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《大连医科大学》 2009年
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大黄素对重症急性胰腺炎SIRS大鼠腹腔巨噬细胞ICAM-3的体外作用

安冀中  
【摘要】: 背景和目的:全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)是1991年8月由美国胸科医生协会(ACCP)和危重病医学会(SCCM)联席会议提出的一个新概念,同时制定了SIRS的诊断标准。这个概念反应了一个与原因无关的,机体固有的免疫反应导致的全身反应综合现象。这种全身性的非特异性炎症反应,最终导致机体对炎症反应的失控。不平衡或过度的炎症反应是造成脏器损害的病理基础,可引起微循环障碍,严重时可发生休克或多脏器功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)。一旦MODS发生,治疗十分困难,病人预后极差,医疗费用及死亡率都将大大提高。因此,阻断SIRS向MODS的进展是降低危重病病死率的关键。近年研究发现,中性粒细胞是炎性细胞白细胞中功能最活跃,寿命最短的一种。Brown等发现中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMN)的数量与功能的变化与脓毒症的发生发展密切相关。如果在体内PMN不能被及时清除,则会释放炎症介质,如IL-6、IL-8等细胞因子,蛋白酶,以及氧自由基,引起“呼吸爆发”,造成恶性循环,从而加重SIRS。故而PMN的凋亡被认为是炎症反应得以无损伤收敛的一个重要机制。所以通过促进PMN凋亡控制炎症反应,是目前临床治疗炎症和感染性疾病的新观念。细胞间黏附分子-3(intercellular adhesion molecule-3,ICAM-3)是免疫球蛋白超家族中的一员,是除ICAM-1,ICAM-2外的淋巴细胞功能相关抗原-1(lymphocyte function-associated antigen-1,LFA-1)的第三个受体。参与细胞黏附,协同刺激和信号传导。在免疫反应初期起着初始化作用。目前发现主要是白细胞表达ICAM-3,尤以静止淋巴细胞,单核细胞,中性粒细胞呈高表达。凋亡细胞上的ICAM-3通过某种桥连分子与巨噬细胞CD14作用引起Ca2+流动导致磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine, PS)外翻,从而促进凋亡细胞的清除。本实验旨在研究在重症急性胰腺炎导致全身炎性反应综合征的大鼠模型中,大黄素和地塞米松体外对腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage pMΦ)ICAM-3蛋白表达水平的变化。 方法:经胆胰管逆行注入1.5%去氧胆酸钠溶液制备大鼠SAP/SIRS模型。重症急性胰腺炎SIRS模型制备:20只SD大鼠随机分为2组,即:假手术组、重症急性胰腺炎SIRS模型组,每组10只。体外干预实验:将假手术组取出的腹腔巨噬细胞单独设为1组(SO组);将重症急性胰腺炎SIRS模型组取出的腹腔巨噬细胞分3组,即:大黄素(EMO)干预组、地塞米松(Dex)干预组、对照组(CON)。EMO干预组(干预终浓度为5ug/ml,乙醇的终浓度0.1%);Dex干预组(干预终浓度为0.1umol/ml),各干预组于巨噬细胞贴壁后(MΦ培养24h)给药。造模24h后采取标本做病理检查和各项指标检测。 光镜下观察各组胰腺标本病理变化,应用流式细胞仪检测ICAM-3的表达。应用髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)法检测巨噬细胞的吞噬能力,应用免疫荧光技术检测ICAM-3的表达。 结果: 1.胰腺组织病理学改变:与假手术组比较,SIRS模型组具有显著性病理改变。 2.各组大鼠腹腔pMФ吞噬凋亡PMN能力的比较: (1).与假手术组比较,SIRS模型组巨噬细胞吞噬能力明显下降,具有显著差异(2.0±0.5 vs. 3.4±0.6,P0.05); (2).与对照组比较,大黄素干预组吞噬能力明显增加(2.8±0.2 vs. 2.0±0.5,P0.05),地塞米松干预组吞噬能力明显大于对照组(2.4±0.3 vs. 2.0±0.5,P0.05); (3).各组间比较:大黄素干预组与地塞米松干预组比较,大黄素干预组吞噬能力明显增加(2.8±0.2 vs. 2.4±0.3,P0.05)。 3.流式细胞仪检测各组细胞ICAM-3表达情况比较 (1).与假手术组比较,SIRS模型组ICAM-3表达明显下降(12.57±5.37 vs. 26.12±3.32,P0.05); (2).与对照组比较,大黄素干预组ICAM-3表达明显升高(22.40±2.25 vs. 12.57±5.37,P0.05),地塞米松干预组ICAM-3表达明显升高(16.64±5.36 vs. 12.57±5.37,P0.05); (3).各组间比较:大黄素组与地塞米松组比较,大黄素组ICAM-3表达明显增加(22.40±2.25 vs. 16.64±5.36,P0.05)。 4.免疫荧光技术检测各组细胞ICAM-3表达情况比较 (1).与假手术组比较,SIRS模型对照组ICAM-3表达明显下降(37.5% vs80%,P0.05); (2).与对照组比较,大黄素干预组ICAM-3表达明显升高(87.5%vs37.5%,P0.05),地塞米松干预组ICAM-3表达明显升高(75% vs.37.5%,P0.05); 结论:较假手术组,SAP/SIRS模型组大鼠胰腺组织病理改变程度严重,大黄素干预组pMΦ的ICAM-3表达较对照组及地塞米松干预组升高,提示大黄素可能通过改变巨噬细胞的胞膜ICAM-3的表达水平,增强pMΦ吞噬及清除凋亡细胞的能力。
【学位授予单位】:大连医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R285.5

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【引证文献】
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1 安冀中;大黄素对重症急性胰腺炎SIRS大鼠腹腔巨噬细胞ICAM-3的体外作用[D];大连医科大学;2009年
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