收藏本站
《大连医科大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Sinomenine对移植肝急性排斥反应影响及CDFI、IBS对肝脏病理损害评价的实验研究

蔡振刚  
【摘要】: 肝移植已经成为治疗终末期肝病、急性肝衰竭的唯一有效的方法。临床肝移植技术的发展有赖于实验动物的研究,大鼠原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT)模型由于其价格低廉、饲养管理便捷、操作简单、遗传背景清晰等成为众多实验动物模型的首选,是研究肝脏移植器官保存、缺血-再灌注损伤、血流动力学、免疫抑制剂、移植排斥反应及免疫耐受的理想动物模型。经过30多年中外学者的改进,“二袖套法”成为广泛采用的经典术式。国内由于鼠种、价格等诸多因素,广泛选用SD与Wistar大鼠进行移植,认为SD-Wistar是一组高排斥反应的模型。 在肝移植治疗方面尽管各种新的免疫抑制剂不断问世,但移植后的排斥反应仍无法完全避免,诱导移植物抗原免疫耐受,成为解决器官移植排斥的根本方法。此外,免疫抑制剂和抑制方案仍存在不少弊端,寻找高效、低毒及价格低廉的免疫抑制药物为临床移植学界日益关注。青藤碱(sinomenine,SIN)是从防己科防己属青风藤中分离出的主要活性成分,分子式为C19H23NO4,具有镇痛、抗炎等作用,临床主要用于类风湿的治疗,疗效确切。近年来经中、日等国学者的研究,青藤碱的免疫抑制作用受到高度重视。 在移植肝脏的病理诊断学方面,彩色多普勒是目前最为常用的影像诊断工具,应用彩色多普勒可以对移植肝脏血流进行监测,了解血流动力学变化,但由于二维图像缺乏客观性,影响了其对移植后排斥反应的诊断价值。背向散射积分技术是近年发展起来的组织定征技术,与组织的病理改变有较好的相关性,有望成为又一重要的诊断技术。 本实验以大鼠原位肝移植为模型,探讨青藤碱对大鼠原位肝移植急性排斥反应的作用机制,以及联合环孢素A的治疗效果,同时应用彩色多普勒与背向散射积分技术监测治疗后大鼠肝脏的声学特征,为青藤碱的临床应用和背向散射积分技术的术后监测提供理论依据。 第一部分大鼠肝移植模型的建立和术式改进 目的:探讨两种改进型大鼠肝移植手术术式对大鼠生存率的影响。 方法:经典术式组建立SD-Wistar模型70例,改进术式组35例,比较无肝期时间、肝上下腔静脉吻合时间和大鼠一周生存率。观察经典术式组大鼠的生存时间和肝脏病理改变。 结果:经典术式组无肝期20.3±1.6min;吻合肝上下腔静脉时间10.7±1.3min。改进术式组无肝期26.7±4.1min;吻合肝上下腔静脉时间15.1±1.7min。一周生存率,经典术式组17.1%,改进术式组91.4%。经典手术组12只手术成功大鼠生存时间11-22天,平均为14.8±2.8天,大鼠死亡后肝脏病理表现为WilliamsⅢ级。 结论:SD-Wistar大鼠原位肝移植模型是一组高排斥反应模型。通过改进肝上下腔静脉离断方式和门静脉袖套制作技术,能够提高大鼠血管吻合质量。大鼠术后能否长期存活的关键在于良好的肝上下腔静脉、门静脉吻合,吻合质量较无肝期时间更为重要。 第二部分青藤碱对大鼠原位肝移植急性排斥反应影响的实验研究 目的:探讨青藤碱、环孢素及两者联合应用对大鼠肝移植模型排斥反应的影响 方法:正常组:8只Wistar大鼠为空白对照。建立SD-Wistar OLT模型,分为四组,对照组:8只未予药物干预,CsA组:8只给予环孢素A30㎎/㎏/d,SIN组:8只给予青藤碱40㎎/㎏/d,CsA+SIN组:8只给予青藤碱40㎎/㎏/d+环孢素15㎎/㎏/d。检测肝功、肾功变化,ELISA法比较各组血浆中IL-2、IL-10、sICAM-1情况,免疫组化法分析肝内TGF-β1表达情况, RT-PCR法分析肾脏TGF-β1mRNA表达情况,TUNEL法分析肝脏内淋巴细胞的凋亡情况,HE染色分析肝脏的病理损害。 结果:①对照组肝脏功能损害最为明显,谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高,总胆红素升高、直接胆红素明显升高。各组间尿素氮和肌酐均无显著性差异。②CsA组、SIN组、SIN+CsA组IL-2明显低于对照组(P0.05)。③SIN、SIN+CsA明显刺激IL-10分泌(P0.05),CsA无明显作用。④对照组sICAM-1明显高于其他四组(P0.05),随着损伤程度减轻sICAM-1呈下降趋势。⑤各组肝脏表达的TGF-β1蛋白和肾脏TGF-β1mRNA表达均有显著性差异(P0.05),并CsA组表达最高。⑥移植后肝内汇管区淋巴细胞凋亡以SIN+CsA组最为明显。⑦血浆sICAM与肝脏病理损害间呈正相关(r=0.875,P0.01)。 结论:①SIN能够抑制促炎性因子IL-2、sICAM-1的分泌,促进抑炎性因子IL-10、TGF-β1的表达,抑制炎症反应;②SIN与CsA联合作用能够促进汇管区的淋巴细胞凋亡,诱导免疫耐受的形成;③SIN与CsA联合作用能减少CsA的用量,减轻肾脏纤维化因子TGF-β1的表达;④sICAM-1是监测排斥反应发生和评价抗排斥治疗效果的可靠指标。 第三部分应用彩色多普勒与背向散射积分技术对大鼠移植肝脏病理损害的评价 目的:应用彩色多普勒与背向散射积分技术评价移植后大鼠肝脏病理损害和药物的治疗作用。 方法:正常组:8只Wistar为空白对照。建立SD-Wistar OLT模型,分为四组,对照组:8只未予药物干预,CsA组:8只给予环孢素A30㎎/㎏/d,SIN组:8只给予青藤碱40㎎/㎏/d,CsA+SIN组:8只给予青藤碱40㎎/㎏/d+环孢素15㎎/㎏/d。术后4天、10天测量肝脏的IBS和门静脉、下腔静脉的血流速度,术后10天处死大鼠取肝脏组织行病理检查。 结果:①门静脉血流速度:术后4天对照组明显低于各手术组,CsA组与SIN+CsA组速度显著增快,SIN组轻度增快。术后10天血流速度普遍下降(P0.05)。CsA组与SIN+CsA组仍快于正常组(P0.05),SIN组与正常组无差异(P0.05)。②IBS对比:术后4天对照组与SIN组较正常组、CsA组、SIN+CsA组增高(P0.05),CsA组、SIN+CsA组高于正常组(P0.05)。术后10天组间IBS对比:CsA组、SIN+CsA组、SIN组明显下降(P0.05),对照组无明显改变(P0.05)。③相关性:大鼠肝移植后肝脏病理损害程度与IBS呈正相关关系(r=0.814,P0.01),动物模型组内肝脏病理损害与门静脉血流速度呈负相关关系(r=-0.776,P0.01)。 结论:①门静脉血流速度降低提示移植肝脏可能发生排斥反应;②移植肝脏的IBS测定能够判定移植肝脏损害的程度。
【学位授予单位】:大连医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R657.3

免费申请
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李立,李春满,李晓延,胡明道,冉江华,黄明,张炳彦;自制KYL液和UW液保存大鼠肝脏效果的比较[J];中国普外基础与临床杂志;2005年04期
2 石如玲,姜玲玲;胆汁酸对大鼠肝脏过氧化物酶体增殖剂激活受体αmRNA表达的影响[J];河北医科大学学报;2005年05期
3 杨少军,郑昱,马岚;疏肝化脂胶囊对脂肪肝大鼠肝脏形态学的影响[J];中国中医药信息杂志;2005年10期
4 陈龙;王莎莎;周娟;江善祥;;慢性镉接触大鼠免疫细胞活性和免疫介质变化探讨[J];毒理学杂志;2006年02期
5 马红霞;程培英;;乐果急性、亚急性暴露对大鼠胆碱酯酶及细胞色素氧化酶影响的研究[J];吉林农业大学学报;2006年06期
6 宋育林;曾民德;陆伦根;范竹萍;茅益民;;非酒精性脂肪性肝病大鼠PPARα的表达及其意义[J];安徽医学;2008年01期
7 彭霞;袁松华;冯艳玲;贾小芳;杨华;张丽军;;复方鳖甲软肝片治疗免疫性肝纤维化大鼠肝细胞质膜蛋白质组分的变化[J];实用肝脏病杂志;2009年06期
8 姜辉;高家荣;张家富;张睿;;肝乐颗粒对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白表达的影响[J];中国中医药信息杂志;2010年S1期
9 吴静;郑浩;江瑛;苏文;侯金佟;张华;;非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏血管内皮生长因子表达的意义[J];中国比较医学杂志;2010年08期
10 何瑶;熊理守;黄文生;杨荣萍;陈瑜君;任明;;间充质干细胞在肝纤维化形成中的作用[J];中国病理生理杂志;2010年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 宋春娟;俞健;张健东;刘树业;俞新大;;大鼠肝脏F蛋白cDNA的克隆及序列分析[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
2 李卉;周康荣;纪元;管生;赵卫东;张利军;陈财忠;;肝脏退变结节MR诊断的初步实验研究[A];2006年华东六省一市暨浙江省放射学学术年会论文汇编[C];2006年
3 田建广;夏照帆;王光毅;唐洪泰;朱世辉;;缺血对大鼠肝脏胞内钠离子和磷酸化合物的影响[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
4 周雍;吴越;叶煦亭;杨志峰;郑尊;;急性镉中毒大鼠肝脏氧自由基的细胞化学定位研究[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
5 杨能红;汪荣珊;李兴;韩防;潘卫;;双向凝胶电泳分析糖尿病大鼠肝脏蛋白质表达[A];2007年贵州省医学会外科分会学术年会论文汇编[C];2007年
6 于志深;李珏声;刘菱芬;安瑛玉;陈学存;穆乃强;;营养与肝脏的关系及营养性肝损害防治的研究 Ⅳ.自由与限量进食玉米饲料对S~(35)-蛋氨酸进入大鼠肝脏的影响[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编(营养)[C];1964年
7 薛承锐;费乃昕;张玉萍;马涛;;重症急性胰腺炎大鼠肝脏核因子—κB的表达及药物的干预作用的机制研究[A];第六次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会论文汇编[C];2005年
8 蔡金华;冯敢生;;磁标记间充质干细胞肝脏移植的MRI活体示踪[A];中国医师协会放射医师分会首届会员大会暨第四届医学影像山东论坛、山东省第16次放射学会议暨山东省第14届医学影像学学术研讨会论文集[C];2007年
9 王倩;张国倩;杜津;孙丽莎;李昕;;硫化氢预处理影响缺血再灌注大鼠肝脏氧自由基的检测[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
10 冯志杰;姚希贤;王弘刚;;L—精氨酸对离体灌流大鼠肝脏肝内血管阻力的调节作用[A];中国中西医结合学会第十二次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前9条
1 陶春祥;丹参抗肝病作用研究[N];农村医药报(汉);2003年
2 陶春祥;丹参抗肝病作用研究[N];中国中医药报;2003年
3 衣晓峰 陈英云;原发性肝无功能研究出成果[N];中国医药报;2004年
4 记者衣晓峰 通讯员岳金凤;树莓可抑制肝癌细胞生长[N];健康报;2009年
5 勇汇;甘草甜素药用新发现[N];上海中医药报;2000年
6 衣晓峰 岳金凤 记者 李丽云;我学者证实树莓可抑制肝癌细胞生长[N];科技日报;2009年
7 程克铭;浅谈冬虫夏草的临床应用[N];民族医药报;2004年
8 廖定国;交感神经可调控肝脏功能[N];健康报;2001年
9 新讯;上海首次提出肝脏热缺血耐受极限为45分钟[N];医药经济报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蔡振刚;Sinomenine对移植肝急性排斥反应影响及CDFI、IBS对肝脏病理损害评价的实验研究[D];大连医科大学;2009年
2 王石;吸烟相关剂量镉致大鼠肝脏损伤的蛋白质组学研究[D];吉林大学;2010年
3 俞晓军;失血性休克大鼠肝脏差异基因的筛查及EPHX2基因表达的初步研究[D];第二军医大学;2011年
4 许惠仙;草苁蓉环烯醚萜苷对大鼠肝脏癌前病变保护机制的实验研究[D];延边大学;2012年
5 戴小明;匹立尼酸(Wy-14643)对大鼠移植肝冷保存再灌注损伤保护作用的实验研究[D];中南大学;2007年
6 彭磷基;扶正抗癌方、维生素C及两者联用防治肝癌作用的比较研究[D];暨南大学;2009年
7 刘现立;生长激素对梗阻性黄疸大鼠肝脏及胃肠道损害的保护作用[D];吉林大学;2006年
8 向阳;不同预处理对大鼠肝移植供肝保护作用的探讨[D];复旦大学;2005年
9 谢英慧;大鼠肝脏癌变过程中环氧化酶2表达与肿瘤血管生成关系的实验研究[D];山东大学;2005年
10 郭金英;红葡萄酒对心血管系统的保护作用研究[D];西北农林科技大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冯爱娟;大鼠肝细胞L-FABP、FATP4在NAFL形成中的作用[D];第三军医大学;2004年
2 刘旭华;大鼠慢加急性肝衰竭模型的建立及其病理机制初步研究[D];首都医科大学;2007年
3 尹昌生;移植胰岛血管内皮细胞GIPR表达的实验研究[D];重庆医科大学;2007年
4 何芳;甘油二酯食用油对大鼠非酒精性脂肪肝预防作用的研究[D];第二军医大学;2007年
5 马建敏;皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白表达的影响[D];河南师范大学;2008年
6 栗彦琪;褪黑素对大鼠肝移植缺血再灌注损伤保护机制的实验研究[D];山西医科大学;2008年
7 纪志鹏;共刺激分子B7-1,B7-2在大鼠热缺血再灌注肝脏表达的实验研究[D];山东大学;2006年
8 王强;不同治法方药对大鼠脂肪肝kupffer细胞ERK1/2蛋白活性的影响[D];暨南大学;2006年
9 陈慰填;健脾补肾法治疗少精子症的临床及动物实验研究[D];广州中医药大学;2008年
10 李蕊;大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤后共刺激分子B7-1,B7-2表达的实验研究[D];山东大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026