收藏本站
《中国医科大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

1,25(OH)_2D_3对脂多糖及高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞维生素D受体及炎症因子表达的影响

杨丽娜  
【摘要】: 前言 持续不卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)是终末期肾脏病(end-stage renal disease, ESRD)的主要替代方式。腹膜透析过程中存在腹膜组织的损害,包括高糖等非生理性透析液、腹膜炎症刺激包括革兰氏阴性杆菌的代表—内毒素脂多糖(LPS),以及糖基化终末产物、PH值、渗透压、革兰氏阳性杆菌和真菌相关腹膜炎等。因此,本文拟采用脂多糖与高糖刺激腹膜间皮细胞,观察相关指标的变化及意义。 腹膜间皮细胞表达的细胞因子在腹膜炎症及纤维化过程中起到重要作用。转化生长因子β1(TGF-β1)被认为是CAPD患者腹膜纤维化过程中公认的细胞因子。肿瘤坏死因子α(TNF-α)是CAPD患者腹膜纤维化进程中的另外一个重要的细胞因子。在腹膜炎症与纤维化过程中,TGF-β1与TNF-α均表达上调。TGF-β1是一个复杂的细胞因子,具有多种生物学功能,包括影响细胞的增殖与分化,免疫调节,细胞外基质形成等。同时,TNFα还是一种多效性的细胞因子,在多种环节起着关键的调节作用,通过核因子κB(NF-κB)的活化调节炎症和免疫反应。 维生素D受体(vitamin D receptor, VDR)是介导1,25(OH)2D3发挥生物学效应的生物大分子,为一种基因转录调节蛋白,位于细胞核内,属于核受体超家族成员,维生素D受体通过与其配体1,25(OH)2D3结合后,与靶基因启动子区域的维生素D反应成分(vitamin D response element, VDRE)结合,影响mRNA的表达及蛋白质的合成。1,25(OH)2D3除经典的调节钙磷代谢功能外,近年来,越来越多的研究表明1,25(OH)2D3及其类似物在调节细胞的增殖、分化、凋亡与生长过程中起着重要的作用。在多种组织与器官中,1,25(OH)2D3具有抗炎,抗纤维化的潜在作用。因此,我们拟从大鼠腹膜间皮细胞内研究进而探讨LPS及高糖对VDR的表达影响及炎症因子TGF-β1、TNF-α的表达变化和可能机制,进而为防治腹膜炎相关腹膜纤维化提供一定的思路。 方法 1、实验动物:清洁级SD雄性大鼠,体重120-160克,由中国医科大学实验动物中心提供。 2、胰蛋白酶消化法分离培养RPMCs,RT-PCR法检测VDR-mRNA的表达,Western-Blot检测VDR蛋白的表达。ELISA检测上清液TNFα及TGF-β1的表达。 3、实验分组 (1)正常对照组:只加1%胎牛血清的DMEM/F12培养基; (2)脂多糖作用不同浓度组:不同浓度的脂多糖(0,1,10,100μg/ml)分别作用6h; (3)脂多糖作用不同时间组:10μg/ml脂多糖分别作用0,2,6,12h; (4)LPS+1,25(OH)2D3作用组:10μg/ml脂多糖预孵育2h后,加1,25(OH)2D3 (10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L)再作用6h以检测VDR mRNA和蛋白及TNFα、TGF-β1的表达。 (5)葡萄糖作用不同浓度组:不同浓度的葡萄糖(1.5%,2.5%,4.25%)分别作用6h; (6)葡萄糖作用不同浓度组:2.5%葡萄糖分别作用0,2,6,12h; (7)葡萄糖+1,25(OH)2D3组:2.5%葡萄糖预孵育2h后,加1,25(OH)2D3(10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L)作用6h以检测VDRmRNA和蛋白及TGF-β1的表达。 结果 1、LPS对RPMCs的VDR表达的影响 1μg/ml LPS可使RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达减少(P0.05),100μg/ml LPS作用最强(P0.01);10μg/ml LPS作用2小时RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达减少(P0.05),12小时VDRmRNA和蛋白表达最少(P0.01). 2、1,25(OH)2D3对LPS刺激下的VDR表达的影响 10-8mol/L 1,25(OH)2D3可上调lOμg/ml LPS预孵育2h后的RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达(P0.01),10-6mol/L的这种上调作用最强(P0.01)。 3、LPS对RPMCs的TNFα、TGF-p1表达的影响 LPS组上清液中TNFα、TGF-p1浓度显著高于对照组(P0.01);在LPS作用浓度为100μg/ml与作用时间为12小时时达最大(P0.01)。 4、1,25(OH)2D3对LPS刺激下的TNFα、TGF-p1表达的影响 1,25(OH)2D3组上清液中TNFα、TGF-β1浓度显著低于LPS组(P0.01)。10-6mol/L的这种抑制作用最明显(P0.01)。 5、高糖对RPMCs的VDR表达的影响 2.5%葡萄糖可使RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达减少(P0.05),4.25%葡萄糖作用最强(P0.01);2.5%葡萄糖作用2小时RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达减少(P0.05),12小时VDRmRNA和蛋白表达最少(P0.01). 6、1,25(OH)2D3对高糖刺激下的VDR表达的影响 10-8mol/L 1,25(OH)2D3可上调2.5%葡萄糖预孵育2h后的RPMCs的VDRmRNA和蛋白表达(P0.01),10-6mol/L的这种上调作用最强(P0.01)。 7、高糖对RPMCs的TGF-β1表达的影响 高糖组上清液中TGF-β1浓度显著高于对照组(P0.01);在葡萄糖浓度为4.25%与作用时间为12小时时达最大(P0.01)。 8、1,25(OH)2D3对高糖刺激下的TGF-β1表达的影响 1,25(OH)2D3组上清液中TGF-β1浓度显著低于高糖组(P0.01)。10-6mol/L的这种抑制作用最明显(P0.01)。 结论 1、RPMCs存在VDR的表达。 2、LPS和高糖可以从基因和蛋白水平以浓度和时间依赖方式下调体外培养的RPMCs的VDR表达,同时以浓度和时间依赖方式刺激炎症因子的表达。 3、1,25(OH)2D3可以从基因和蛋白水平拮抗LPS及高糖对VDR的表达下调作用,同时抑制炎症因子的产生。 4、VDR与TNFαTGF-p1表达负相关,1,25(OH)2D3对腹膜透析相关腹膜炎具有一定的保护作用。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R692.5

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 高翔;田信奎;徐家云;汪涛;;轻度肝脏损害对持续性非卧床腹膜透析患者血氨水平的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年07期
2 刘洋;谌卫;郭志勇;;细胞周期调节蛋白与腹膜纤维化[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年07期
3 徐惠绵;;胃癌腹膜亚临床转移的诊治研究[J];外科理论与实践;2011年03期
4 熊飞;高秀伦;王小琴;;参芎注射液治疗腹膜纤维化研究进展[J];湖北中医杂志;2011年08期
5 伏幼娟;张庆燕;俞雨生;;腹膜功能退化的病理生理学基础[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2011年01期
6 孙传进;郭兆安;;黄芪治疗肾脏病机制研究进展[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年09期
7 陶娜娜;蒋春明;张苗;孙琤;;丹参酮IIA对腹膜透析液诱导的大鼠腹膜组织学变化及CTGF表达的影响[J];南京中医药大学学报;2011年04期
8 徐文生;徐红;;溶血磷脂酸与卵巢癌的关系研究进展[J];广西医学;2011年07期
9 曲廖准;李拱榆;唐小玲;;频发腹膜透析相关性腹膜炎患者血清及透出液C反应蛋白和CA125检测的意义[J];河北医学;2011年08期
10 毛莉;张安;徐扬;王宓;;慢性心力衰竭患者血清肿瘤相关糖类抗原125和脑钠肽联合测定及其意义[J];临床医学;2011年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 何茂霞;曹海杰;韩丹丹;孙延慧;李静;赵素芳;马红娟;姚思德;;液相中活性氧协同OH降解邻苯二甲酸二甲酯反应机理及其动力学的理论研究[A];中国化学会第28届学术年会第13分会场摘要集[C];2012年
2 吴智仁;杨才千;吴智深;岩下健太郎;李润杰;;基于W—OH有机复合固化材料的新型荒漠化防治及生态修复技术[A];全国水土保持与荒漠化防治及生态修复交流研讨会论文集[C];2009年
3 Erik De Clercq;Jan Balzarini;Christophe Pannecouque;;Chiral Resolution,Further Modification and Biological Evaluation of CH(OH)-DAPYs as Potent HIV-1 NNRTIs[A];2011年全国药物化学学术会议——药物的源头创新论文摘要集[C];2011年
4 阳晓;叶任高;孔庆瑜;杨琼琼;余学清;汪涛;魏毅;;不同剂量川芎嗪对大鼠腹膜间皮细胞CD40表达的影响[A];2001年全国中西医结合急救医学学术会议论文集[C];2001年
5 阳晓;叶任高;魏毅;孔庆瑜;杨琼琼;;不同剂量川芎嗪对大鼠腹膜间皮细胞CD40表达的影响[A];第四次全国中西医结合中青年学术研讨会论文集[C];2002年
6 尹杏;刘常青;张平民;陈启元;;脱一水异极矿Zn_4Si_2O_7(OH)_2热力学数据的测定与研究[A];中国化学会第十五届全国化学热力学和热分析学术会议论文摘要[C];2010年
7 韩丹丹;丁元生;芦菲;王琨;孙潇楠;;Ni(OH)_2电极材料的制备及堆积密度的研究[A];低碳技术与材料产业发展研讨会论文集[C];2010年
8 庞玉娜;乌志明;周园;王宏宾;;碱式氯化镁5Mg(OH)_2·MgCl_2·3H_2O的制备与表征[A];2010年全国镁盐行业年会暨节能减排与发展研讨会论文集[C];2010年
9 ;Re-evaluation of the B isotopic fractionation between boron acid and B(OH)_4~- using methods beyond harmonic level[A];中国矿物岩石地球化学学会第13届学术年会论文集[C];2011年
10 邹国栋;黄小荥;;基于[Zn_8(μ_3-OH)_4]簇和1,4-萘二甲酸的有机-无机杂化配位聚合物[A];中国化学会第四届全国多酸化学学术研讨会论文摘要集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 陶春祥;新型腹膜透析液的研究与评析[N];中国医药报;2003年
2 冯世容;低剂量川芎嗪可保护腹膜功能[N];中国医药报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李孟慧;腹膜间皮细胞及转化生长因子在子宫内膜异位症粘连中作用研究[D];北京协和医学院;2012年
2 葛燕;microRNA-29c对人腹膜间皮细胞间充质转分化的影响及机制研究[D];中南大学;2012年
3 熊飞;参芎注射液对腹膜透析液诱导的腹膜间皮细胞损伤的干预作用研究[D];湖北中医药大学;2012年
4 徐馨;初步探索中国白癜风患者血清25(OH)维生素D水平及其与疾病的关系[D];复旦大学;2012年
5 杨燕;名义上无水矿物中OH红外吸收系数温度依赖性和结合机理的原位变温红外光谱实验研究[D];中国科学技术大学;2011年
6 张柯;miRNA589在TGF-β_1诱导人腹膜间皮细胞上皮—间充质转分化的作用及分子机制[D];中南大学;2010年
7 王亚南;典型有机污染物与·OH反应速率常数的QSAR研究[D];大连理工大学;2011年
8 杨孟雪;TLR4和VDR在2型糖尿病和糖尿病肾病尿毒症患者单核细胞的炎症调节作用及1,25-(OH)_2D3干预机制研究[D];重庆医科大学;2012年
9 刘萍;1,25(OH)_2D_3对糖尿病肾小管间质纤维化的免疫调节作用[D];天津医科大学;2012年
10 吴涛;TGF-β_1 SiRNA对人胃癌细胞和腹膜间皮细胞作用意义的初步探讨[D];中国医科大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨丽娜;1,25(OH)_2D_3对脂多糖及高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞维生素D受体及炎症因子表达的影响[D];中国医科大学;2010年
2 李晓兰;高糖对腹膜间皮细胞细胞外基质影响的研究[D];中国医科大学;2003年
3 胡华;高糖腹透液对大鼠腹膜间皮细胞超微结构的影响[D];中南大学;2012年
4 曾真;抗生素对腹膜间皮细胞的影响的观察[D];大连医科大学;2010年
5 王磊;NSTX装置OH线圈电磁问题分析和工程设计[D];合肥工业大学;2010年
6 樊怡;己糖激酶在原代培养的腹膜间皮细胞表达与调控的实验研究[D];中国医科大学;2002年
7 李志明;脂多糖对腹膜间皮细胞己糖激酶活性的调控及对肿瘤坏死因子表达的影响[D];中国医科大学;2004年
8 丁红;高糖、PKC对原代培养的腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白1调节作用的研究[D];中国医科大学;2004年
9 魏波;脉冲电晕放电过程中OH自由基的光学测量[D];浙江大学;2010年
10 王清;不同类型沸石分子筛的OH振动红外光谱研究[D];大连理工大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026