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《大连医科大学》 2009年
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转染SSTR2对人胰腺癌细胞抑制作用的研究

金实  
【摘要】: 前言:胰腺癌在西方国家居癌症死亡原因的第四位,尽管最近几十年外科手术治疗、化学治疗以及放射治疗取得很大进展,死亡率仍等于发病率,1年生存率约为12%。生长抑素能抑制表达2型生长抑素受体的胰腺癌细胞的生长,对于不表达2型生长抑素受体的胰腺癌细胞则没有作用。2型生长抑素受体在正常的胰腺外分泌细胞中表达,而在胰腺外分泌腺癌、转移癌细胞以及大多数胰腺癌细胞株中很少表达。2型生长抑素受体表达可能是胰腺癌细胞失去的一个重要的肿瘤抑制途径。 目的:我们通过构建包含SSTR2基因的腺病毒载体( AdCAG- SSTR2)转染SSTR2丢失的人胰腺癌BxPC-3细胞,观察对胰腺癌细胞肿瘤特性的影响,探讨其作用机制。构建含有COX-2基因启动子和SSTR2基因的腺病毒载体(AdCOX-2L-SSTR2)转染胰腺癌细胞以评估COX-2基因启动子的启动效率。观察苦参碱结合SSTR2基因转染能否增强对细胞增殖的抑制作用和阐明其作用机理。 方法:分别应用空载体、AdCAG-SSTR2转染生长抑素受体阴性的人胰腺癌细胞株BxPC-3。RT-PCR和Western印迹法分析检测SSTR2在细胞中的表达。对非转染细胞,转染空载体细胞和转染SSTR2细胞使用血球计数板直接细胞计数测定细胞生长速度。采用流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)标记法检测细胞凋亡。Real Time PCR检测PCNA、Fas、Bax、Bcl-xl、VEGF和MMP9的表达。 AdCAG-SSTR2和AdCOX-2-SSTR2重组腺病毒分别转染胰腺癌细胞,RT-PCR和Western印迹法分析检测SSTR2在细胞中的表达。Real Time PCR检测Bax、VEGF的表达。 未转染胰腺癌细胞、转染AdCAG-SSTR2细胞、应用苦参碱细胞及转染AdCAG-SSTR2联合应用苦参碱细胞采用流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)标记法检测细胞凋亡。Real Time PCR检测Bax、Bcl-xl的表达。 结果:AdCAG-SSTR2基因重组腺病毒转染胰腺癌细胞后可以检测到SSTR2mRNA和蛋白的稳定表达,转染SSTR2后细胞生长受到抑制,与对照组差异有显著性意义(P0.01)。转染SSTR2后细胞凋亡发生率为9.45%,对照组凋亡发生率分别为0.33%、1.34%,与对照组差异有显著性意义(P0.01)。同时检测到Fas、Bax的表达量升高,是对照组的1.99倍、3.18倍;Bcl-xl、VEGF、MMP9的表达量降低,分别是对照组的0.34倍、0.23倍及0.3倍。 AdCOX-2-SSTR2重组腺病毒转染胰腺癌细胞则未检测到SSTR2mRNA和蛋白明显的表达,Bax、VEGF的表达也无明显变化,分别是对照组的1.23倍、1.12倍。 苦参碱组细胞凋亡发生率为5.86±1.01%;AdCAG-SSTR2组细胞凋亡发生率为9.45±0.87%;AdCAG-SSTR2+苦参碱组细胞凋亡发生率为11.92±0.56% ;对照组细胞凋亡发生率为0.33±0.02%。苦参碱组与AdCAG-SSTR2组差异有显著性意义(P0.01);苦参碱组与对照组、AdCAG-SSTR2+苦参碱组间差异有显著性意义( P 0.01)。苦参碱组及AdCAG-SSTR2+苦参碱组Bcl-xl的表达下降,分别是对照组的0.67倍和0.19倍;苦参碱组Bax的表达无明显变化,是对照组的1.23倍,AdCAG-SSTR2组与AdCAG-SSTR2+苦参碱组Bax的表达无明显变化,分别是对照组的3.18倍和3.21倍。 结论: SSTR2通过诱导胰腺癌细胞凋亡发挥抗肿瘤增殖的作用,其机制可能与上调Fas、Bax的表达,下调Bcl-xl的表达有关。 VEGF、MMP9表达下降提示SSTR2可以在胰腺癌的抗血管生成治疗中发挥作用。在胰腺癌细胞株BxPC-3中COX-2启动子驱动SSTR2表达未显示出肿瘤特异性启动子的优势。 苦参碱能促进细胞凋亡并增强SSTR2的作用,其机制可能与下调Bcl-xl的表达有关,而与Bax的表达无关。苦参碱在胰腺癌的治疗中显示出潜在的价值。
【学位授予单位】:大连医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R735.9

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