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《大连医科大学》 2012年
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大鼠重症急性胰腺炎时细胞内Ca~(2+)对肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响

王超  
【摘要】:目的: 揭示重症胰腺炎相关肺损伤的主要发病机制,探讨中药清胰汤、地塞米松、维拉帕米对肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡、胞内游离钙离子浓度、Bax及Caspase-8相关凋亡基因调控系统及促炎细胞因子表达水平的影响。为揭示胞内游离钙离子超载与细胞凋亡的相关性、细胞凋亡介导的肺损伤机制及药物的保护机制提供了实验依据和理论指导。 方法: (1)健康雄性SD大鼠60只随机分为5组,每组12只:模型组(SAP组),对照组(CON组),清胰汤治疗组(QYT组),地塞米松治疗组(DEX组),维拉帕米治疗组(VER组)。采用经十二指肠乳头胰胆管逆行注射1.5%脱氧胆酸钠(1ml/kg体重/只/次),建立SAP模型。CON组开腹后仅轻微翻动胰腺数次。药物治疗组大鼠在规定时间点分别给予药物处理。地塞米松组(剂量:0.2ml/100g体重/只/次,缓慢静推,速度0.3ml/min)及维拉帕米组(0.05ml/100g体重/只/次,用生理盐水稀释至地塞米松组等容缓慢静推,速度0.3ml/min)于造模后立即静脉注射药物一次及造模后6h,12h分别再次给药。清胰汤组(剂量:1.0ml/100g体重/只/次)造模前0.5h经胃管灌入中药清胰汤一次及造模后6h,12h分别再灌胃一次。(2)在造模后24h,分离培养肺泡Ⅱ型上皮细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率、用激光扫描共聚焦显微镜检测胞内游离的钙离子浓度及反转录法检测凋亡基因Bax及Caspase-8的转录水平;并且行肺组织和胰腺组织病理学检查;用免疫组化法检测Bax和Caspase-8的蛋白表达;用放免法测定血清细胞因子;全自动生化分析仪进行血气分析;采用真空干燥法检测肺湿/干比重。 结果: 与对照组相比,肺组织病理切片HE染色结果显示SAP组符合ALI的改变;SAP组动脉PaO2明显降低(P0.01);SAP组肺湿/干比值明显增高(P0.01);SAP组TNF-α和血清AMY含量明显增高(P0.01);流式细胞仪检测SAP组肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡明显增高(P0.01);激光扫描共聚焦显微镜检测显示SAP组肺泡Ⅱ型上皮细胞内游离的钙离子浓度明显增高(P0.01);RT-PCR结果显示SAP组肺泡Ⅱ型上皮细胞的Bax及Caspase-8凋亡基因表达明显增高(P0.01);免疫组化检测显示Bax及Caspase-8凋亡基因蛋白表达明显增高(P0.01)。经药物治疗后各项指针都较模型组不同程度的降低。 结论: (1)肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡参与重症急性胰腺炎相关急性肺损伤(ALI)的过程。 (2) ALI时血清中TNF-α的含量明显增加。 (3)肺泡Ⅱ型上皮细胞内钙离子稳态破坏参与细胞的凋亡。 (4) ALI时,肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡基因Bax、Caspase-8mRNA的表达增加,线粒体途径和死亡受体途径可能同时参与肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡并发挥调控作用。 (5)应用清胰汤、地塞米松、维拉帕米可以明显减轻肺组织损伤程度,降低血清中TNF-α的含量、减少肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡及Bax、Caspsase-8mRNA及蛋白的表达。 (6)中西医结合治疗可能成为预防和治疗重症急性胰腺炎及其相关肺损伤的有效途径。
【学位授予单位】:大连医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R576

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【参考文献】
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