收藏本站
《大连医科大学》 2019年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

FAM20C不同位点突变对成骨与成牙本质细胞行为的作用研究

王瑜  
【摘要】:背景:序列相似性家族20(The family with sequence similarity 20,FAM20)代表了一个新的分泌蛋白家族,主要成员包括FAM20A,FAM20B与FAM20C。每个家族成员的突变都可导致相应疾病发生,其中FAM20C突变引发的疾病临床上称为Raine综合征。此种疾病有两种不同的临床表现,一种为致死性骨硬化发育不良,另一种为非致死性低磷酸血盐佝偻病,同为Raine综合征为何出现相反临床表现?其病因与发病机制尚不清楚。本文利用课题组已拥有的成骨细胞及成牙本质细胞系,转染携带有致死性骨硬化的Fam20c突变质粒Fam20c-L383R(Fam20c第383位亮氨酸突变为精氨酸)与Fam20c-G374R(Fam20c第374位甘氨酸突变为精氨酸),以及携带有非致死性低磷酸血盐佝偻病的Fam20c突变质粒Fam20c-D446N(Fam20c第446位天冬氨酸突变为天冬酰胺)与Fam20c-P323S(Fam20c第323位脯氨酸突变为丝氨酸),旨在探究为何同一种基因的突变会引起两种完全相反的临床表现,不同位点的突变是否对细胞行为产生不同的影响。目的:研究不同位点突变的Fam20c对成骨细胞与成牙本质细胞的增殖、迁移、矿化等生物学行为的作用,及其对相关调控基因表达的改变。方法:1.将上述Fam20c不同位点突变的四种质粒Fam20c-L383R、Fam20c-G374R、Fam20c-D446N与Fam20c-P323S分别转染至Fam20c已敲除的成骨细胞及成牙本质细胞,利用Real-Time PCR法检测转染后细胞内的Fam20c基因表达水平变化,以验证质粒最佳转染效率。2.利用BrdU染色法观察分别转染了上述四种Fam20c不同位点突变质粒后的成骨细胞与成牙本质细胞的增殖水平变化。3.利用细胞划痕实验检测分别转染了上述四种Fam20c不同位点突变质粒后的成骨细胞与成牙本质细胞体外培养36h后划痕的宽度,以观察Fam20c不同位点突变对细胞迁移的影响。4.利用Real-Time PCR法分别检测Dmp1、Dspp、Mepe、Opn、Alp、Fgf23、Col1a1及Ocn等与成骨与成牙本质相关的基因表达水平变化,以观察Fam20c不同位点突变对成骨细胞与成牙本质细胞基质分泌功能的影响。5.对分别转染了上述四种Fam20c不同位点突变质粒后的成骨细胞与成牙本质细胞以及对照组进行骨诱导21天后,通过茜素红染色并观测形成钙结节的数量,比较Fam20c不同位点突变对细胞矿化能力的影响。结果:1.Real-Time PCR结果显示,经转染上述四种突变质粒后,总Fam20c基因表达水平是对照组的5-10倍,筛选出最佳转染条件。2.BrdU染色结果显示,Fam20c缺失与突变对成骨细胞增殖无显著性影响,致死性骨硬化和低磷酸血盐佝偻病突变质粒转染后的成骨细胞(osteoblast,OB)增殖无变化,两者之间无差异;而Fam20c缺失使成牙本质细胞(odontoblast,OD)增殖能力下降,致死性骨硬化和低磷酸血盐佝偻病突变质粒转染后与OD Fam20c~(f/f)无差异,较OD Fam20c~(KO)有所增强,但致死性突变与非致死性突变两者之间无差异。3.细胞划痕实验显示,Fam20c基因缺失和突变均使成骨细胞及成牙本质细胞的迁移能力减弱,但致死性突变与非致死性突变之间无差异。4.Real-Time PCR结果显示,在成骨细胞和成牙本质细胞中,不同位点突变使细胞不同的基因表达水平出现差异,从而可能改变细胞功能与行为。5.细胞茜素红染色结果显示,Fam20c基因缺失使成骨细胞矿化能力减弱,致死性与非致死性对两种细胞矿化能力的影响无差异;而在成牙本质细胞中,Fam20c缺失与突变均对其矿化的影响无显著性差异。结论:FAM20C不同位点突变引起Raine综合征两种不同的临床表现,体外实验表明对成骨细胞增殖无显著性影响,但可引起成骨细胞迁移以及矿化的细胞学行为与功能改变;同时使成牙本质细胞的增殖、迁移以及矿化的细胞学行为与功能改变,在两种细胞中致死性突变与非致死性突变之间无显著性差异。
【学位授予单位】:大连医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R341

免费申请
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周怡君;刘苍维;闫广兴;王爽爽;叶佳朋;张雪;胡月;郝新青;史册;孙宏晨;;活化蛋白A受体1在成牙本质细胞极化和牙本质形成中的作用[J];口腔颌面外科杂志;2019年06期
2 Wang HS;Yang FH;Wang YJ;赵泽亮;;成牙本质细胞外泌体减轻邻近细胞凋亡[J];中国口腔颌面外科杂志;2019年06期
3 赵颖煊;赵守亮;唐荣银;吕海鹏;闫晶;侯锐;;人成牙本质细胞L型钙离子通道特异性基因片段的克隆研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2008年04期
4 宋玮,赵守亮,石勇,何文喜;人成牙本质细胞的分离和鉴定[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2005年02期
5 崔春,陈智;基膜及其相关分子在成牙本质细胞分化中的作用[J];国外医学.口腔医学分册;2004年01期
6 王晓春,梁景平;成牙本质细胞分离技术的新进展[J];国外医学.口腔医学分册;2004年06期
7 李明伟;李鹏;陈博;白玉;程庚;薛云鹏;肖敏;余擎;;脂多糖对成牙本质细胞细胞连接影响的体外研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2014年04期
8 姜永;肖明振;杨帆;何文喜;范晓敏;;成牙本质细胞中成纤维细胞生长因子18的表达[J];中国临床康复;2006年37期
9 王捍国,肖明振,赵守亮,郝建军,张进;永生化人成牙本质细胞样细胞系的建立[J];第四军医大学学报;2003年10期
10 王发生;;钠钙交换体1型通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞和神经纤维组织中的表达[J];中国民康医学;2016年17期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吕海鹏;赵守亮;史俊南;Athony J.Smith;;人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因的原核表达质粒的构建和鉴定[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
2 田卫东;谢家敏;刘磊;汤炜;郑晓辉;李声伟;;人类牙乳头间充质细胞向成牙本质细胞定向诱导分化的实验研究[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
3 裴斐;;自噬调节成牙本质细胞分化及牙本质形成[A];2019第九次全国口腔生物医学学术年会论文汇编[C];2019年
4 郝玉庆;王国荃;刘开泰;;过量氟对培养人牙乳头间充质细胞合成分泌Ⅰ型胶原的影响[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年
5 朱晓茹;赵守亮;唐荣银;张蓉;李玉成;;人牙切片器官培养模型的建立[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
6 贺丹;吴丽更;阙克华;;内源性大麻素AEA调控HODs细胞分泌MMP-2的机制[A];第十次全国老年口腔医学学术年会论文汇编[C];2015年
7 谢家敏;田卫东;陈希哲;郑晓辉;汤炜;刘磊;;体外诱导人牙乳头间充质细胞向成牙本质细胞样细胞分化[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年
8 陈智;;成牙本质细胞分化的调控机制—Klf4及其表观遗传因子的作用[A];2014年第九次全国牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2014年
9 占云燕;裴斐;陈智;;HDAC6通过调控自噬体与溶酶体融合影响自噬过程参与成牙本质细胞分化[A];2019第九次全国口腔生物医学学术年会论文汇编[C];2019年
10 郝新青;周怡君;胡月;刘苍维;闫广兴;王爽爽;史册;孙宏晨;;极性蛋白PAR3在小鼠下颌磨牙成牙本质细胞中的表达浅析[A];2019年中华口腔医学会口腔病理学专业委员会第十三次全国口腔病理学术会议论文汇编[C];2019年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 洪亚兰;厌食蔬菜对健康的危害[N];医药养生保健报;2007年
2 记者 杨念明 通讯员 龙华 实习生 文金汇;我省5个课题入选国家973前期专项[N];湖北日报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 万春燕;基质金属蛋白酶-9在小鼠根尖周炎/牙周炎中的作用以及牙本质涎蛋白调控成牙本质细胞分化的研究[D];武汉大学;2015年
2 贾杰;Dspp突变打破小鼠成牙本质细胞分化过程的矿化平衡机制研究[D];武汉大学;2016年
3 刘钊;HDAC抑制剂LMK-235对DPCs成牙本质细胞向分化的作用及机制的研究[D];南方医科大学;2017年
4 李霞;TRAF6对成牙本质细胞功能的调控作用的研究[D];第四军医大学;2005年
5 姜永;成纤维细胞生长因子18对成牙本质细胞分化的作用及信号传导通路的研究[D];第四军医大学;2006年
6 陈新梅;甲状旁腺激素对牙乳头间充质细胞、组织影响的实验研究[D];第四军医大学;1998年
7 李玉成;组织工程化牙根组织的研究[D];第四军医大学;2007年
8 何文喜;Smads信号分子在成牙本质细胞分化中作用的研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
9 黄欣;成牙本质细胞分化中microRNA靶向调控牙本质涎磷蛋白基因的研究[D];南方医科大学;2011年
10 韩娜娜;β-catenin在牙髓细胞向成牙本质细胞方向分化过程中的作用机制研究[D];武汉大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王瑜;FAM20C不同位点突变对成骨与成牙本质细胞行为的作用研究[D];大连医科大学;2019年
2 文静;N-花生四烯酸氨基乙醇调控人成牙本质样细胞MMP-2表达相关miRNA的研究[D];天津医科大学;2019年
3 王瑜;TRPA1、TRPV1与TMEM100三种蛋白在人成牙本质细胞中共表达的研究[D];天津医科大学;2019年
4 谢金芳;Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后的修复作用[D];吉林大学;2019年
5 袁芳;SLPI在成牙本质细胞分化中的作用和机制研究[D];昆明理工大学;2018年
6 李媛;FoxO3a调控自噬参与成牙本质细胞炎性损伤修复的机制研究[D];武汉大学;2018年
7 宋玮;人成牙本质细胞的分离和鉴定[D];第四军医大学;2005年
8 吴煜;过量氟对大鼠牙髓成牙本质细胞超微结构的影响及免疫组化的研究[D];广西医科大学;2005年
9 赵颖煊;人成牙本质细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的克隆研究[D];第四军医大学;2008年
10 段晴月;骨髓间充质干细胞分化为成牙本质细胞的体内研究[D];第四军医大学;2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026