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应用免疫分型芯片对临床急性白血病细胞膜相关抗原的检测

萨丽波  
【摘要】: 目的 目前白血病的免疫分型诊断主要依靠用已知的单克隆抗体(McAb)去鉴定白血病细胞膜表面或细胞内部的抗原—CD抗原(cluster of differentiation),根据不同抗原在不同阶段的出现与消失,决定白细胞所属的系列及分化阶段,做出免疫学诊断。当前临床上进行白血病的免疫分型主要是应用流式细胞术及免疫组化技术,其分型受到标本量、价格、程序等的限制,而且一次实验只能分析1~4个表面抗原,漏掉了大量监测机体免疫状态的表面抗原指标。随着生物芯片技术的发展,学者们开始应用这种高通量、并行性、集成化的技术平台进行白血病的免疫分型研究。本实验构建的用于急性白血病免疫学分型的细胞芯片就是利用抗原、抗体特异性结合的原理,将白细胞表面分化抗原单克隆抗体固定于载体上,形成抗体点阵。不同的单克隆抗体能够自动识别并捕获表达相应表面分化抗原的细胞,从而对白血病进行免疫学分型。将芯片的诊断结果与临床对急性白血病患者外周血白细胞的系列分型结果进行比较,验证芯片诊断的准确性。同时采用免疫荧光细胞化学技术对芯片捕获的白血病细胞膜表面相关抗原CD6、LTK、CaSR的表达进行检测,旨在为临床诊断、靶向治疗及预后提供快速、简便、完整、准确的免疫学资料。 方法 结合本实验室现有抗体情况对国际上公认的急性白血病免疫分型的一线、二线抗体进行筛选,采用最佳的抗体点阵组合构建急性白血病免疫分型芯片。 用急性白血病免疫分型芯片对35例临床初诊的急性白血病人的外周血进行免疫分型:提取的白细胞经吖啶橙染色后孵育芯片,荧光图像扫描仪扫描观察点阵捕获细胞的情况,确定细胞膜上抗原的表达。瑞氏-姬姆萨染色后显微镜下观察芯片上各抗体点捕获细胞的形态,免疫学结果与形态学相结合进行分型并与临床检测结果进行比较。 检测35例临床急性白血病患者外周血白血病细胞膜表面CD6、LTK、CaSR三种膜相关抗原的表达情况:对芯片捕获的白血病细胞采用间接免疫荧光法检测膜相关抗原并在荧光显微镜下观察结果。 结果 急性白血病免疫分型芯片的点阵抗体为: T-ALL:CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8-1、CD8-2、TCRαβ、TCRδγ B-ALL:CD10、CD19、CD20、CD22、CD24、CD79b、κ、λ AML:CD13、CD14、CD15、CD33、CD41、CD61、CD64、CD103、CD235a 非系列特异性:TdT、HLA-DR、CD34 根据荧光图片扫描仪扫描芯片得到的抗原表达情况并结合显微镜下观察点阵捕获的细胞形态,对35例临床急性白血病患者的外周血进行免疫分型,T-ALL11例,B-ALL14例,AML10例,所得系列分型结果与临床检测结果一致,证明了芯片诊断的准确性。 对35例临床急性白血病患者的外周血进行检测,细胞芯片上捕获的白血病细胞采用间接免疫荧光法检测膜相关抗原,用一抗CD6,LTK,CaSR的浓度为1:300 37℃孵育30分钟,荧光二抗浓度为1:200 37℃孵育20分钟最佳。荧光显微镜下观察细胞膜表面相关抗原T-ALL表达CD6,B-ALL表达LTK,AML表达CaSR。 结论 本实验构建的急性白血病免疫分型芯片对急性白血病的系列分型结果与临床分型结果一致,急性白血病患者外周血白血病细胞膜表面相关抗原CD6在T-ALL表达、LTK在B-ALL表达、CaSR在AML表达具有特异性,可作为临床白血病免疫学分型及抗体靶向治疗的依据。本实验室研制的白血病免疫分型细胞芯片重复性和稳定性好,为临床白血病免疫分型提供了一种更快速简便、高通量、并行性、集成化的技术平台。


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