛,保护血管调节功能应是临床脑水肿治疗的重要方法之一,中药丹参作为活血化瘀药物已经广为人熟知,它能够保护脑血管内皮细胞,维护血脑屏障,促进微循环,它们已广泛用于临床各种类型脑水肿的治疗,临床上已得到比较确定的疗效,但基础实验有关其疗效及其具体保护血脑屏障机制的研究还较少,本实验观察了在常规甘露醇治疗的基础上结合使用丹参酮IIA对大鼠冷冻所致脑水肿的影响。在此基础上,通过TNF—α诱导小鼠脑血管内皮细胞产生ET-1,通过该模型进而探讨丹参酮IIA对内皮素系统的影响,从而进一步阐明丹参酮IIA作用脑血管的机制。 方法 第一部分:(1)wistar成年大鼠80只,雌雄不限,随机分为4组,A(正常对照组):未冷冻未治疗。给予生理盐水腹腔注射10ml/kg;B:(手术对照组),冷冻后未进行任何治疗:每天予生理盐水腹腔注射10ml/kg;C:(甘露醇治疗组),大鼠尾静脉滴注20%甘露醇10ml/kg;D(甘露醇+丹参酮IIA治疗组),在同C组相同的治疗方案基础上每24小时分给予尾静脉注射丹参酮IIA注射液25mg/kg;(2)脑水肿模型:wistar成年大鼠,用直径圆形铜探针置于硬膜上,液氮冷冻60s,制成脑水肿模型。(3)神经功能评分:所有大鼠治疗24小时,48小时,72小时,一周后行神经功能缺损观察,采用改良的Zea-Longa量表进行评分。(4)光镜及电镜观察:于冷冻灶周边取1mm的脑片,置入固定液中,送透射电子显微镜室观察标本的超微结构。(5)脑含水量测定:每组分别于24小时,48小时,72小时,一周后随机取6只断头处死,开颅取脑,用滤纸轻吸去表面水分,装于精称过的称量瓶中,标记并称湿重,置烘箱105℃烘至恒重,两次称量差不超过0.0006g,干湿法测定组织含水量,按Eiliott公式计算脑含水量。脑含水量(%)=(湿重-干重)/湿重×100%(6)甲酰胺法测定EB含量:采用改进Young氏改良法提取大鼠左右半球干脑组织的伊文氏蓝,然后在分光光度仪上测定含量。右半球伊文氏蓝增量=右半球伊文氏蓝量-左半球伊文氏蓝量。 第二部分:(1)大鼠冷冻后72小时后,眼底取血4ml,肝素钠抗凝,送辽宁省中医学院药理实验室,用FASCOW全自动血液流变检测仪检测。(2)内皮素含量测定:采用放射免方法(RIA),各组分别于24小时,48小时,72小时,一周后,用玻璃毛细管眼底取血,加入10%EDTA二钠30ul和抑肽酶40ul,混匀,采用非平衡法按试剂盒说明书操作计算血浆内皮素含量。 第三部分:(1)细胞毒性测定MTT法测定:各组分别取细胞悬液加入MTT溶液(MTT 5mg/ml)20μl,充分溶解于DMSO,选择490nm波长,在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,取平均值。按以下公式计算细胞存活率:细胞存活率=实验组光吸收OD值/对照组光吸收OD值×100%。(2)培养液ET,大ET测定:放射免疫法测定,收集标本后根据放射免疫试剂盒有关说明进行。(3)根据有关文献设计ET-1,ECE-1,ET_A,ET_B引物,提取细胞RNA,测定提取总RNA的含量及纯度检测,逆转录PCR扩增,PCR产物电泳,对DNA条带进行检测和图像分析。(3)ET结合力测定细胞清洗匀浆处理后,取离心沉淀的细胞膜蛋白,投放~(125)I-ET-1,丹参酮IIA等进行竞争抑制,测定细胞对~(125)I-ET-1结合率,探讨丹参酮IIA是否影响ET-1和受体的结合。 结果 第一部分:(1)各治疗组与模型组对照,神经功能缺陷评分显著降低(P<0.05或P<0.01),神经功能均显著改善。(2)经过甘露醇,丹参酮IIA联合治疗后,血脑屏障的破坏程度减轻,神经元,内皮细胞以及都保持正常结构,紧密连接结构正常。(3)脑组织含水量和EB含量变化:各治疗组术后24小时,48小时,72小时,一周后脑组织水含量均有显著性下降(P<0.01),结合丹参治疗组同C组相比,脑组织含水量均降低,有显著差异(P<0.01或P<0.05)。 第二部分:(1)D组血液粘度高切,低切均明显降低,与模型组有显著差异(P<0.05),D组和C组差异无显著性(P>0.05)。(2)大鼠冻伤后血浆ET含量持续增加,较正常组明显增高,甘露醇治疗组,丹参酮IIA+甘露醇治疗组,均较模型组显著降低,其中丹参酮IIA+甘露醇治疗组降低更为明显,单独的甘露醇治疗对血浆的ET-1没有显著改变。 第三部分(1)丹参酮IIA对细胞存活率的影响:不同浓度的丹参酮IIA对脑血管内皮细胞的存活率没有影响,当丹参酮IIA浓度达到10ug/ml,20ug/ml时,TNF-α(5ug/ml)作用脑血管内皮细胞时细胞存活率相比较,有显著性差异。(2)丹参酮IIA对ET含量的影响:丹参酮IIA呈剂量依赖性降低培养液中ET含量,TNF-α使脑血管内皮细胞大ET含量明显减少,而作用丹参酮IIA后,培养液中大ET含量随着丹参酮IIA浓度的增加而升高。(3)TNF-α使脑血管内皮细胞ECE-1mRNA表达明显升高,10ug/ml.20ug/ml的丹参酮IIA使ECE-1mRNA表达明显降低。TNF-α作用脑血管内皮细胞后,其ETmRNA表达明显升高但是和单独TNF-α作用脑血管内皮细胞后相比,不同浓度丹参酮IIA处理后脑血管内皮细胞的ETmRNA的表达并没有明显变化。TNF-α明显增强脑血管内皮细胞ETAmRNA表达,但是对ETBmRNA表达呈相反的作用,当丹参酮IIA浓度达到10ug/ml,20ug/ml时,ETAmRNA表达明显降低,不同浓度的丹参酮IIA使ETBmRNA表达明显增高。(4)不同浓度丹参酮IIA作用后,脑血管内皮细胞ET和其受体的结合力并没有明显差异,与单独TNF-α(5ug/ml)作用脑血管内皮细胞相比无明显变化。 结论 (1)丹参酮IIA能够降低脑组织含水量,降低血脑屏障通透性,显著改善脑水肿程度。其机制可能在于丹参酮IIA能够显著降低脑水肿后血浆内皮素含量,改善脑血管微循环。 (2)在体外TNF-a诱导的脑血管内皮细胞中,丹参酮IIA可能通过抑制内皮素转换酶的生成降低ET的含量。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 徐强,章曙丹,冯瑛;薄层扫描法测定尿通片中丹参酮ⅡA的含量[J];中药新药与临床药理;2004年06期
2 杜俊蓉;丹参酮ⅡA对培养人血管平滑肌细胞增殖的影响[J];江西中医学院学报;1999年03期
3 钟先阳,罗仁,魏华;丹参酮ⅡA对大鼠出血性休克再灌注肾损伤的保护作用[J];辽宁中医杂志;2002年08期
4 郭增军,苏纪兰,王开,尤晓娟;丹参提取工艺的实验研究[J];西北药学杂志;2002年02期
5 赵钟祥,杨新洲,唐琛霞,阮金兰;HPLC法测定宫廷补酒中丹参酮Ⅱ_A的含量[J];中药材;2003年06期
6 费燕,王亮,黄惠丽;丹参酮ⅡA磺酸钠注射液引起不良反应2例[J];海峡药学;2005年02期
7 杜敏,黄湘;不同提取方法测定丹参药材中丹参酮Ⅱ_A含量的比较研究[J];现代中药研究与实践;2005年03期
8 张玮;刘姣;李清;彭超;尚平;;丹参中丹参酮Ⅱ_A的薄层层析条件改进分析[J];时珍国医国药;2008年10期
9 张丽萍;张晶;;丹参酮ⅡA对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响[J];中国社区医师(医学专业);2010年27期
10 陈培栽,刘薇,杨吉奎;复方通塞片中丹参酮ⅡA的含量测定[J];中医药信息;1995年03期
11 陈理,孙靖霞;高效液相色谱法测定强肝胶囊中丹参酮ⅡA及甘草酸的含量[J];中国新药杂志;2001年06期
12 杨伟峰,陈厚昌,蒋毅萍;丹参酮ⅡA与阿米洛利合用对大鼠肝星状细胞氧应激所致纤维化的抑制作用[J];肝脏;2003年02期
13 龚丽娅,郑智,熊玮,孙联平;丹参酮ⅡA抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞肥大[J];华西药学杂志;2004年01期
14 刘建平,杜志永,朱丽;丹参酮Ⅱ_A固体脂质纳米粒的体外释药和大鼠肠吸收特性的研究[J];中国药理学通报;2005年02期
15 王蓉,陈连璧,曾晓荣;丹参酮ⅡA磺酸钠对家兔缺血预适应心肌的保护作用[J];山东大学学报(医学版);2005年04期
16 徐月红;陈可奇;杨蕾;;丹参酮Ⅱ_A自微乳释药系统的制备和性质研究[J];中草药;2008年05期
17 王新星,游杰美,靳芳,严幼芳;丹参酮ⅡA对低密度脂蛋白引起牛血管内皮细胞损伤的影响[J];中国药理学与毒理学杂志;1993年02期
18 王卫,杨晓东,王殿英;TLC-UV法测定消炎灵中丹参酮ⅡA的含量[J];天津药学;1995年01期
19 肖丹;丹参提取工艺条件的优化实验研究[J];现代中药研究与实践;1998年01期
20 庞志功!药学院,西安710061,汪宝琪!药学院,西安710061,励英倩!药学院,西安710061;对丹参酮ⅡA在方剂中药动学的研究[J];西安医科大学学报(中文版);1999年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 倪朝民;;缺血性脑水肿与脑梗死早期康复[A];第四届全国康复治疗学术大会论文摘要汇编[C];2004年
2 杨翠微;冯建华;高峰;夏哲智;;癫痫持续状态后幼鼠脑AQP4表达的变化及外源性GM1对其的影响[A];2007年浙江省儿科学、小儿外科学学术年会论文汇编[C];2007年
3 肖玲;王莹;;头部伽马刀治疗后脑水肿患者病情观察及护理对策[A];中华护理学会全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2009年
4 张晓娟;万波;陈文颖;罗宇芬;杨敏;;蝙蝠葛酚性碱对脑缺血再灌注大鼠脑水肿及血脑屏障通透性的影响[A];2010年广东省药师周大会论文集[C];2011年
5 刘泰;;对急性脑出血脑水肿期中医病机的探讨[A];第五次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会论文汇编[C];2001年
6 许宏伟;;自发性脑出血后脑水肿的研究进展[A];继往开来 与时俱进——2003年康复医学发展论坛暨庆祝中国康复医学会成立20周年学术大会论文集[C];2003年
7 袁芳;徐立新;张琳;崔云;杨慧;;水通道蛋白4(AQP4)在大鼠局部脑缺血后表达变化的研究[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年
8 彭拥军;周飞;顾靖;杨茹;杨永清;程介士;郭景春;;电针对脑缺血再灌注大鼠脑内水通道蛋白表达的影响[A];第九届全国针刺麻醉针刺镇痛及针刺调整效应学术研讨会论文集[C];2007年
9 张志捷;杨建军;艾青;王春光;徐建国;;不同晶体液对脑损伤兔血清电解质、酸碱平衡和脑水肿的影响[A];2008年第七次华东六省一市麻醉学学术会议暨浙江省麻醉学术年会论文汇编(下册)[C];2008年
10 梁玉敏;高国一;江基尧;;去骨瓣减压术治疗重型颅脑外伤的研究进展[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 唐超;丹参酮IIA对小鼠脑血管内皮细胞内皮素系统的影响[D];中国医科大学;2008年
2 刘劲芳;脑挫裂伤时伤灶中的凝血酶对脑水肿的影响及凝血酶预处理的实验研究[D];中南大学;2003年
3 孟繁峥;大鼠局灶性脑缺血的水通道蛋白表达变化及葛根素药物干预的实验研究[D];吉林大学;2003年
4 许宏伟;MMP-2/9在脑出血后脑水肿发生中的作用及七叶皂苷钠影响的实验研究[D];中南大学;2003年
5 石向群;水通道蛋白4在缺血性脑水肿中的作用机制研究[D];苏州大学;2003年
6 孟令秋;实验性脑出血后脑水肿机制的探讨[D];吉林大学;2005年
7 江汉秋;凝血酶致大鼠脑出血后脑水肿及脑内MMP-9、MMP-2表达的实验研究[D];吉林大学;2006年
8 宫晔;脑出血脑水肿机制的实验研究:凝血酶、血红素加氧酶、老年因素的影响[D];复旦大学;2005年
9 王军;脑水肿时间藤细胞的形态学改变[D];中国医科大学;2003年
10 史保中;红细胞在创伤性脑内出血后脑水肿中作用的实验研究[D];中南大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王玉勤;缓激肽对大鼠缺血区血脑屏障的影响[D];中国医科大学;2005年
2 金春姬;微创血肿清除术治疗高血压性脑出血的临床研究[D];延边大学;2005年
3 郭晓明;局部缓释地塞米松治疗创伤性脑水肿的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
4 李慧;溶解红细胞对脑出血后脑水肿的影响[D];郑州大学;2003年
5 兰希发;大鼠脑缺血再灌注后脑水肿与水孔蛋白4表达关系的研究[D];中国医科大学;2004年
6 刘卫东;水通道蛋白4在大鼠蛛网膜下腔出血后脑水肿中的表达研究[D];青岛大学;2005年
7 徐文虎;水通道蛋白-4表达与蛛网膜下腔出血后脑水肿的关系[D];青岛大学;2006年
8 张倩;脑肿消对缺血性中风急性期脑水肿的实验研究[D];新疆医科大学;2006年
9 许鑫;脑出血后血浆凝血酶及MMP-9的动态变化及相关性[D];吉林大学;2009年
10 林坚;眼镜蛇毒因子(CVF)对兔出血性脑水肿影响的实验研究[D];浙江大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李乐;流行性乙型脑炎的诊治[N];农村医药报(汉);2007年
2 谢明霞;湘雅医院提出脑水肿平衡治疗原则[N];中国医药报;2009年
3 谢明霞;脑水肿平衡治疗原则[N];大众卫生报;2009年
4 杨骏;法科学家发现脑水肿是脑疟患者死亡的主因[N];中国劳动保障报;2005年
5 于文;探索HBOP降低脑出血后脑水肿机理[N];科技日报;2007年
6 北京大学人民医院急诊科 吴春波 余剑波;少儿糖尿病酮症酸中毒警惕脑水肿[N];医药经济报;2011年
7 戴永强;急性CO中毒的诊治[N];农村医药报(汉);2006年
8 张海强;过度保暖致“蒙被综合征”[N];健康报;2007年
9 匡远深;抗缺血性脑水肿有了重要靶点[N];健康报;2006年
10 孙怡;中西医结合治疗脑出血几个关键问题[N];中国中医药报;2007年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978