收藏本站
《大连医科大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

3T3-L1前脂肪细胞与纤维蛋白凝胶构建组织工程脂肪的体外实验研究

周伟  
【摘要】: 目的:体外培养前脂肪细胞并与纤维蛋白凝胶复合,研究前脂肪细胞在纤维蛋白凝胶上的黏附,增殖,诱导分化为脂肪细胞的情况。探索将纤维蛋白凝胶作为前脂肪细胞载体的可行性。为前脂肪细胞和纤维蛋白凝胶复合移植预防硬膜外瘢痕形成提供理论和实践基础。 方法:(1)3T3-L1前脂肪细胞株的培养:前脂肪细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液在37℃细胞培养箱(5%二氧化碳)中培养,每2天换一次培养液,传代扩增至实验所需细胞数量。(2)实验分为两个阶段:1)前脂肪细胞培养阶段;2)诱导分化阶段。第一阶段实验分组:A组为前脂肪细胞纤维蛋白凝胶复合组,B组为单纯前脂肪细胞对照组。将培养瓶中生长状况良好处于对数生长期的前脂肪细胞用0.25%的胰酶消化,显微镜下计数并制成密度为1×105个/ml的单细胞悬液备用。将纤维蛋白原用含10%胎牛血清的DMEM培养液充分溶解,配制成浓度为75mg/ml的纤维蛋白原溶液,凝血酶用40mmol/L的氯化钙溶液溶解,配制成浓度为100u/ml的凝血酶溶液。先后向24孔板内加入前脂肪细胞的单细胞悬液100ul、纤维蛋白原溶液200ul和凝血酶溶液100ul,均匀混合后于37℃的细胞培养箱中静置10分钟制成前脂肪细胞纤维蛋白凝胶复合物,再另将100ul前脂肪细胞的单细胞悬液加入24孔板内为对照组培养,A、B两组细胞各24孔。利用倒置相差显微镜观察不同时间点的A、B两组中前脂肪细胞的黏附、生长、增殖情况。分别于实验的第1、3、5、7、9、11、13天取A、B两组各3孔中的前脂肪细胞,采用MTT法检测细胞的相对数量。随机取A、B两组中各3孔的细胞,向每孔中加入噻唑蓝溶液(5mg/ml)100ul后,移入37℃细胞培养箱中静置4小时,然后吸弃培养孔中的上清液,向每孔再加入10%的二甲基亚砜(DMSO)溶液500ul,振荡10分钟,使结晶物充分溶解后,每孔取150ul转入96孔板中,于570nm波长下测定各孔的光密度(OD)值,统计后绘制A、B两组中前脂肪细胞的生长曲线。第二阶段实验分组:C组为前脂肪细胞纤维蛋白凝胶诱导分化组,D组为单纯前脂肪细胞诱导分化组,E组为从纤维蛋白凝胶上消化的前脂肪细胞诱导分化组。诱导分化都在24孔板中进行,每组各18孔,每孔接种的前脂肪细胞数为5×104个。细胞接种第5天后加入含诱导分化剂(含0.5mmol/L的IMBX、5mg/L的胰岛素和1umol/L的地塞米松)的培养液,利用倒置相差显微镜观察C、D、E3组不同时间点前脂肪细胞的分化情况,于诱导分化后第1、6、12天随机取C、D、E三组中各5孔细胞,采用油红O染色提取法测定各组中脂肪细胞内的脂肪含量。先将C、D、E组标本用10%的中性甲醛固定10分钟,PBS液漂洗后加入配制好的油红O染料浸没标本10分钟,再用PBS液洗去未着色的油红O残渣。然后将已染色的培养板置于37℃细胞培养箱内蒸发掉板内的水分,随即每孔加入1ml异丙醇静置30分钟,萃取脂肪细胞中的油红O染料,萃取出的染液用吸管移出,于722型分光光度计510nm波长处测量吸光度,以OD值表示C、D、E3组中脂肪细胞的脂肪的相对含量。 结果:从生长曲线可以看出,A组即复合在纤维蛋白凝胶上的前脂肪细胞具有良好的增殖能力,接种11天后纤维蛋白凝胶上的前脂肪细胞数高于B组孔板内培养的前脂肪细胞数(P0.05)。倒置相差显微镜观察C组即前脂肪细胞纤维蛋白凝胶复合诱导组在加入诱导分化剂10天后可见部分细胞分化为脂肪细胞,而另外D、E两组在加入诱导剂4天后可见分化的脂肪细胞,E组从纤维蛋白凝胶上消化下来的前脂肪细胞具有与D组孔板中培养前脂肪细胞相当的分化能力,在6天和12天两个时间点上D、E两组之间的脂肪含量无显著性差异。 结论:纤维蛋白凝胶与前脂肪细胞有良好的生物相容性,可作为前脂肪细胞的载体,是组织工程脂肪可行的支架材料。与正常孔板内培养的前脂肪细胞相比,纤维蛋白凝胶中的前脂肪细胞诱导分化率偏低,纤维蛋白凝胶可能对前脂肪细胞分化存在抑制作用,复合在纤维蛋白凝胶上的前脂肪细胞在体内的增殖和分化还需作进一步的动物体内研究。
【学位授予单位】:大连医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R318;R687.3

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙庆仲,李正维,闫红艳,郭文希,王鹏,高栩泽;预防硬膜外瘢痕粘连脂肪移植体大小的筛选研究[J];骨与关节损伤杂志;2003年04期
2 王远亮,赵建华;生物可降解聚乳酸骨科材料研究进展[J];功能材料;1995年06期
3 朱光,项泽文,李海生;脊柱手术中保留硬膜外脂肪的临床分析[J];颈腰痛杂志;2003年05期
4 申勇,程志山,郭斌;几丁糖改性膜预防椎板切除术后硬膜外粘连[J];临床骨科杂志;2004年01期
5 李荟元;自体脂肪移植在美容外科应用的进展[J];中国美容医学;2003年03期
6 沈权,侯筱魁,叶澄宇;黄芪预防术后硬膜外粘连的实验研究[J];中国骨伤;2001年03期
7 梁裕,张云海,龚耀成;预防椎板切除术后硬膜外瘢痕的实验研究[J];中华创伤杂志;2000年06期
8 孙康,姜长明,吕德成,张维国,王霞,毛建民,曹国英,黄为;预防椎板切除术后硬膜周围纤维化与粘连的实验研究[J];中华骨科杂志;1995年11期
9 张丙磊,王道谦,崔秀珍,任守松,张培功;防止椎板切除术后硬脊膜外瘢痕粘连的实验研究[J];中华骨科杂志;1997年02期
10 王秋根,项耀钧,侯春林,吴岳嵩,杨锡铭,顾雄华,徐卫东,康一凡;防硬膜外粘连的实验研究与临床观察[J];中华骨科杂志;1998年07期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 辛坤;王峰;;腰椎间盘突出后路手术发展近况[J];中医药临床杂志;2011年04期
2 杨怀远,苏家庆,高芳型,刘贤业,周叶金;腰椎间盘突出物上传统切式和改良切式的肉眼比较[J];安徽医学;1999年06期
3 许海,邱新建,徐一川;有限手术原则治疗腰椎管狭窄66例临床分析[J];蚌埠医学院学报;2003年02期
4 苏萌;邹云雯;褚言琛;杨堃;;IL-6对NIH3T3细胞MMP-3和TIMP-1表达影响[J];青岛大学医学院学报;2010年03期
5 胡光蕾;褚言琛;王志杰;邹云雯;;椎板切除术后硬膜周围粘连机制及其预防的研究现状[J];青岛大学医学院学报;2010年06期
6 周明;张曦;;腰椎术后综合征的原因探析及非手术治疗[J];北方药学;2011年08期
7 刘光晶;;自体脂肪颗粒移植的研究[J];包头医学院学报;2007年04期
8 马泉;陈辉;郝晓磊;;预防硬膜外粘连方法的研究进展[J];承德医学院学报;2010年03期
9 曹凯,蒋电明;椎板切除术后预防硬膜外瘢痕材料的研究概况[J];创伤外科杂志;2002年06期
10 徐秋香,陈立科,刘文和;几丁糖预防椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连及促进TGF形成的实验研究[J];湘南学院学报;2005年03期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 陈博来;李永津;赵兵德;;腹针疗法对腰椎内固定术后残余神经症状的临床疗效观察[A];2011中国针灸学会年会论文集(摘要)[C];2011年
2 邹季;李瑛;;“三联序贯疗法”辨证论治腰椎间盘突出症(附516例临床分析)[A];中国骨伤发展战略高层论坛暨中西医结合骨伤学术大会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王锡三;硬膜外腔复合液注射对实验动物的影响[D];重庆医科大学;2002年
2 吕宏;体内自降解防硬膜外粘连及其复合药物缓释膜的研究[D];第二军医大学;2002年
3 吴一民;珍珠层可降解人工骨的生物相容性及其在脊柱融合中的应用[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
4 罗彦凤;聚(DL—乳酸)的改性及体外降解和细胞相容性研究[D];重庆大学;2003年
5 赵建华;骨修复材料PDLLA/HA/DBM的研制及其应用基础研究[D];第三军医大学;2003年
6 肖海军;预防粘连羧甲基壳聚糖复合膜的制备工艺及医学应用实验研究[D];第二军医大学;2006年
7 苏云;干扰素/PLGA及壳聚糖/PLGA复合膜防止椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连的实验研究[D];吉林大学;2007年
8 夏平光;几丁糖预防手术后组织粘连的机理及其水凝胶促进大鼠皮肤创面愈合的实验研究[D];第二军医大学;2007年
9 艾永平;不饱和聚酯酰(亚)胺树脂合成及复合材料性能研究[D];湖南大学;2008年
10 邰东旭;活血利水方干预腰椎间盘突出症处方优化的文献与实验研究[D];辽宁中医药大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 苏长辉;局部应用丝裂霉素C在预防硬膜外粘连的安全性研究[D];南京医科大学;2010年
2 陈鹏;聚乙丙交酯膜预防硬膜外瘢痕粘连的实验研究[D];山东中医药大学;2010年
3 贾中波;补阳还五汤治疗腰椎间盘突出症术后残留神经综合征的临床观察[D];福建中医药大学;2011年
4 周明;身痛逐瘀汤加减治疗腰椎术后综合征腰腿痛的临床疗效观察[D];南京中医药大学;2011年
5 王晓东;两种术式治疗腰椎间盘突出的疗效比较[D];延边大学;2011年
6 刘帅;新型改良单开门微型钛钉-钛板内固定的生物力学研究[D];第四军医大学;2011年
7 胡光柱;香丹经心包引流管灌洗预防心脏术后心包粘连的实验研究及临床应用初探[D];湖北中医药大学;2011年
8 高琦;自体脂肪颗粒移植联合川芎嗪隆胸临床疗效研究[D];大连医科大学;2011年
9 陈蓟;丹参卡波姆凝胶预防椎板切除术后瘢痕形成的实验研究[D];暨南大学;2001年
10 萨拉.伊萨;多节段腰椎间盘突出症的临床分析和治疗手段的研究[D];广西医科大学;2001年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 侯春林,盛志坚,卢建熙,曹梅讯,吴清基;几丁质缝合线体内吸收的实验研究[J];第二军医大学学报;1994年05期
2 项耀钧,王秋根;壳多糖预防椎板切除后硬膜周围纤维化与粘连的作用[J];第二军医大学学报;1997年05期
3 王秋根,高建章,刘植珊,赵杰;高压氧对周围神经损伤再生作用的实验研究[J];解放军医学杂志;1991年05期
4 吴尧忠,倪正,许慧琪,蔡雪珠;丹参活血化瘀作用及机理探讨[J];南京中医药大学学报;1995年06期
5 刘裕;孙晓莉;乐效翚;张燕冬;魏新华;;黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老作用研究——Ⅱ.超微形态研究[J];首都医学院学报;1993年04期
6 张新合,高建华;脂肪颗粒注射移植[J];实用美容整形外科杂志;1999年03期
7 李天全;生物组织固定剂戊二醛的化学和应用[J];生物医学工程学杂志;1988年02期
8 马霄;;猪油预防肠粘连的实验研究及临床应用[J];陕西新医药;1978年01期
9 张振钧;羊膜的生理结构与功能[J];实用妇科与产科杂志;1989年02期
10 张晶,何静雯,王泰龄,赵静波;苦味酸天狼猩红偏振光法鉴别Ⅰ型及Ⅲ型胶原纤维[J];中华病理学杂志;1996年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨中华;王行环;王怀鹏;罗耀雄;刘久敏;;以纤维蛋白凝胶为支架构建组织工程胃新膀胱的研究[J];现代泌尿外科杂志;2007年05期
2 段小军;张洪鑫;杨柳;王东武;陈光兴;李忠;;改进型纤维蛋白凝胶种植技术在组织工程骨体外构建中的应用[J];生物医学工程与临床;2006年05期
3 兰海;黄富国;杨志明;罗静聪;李秀群;;体外培养前脂肪细胞与生物衍生材料小肠黏膜下层复合的黏附状态[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年10期
4 王娅;冯扬;唐休发;;纤维蛋白凝胶在组织工程中的应用[J];国际口腔医学杂志;2008年S1期
5 梁伟中;脂肪组织工程研究进展[J];国外医学.生物医学工程分册;2002年04期
6 陈洁;赵扬冰;唐耘熳;敬静;;乳房组织工程重建研究进展[J];中华医学杂志;2007年04期
7 朱茗;高建华;鲁峰;;脂肪组织再生的组织工程研究进展[J];中国美容整形外科杂志;2007年03期
8 李世龙;刘毅;;脂肪组织工程研究进展[J];中国美容医学;2011年06期
9 谭洪波;杨柳;段小军;左镇华;戴刚;;骨组织工程支架体外血管化初步研究[J];重庆医学;2007年06期
10 庄建华;卓阳;曾兴业;;经RNAi诱导的前脂肪细胞构建组织工程化脂肪组织[J];中国美容医学;2008年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈馨;邱凯;刘建伟;万昌秀;;组织工程用三维基质水凝胶的初步研究[A];第九届全国生物材料学术会议(CBMS-9)论文集[C];2002年
2 张西正;;生物力学在组织工程中的应用[A];第九届全国生物力学学术会议论文汇编[C];2009年
3 白晓峰;田卫东;陈希哲;;组织工程血管化的相关研究[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年
4 李雪盛;孙建军;姜伟;刘肖;;组织工程化缓释BMP-2听骨赝复物听泡植入对豚鼠耳蜗功能的影响[A];2010全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2010年
5 周呈文;王常勇;Descamps Michel;卢建熙;;磷酸钙多孔生物陶瓷作为组织工程支架的应用研究[A];第九届全国生物材料学术会议(CBMS-9)论文集[C];2002年
6 魏清荣;万昌秀;刘建伟;赵强;;组织工程用牛心包材料体外降解规律初步研究[A];第九届全国生物材料学术会议(CBMS-9)论文集[C];2002年
7 杨德业;张怀勤;季亢挺;黄晓燕;徐力辛;;内皮祖细胞在制备组织工程血管中的角色[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
8 古松钢;许建衡;;干细胞与组织工程研究的新进展[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
9 孙庆兰;张西正;张华;李瑞欣;郭勇;张燕;;组织工程血管支架材料的研究进展(综述)[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
10 蔡绍皙;卢晓;王远亮;王红兵;潘君;叶志义;黄岂平;秦建;吴泽志;;组织工程的一组基础实验研究:细胞与支撑介质间的相互作用[A];“力学2000”学术大会论文集[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 汪敏华;组织工程:再造器官可能圆梦[N];解放日报;2001年
2 丁香;成人干细胞的突破——首次组织工程气管移植成功[N];中国医药报;2008年
3 沈英甲;组织工程:新的医学奇迹[N];中国中医药报;2001年
4 记者  邱曙东;上海正开展兔子膀胱修复实验[N];解放日报;2006年
5 记者 张建松;上海梦想“掏心换肝”[N];新华每日电讯;2001年
6 本报记者 王春 特约通讯员 李佳;探访组织工程“梦工厂”[N];科技日报;2005年
7 记者 张建国;首届生物材料与组织工程产品质量控制国际研讨会举行[N];中国医药报;2009年
8 记者 毛黎;美找到获得组织工程血管新途径[N];科技日报;2007年
9 本报记者 吴洁;为实现“人体配件工厂”的梦想[N];科技日报;2002年
10 本报记者 唐闻佳;“一只假耳朵,骗取三个亿”?[N];文汇报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周晓东;胎盘基质干细胞骨向分化及生物反应器构建骨组织的修复效果[D];第四军医大学;2005年
2 孙晓红;种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究[D];中国医科大学;2005年
3 戚孟春;BMP-7基因修饰的自体骨髓间充质干细胞促进大鼠下颌牵张成骨的实验研究[D];四川大学;2005年
4 郑毅雄;人骨膜间质祖细胞作为组织工程种子细胞的分子特征研究[D];浙江大学;2006年
5 唐月军;纳米增韧(HA-ZrO_2系)生物复合多孔陶瓷的制备及其颌骨缺损修复实验研究[D];第二军医大学;2006年
6 高峰;组织工程补片修补犬腹主动脉的实验研究[D];中国协和医科大学;2003年
7 符彦基;骨形成蛋白-7基因修饰的骨髓间充质干细胞对肾缺血再灌注损伤修复作用的实验研究[D];南昌大学;2008年
8 吴志伟;人胚雪旺细胞组织工程神经的构建[D];复旦大学;2004年
9 顾春虎;去细胞猪主动脉瓣构建组织工程心脏瓣膜的初步实验研究[D];第四军医大学;2005年
10 张微波;牙髓干细胞体外分化能力的研究[D];武汉大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周伟;3T3-L1前脂肪细胞与纤维蛋白凝胶构建组织工程脂肪的体外实验研究[D];大连医科大学;2007年
2 陈亚楠;组织工程脂肪移植预防硬膜外瘢痕形成[D];大连医科大学;2009年
3 兰海;前脂肪细胞与小肠粘膜下层构建组织工程脂肪的体外实验研究[D];四川大学;2004年
4 郭银铃;采用经EDC交联的纤维蛋白凝胶作为可注射性软骨细胞支架材料的研究[D];复旦大学;2009年
5 常庆;AdLacZ基因修饰的山羊耳软骨细胞复合F127构建组织工程化软骨的实验研究[D];苏州大学;2007年
6 陈伟豪;丝素蛋白膜修复犬尿道缺损的实验研究[D];南方医科大学;2008年
7 李娜;组织工程中应变对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
8 刘超;人骨髓干细胞成牙潜能的初步研究[D];福建师范大学;2005年
9 刘伟鹏;骨髓间充质干细胞复合PLGA支架修复组织损伤的实验研究[D];江西医学院;2005年
10 张兆清;复合骨髓间充质干细胞的组织工程皮肤修复皮肤缺损[D];第四军医大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026