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《大连医科大学》 2008年
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神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注后TGF-β_1和IL-1β表达的影响

张洪妹  
【摘要】: 目的:本实验利用大鼠中动脉缺血再灌注模型(MCAO),以免疫组织化学方法观察脑缺血2h再灌注不同时间点转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1)和白介素-1β(Interleukin-1β)的表达,并观察NGF对其表达的影响,探讨神经生长因子(nerve growth factor)的脑保护作用,为临床应用NGF治疗脑梗死提供理论依据。 方法:健康成年SD大鼠55只(由大连医科大学实验动物中心提供),雌雄不限,体重200-250克,清洁级,饲养环境温度21℃,自由进食水。随机分为假手术组5只(第1组),对照组30只,按缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h再分为6组(分别为第2、3、4、5、6、7组),每组5只,NGF组10只(第8组)和生理盐水对照组10只(第9组)。参照Nagasawa报告的方法,用10%的水合氯醛(0.35毫升/100毫克腹腔注射)麻醉动物,取仰卧位固定在手术台上,行右侧大脑中动脉闭塞术,颈部正中切口,分离出右侧颈总、颈外和颈内动脉,结扎颈外动脉分支起始处,颈总动脉近心端,在颈总动脉分叉处剪一小口,把头端蘸有肝素的直径为0.2mm的高弹力鱼线向颈内动脉端插入,继续向前推进直到感觉有轻微阻力,即约18mm,提示已到大脑中动脉起始部。2h后缓慢拔出鱼线即可实施再灌注。动物苏醒后观察其体态及行为,以判断大脑中动脉闭塞模型成功与否。假手术组插入鱼线后马上抽出,余步骤同手术组。缺血再灌注模型动物清醒后,左侧前肢屈曲内收者为研究对象。第8组大鼠分别于再灌注后2h、24h肌肉注射NGF(每100克体重NGF 500BU/0.1毫升),第9组以同样方法注入相同体积的无菌生理盐水。按Zea Long 5分制标准评分进行各组大鼠神经功能评价:经过免疫组化和HE染色检测大鼠脑内TGF-β1和IL-1β的表达。 结果:(1)神经功能评分:2-9组分别为:2.000±0.7071,2.200±0.4472,2.400±0.5477,2.600±0.5477,2.800±0.4472,3.000±0.0000,1.400±0.6253, 2.300±0.3650 ,2.200±0.6903,3.100±0.0038。其中NGF组(8组)与相应的缺血再灌注盐水(9组)对照组比较,神经功能障碍明显减轻。(P﹤0.01)。(2)脑缺血再灌注后,大鼠脑内IL-1β的表达量增多,并于再灌注后2h达高峰,以后逐渐减少。TGF-β1于24h达高峰,以后逐渐减少。(P﹤0.01)。与缺血再灌注组相比,肌肉注射NGF,可使脑内,TGF-β1表达量增多,IL-1β的表达量减少。(P﹤0.01)。 结论:肌肉注射NGF对脑缺血再灌注有明显的保护作用,IL-1β的表达量减少及TGF-β1表达增多可能是其机制之一。
【学位授予单位】:大连医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R741

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