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《大连医科大学》 2003年
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免疫基因疗法对转移性恶性肿瘤治疗作用的基础研究

张晓东  
【摘要】: E1B基因缺陷腺病毒注射液作为基因治疗的一种手段近几年投入临床应用。可以特异性地于肿瘤细胞中复制,通过多种机制导致肿瘤细胞的崩解坏死。而恶性肿瘤难以治愈的突出特点是其转移性,所以研究肿瘤的基因治疗在热休克蛋白(heat shock protein,HSP)的辅助下是否可在局部提高肿瘤特异性抗原提呈,从而诱导和调动机体内的肿瘤免疫杀伤机制,对远处的微小转移灶产生积极的杀伤作用,则显得至关重要。 目的:E1B基因缺陷腺病毒抗原可诱导MHCI(major hiscompatible complex Ⅰ)在被感染的肿瘤细胞表面表达,使机体产生针对病毒的细胞毒性反应,从而裂解肿瘤细胞,这是其杀伤机制之一。热疗可以通过热应激产生HSP。HSP作为分子伴侣在肿瘤免疫中发挥着重要作用,当细胞内蛋白抗原酶解成短肽与HSP结合后,被转运至粗面内质网,与MHCI类分子结合形成HSP抗原复合物(HSP antigen complex HAC)共同表达于细胞表面,为CD8特异性T淋巴细胞所识别,进而攻击肿瘤细胞。肿瘤组织的HAC可能结合了多种肿瘤抗原肽,免疫机体后可以活化多个CTL克隆实现对同一肿瘤内所有肿瘤的杀伤作用。本实验采用热疗,通过热应激以产生HSP,观察是否可对E1B基因缺陷腺病毒的MHCI途径的肿瘤特异性抗原的提呈产生协同和增强作用,从而诱导肿瘤特异性免疫,以杀伤远处转移的肿瘤细胞。 方法:将40只615小鼠分为4组,每组10只,雌雄各半。4组分别为:E1B基因缺陷腺病毒组(注射E1B基因缺陷腺病毒注射液)、热疗组(微波热疗+生理盐水注射液)、E1B基因缺陷腺病毒+热疗组(微波热疗+注射E1B基因缺陷腺病毒注射液)、对照组(注射生理盐水注射液)。实验周期为21天,于双侧肋部注射肿瘤细胞2×10~6个,待瘤体长至约5mm时,开始实验。将热疗组及E1B基因缺陷腺病毒+热疗组右侧瘤体用微波热疗机加热15分钟(功率10W)。加热后,每组 取出2只进行免疫组化检侧HSP。然后对EIB基因缺陷腺病毒组及EIB基因缺陷 腺病毒+热疗组右侧瘤体注射EIB基因缺陷腺病毒注射液(1 x 109颗物只),热疗 组及对照组注射等量的生理盐水。连续3天,每天1次。用药后,每3天测一次 左侧瘤体最大直径及其垂直径,连续6次,并计算瘤体体积及抑瘤率.于第21天 时每只小鼠采0.5ml血行流式细胞仪(now cytomater,FCM)检测细胞免疫情况。 然后处死小鼠,采左侧瘤体称瘤体重量;同时采集右侧肿大淋巴结,将右侧淋巴 结进行HE染色以观察右侧淋巴结转移情况。 结果:HSP免疫组化染色结果,如图1所示加用热疗组与未加用热疗组HSP的 生成有显著性差异。左侧瘤体体积测定,结果见表1。热疗组,EIB基因缺陷腺病 毒,EIB基因缺陷腺病毒+热疗组与对照组比较其P值分别为 0.072,0.的3,0.01,EIB基因缺陷腺病毒+热疗组有显著性差异(P0.05)。左侧 瘤体重量测定。结果见表2。热疗组,EIB基因缺陷腺病毒组,EIB基因缺陷腺病 毒+热疗组与对照组比较其P值分别为0.004,0.009,0.000,均有显著性差异。右侧 淋巴结转移数测定结果见表3。热疗组,EIB基因缺陷腺病毒,EIB基因缺陷腺病 毒+热疗组与对照组比较其P值分别为0.026,0.035,0.005,均有显著性差异(P 0.01)。CD4、CDS百分比及CD4/CDS比值结果见表4.从表中可见热疗组,EIB基 因缺陷腺病毒,EIB基因缺陷腺病毒+热疗组CDS(CTL)均有增高,而以EIB基 因缺陷腺病毒十热疗组显著。 结论: 1.热疗组,EIB基因缺陷腺病毒组与对照组比较其瘤体体积变化无显著性差 异,EIB基因缺陷腺病毒+热疗组与对照组比较瘤体变化有显著性差异。热疗组, EIB基因缺陷腺病毒,EIB基因缺陷腺病毒+热疗组与对照组比较其对侧瘤体重量 有显著性差异。 2.热疗组,EIB基因缺陷腺病毒,EIB基因缺陷腺病毒+热疗组与对照组比 较,在刺激CTL的增殖方面有明显差异,而以EIB基因缺陷腺病毒+热疗组更加显 著。说明EIB基因缺陷腺病毒+热疗组明显增强机体的细胞免疫功能,特别是刺激 CTL的增殖。 3.EIB基因缺陷腺病毒+热疗组中热疗产生的HSP进一步增强EIB基因缺陷 腺病毒对CTL增殖的刺激,从而产生较单纯EIB基因缺陷腺病毒基因疗法更强的免 疫刺激,对转移性恶性肿瘤产生治疗作用。
【学位授予单位】:大连医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R730.51

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